細胞内適応変異導入によるＪＦＨー１株以外の新規Ｃ型肝炎ウイルス感染増殖系の樹立

• 研究課題/領域番号: 23790513
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 村山 麻子 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 協力研究員 (40415534)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2012年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円); 2011年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: ウイルス / 細胞培養 / ゲノム複製 / C型肝炎ウイルス

研究概要

本研究では、JFH-1株以外のC型肝炎ウイルス株を用いた新規感染増殖系の樹立を目的とし、新たに遺伝子型2aのJ6CF株、遺伝子型2bのMA株を用いたHCV感染増殖系を樹立した。それにより、HCVの生活環における遺伝子型またはウイルス株による差異や、薬剤感受性の違いについての比較検討が可能となる。さらに、これらのウイルス株を複製可能にするために必要なJFH-1株の最少領域や導入した変異の情報は、他のウイルス株を用いたさらなる感染増殖系の樹立に役立つと考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] Single strain isolation method for cell culture-adapted hepatitis C virus by end-point dilution and infection (2014)
  • 著者名/発表者名: Sugiyama N, Murayama A, Suzuki R, Watanabe N, Shiina M, Liang TJ, Wakita T, Kato T
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9(5)
• [雑誌論文] Involvement of Hepatitis C Virus NS5A Hyperphosphorylation Mediated by Casein Kinase I-α in Infectious Virus Production (2014)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Matsunaga S, Takahashi H, Nakashima K, Kimura Y, Ito M, Matsuda M, Murayama A,Kato T, Hirano H, Endo Y, Lemon SM, Wakita T, Sawasaki T, Suzuki T
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] NS5B-RNAポリメラーゼの構造と機能 (2013)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、加藤孝宣
  • 雑誌名: 肝胆膵 巻: 67(6) ページ: 918-923
• [雑誌論文] Japanese reference panel of blood specimens for evaluation of hepatitis C virus RNA and core antigen quantitative assays (2012)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Watashi K, Masaki T, Suzuki R, Aizaki H, Mizuochi T, Wakita T, Kato T
  • 雑誌名: J Clin Microbiol 巻: 50(6) ページ: 1943-1949
• [雑誌論文] Novel cell culture-adapted genotype 2a hepatitis C virus infectious clone (2012)
  • 著者名/発表者名: Date T, Kato T, Kato J, Takahashi H, Morikawa K, Akazawa D, Murayama A, Tanaka-Kaneko K, Sata T, Tanaka Y, Mizokami M, Wakita T
  • 雑誌名: J Virol 巻: 86(19) ページ: 10805-10820
• [雑誌論文] A Subclone of HuH-7 with Enhanced Intracellular Hepatitis C Virus Production and Evasion of Virus Related-Cell Cycle Arrest (2012)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Yoshimura S, Ishihara-Sugano M, Masaki T, Kim S, Wakita T, Mishiro S, Kato T
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 7(12)
• [雑誌論文] Production of Infectious Chimeric Hepatitis C Virus Genotype 2b Harboring Minimal Regions of JFH-1 (2012)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Kato T, Akazawa D, Sugiyama N, Date T, Masaki T, Nakamoto S, Tanaka Y, Mizokami M, Yokosuka O, Nomoto A, Wakita T
  • 雑誌名: J Virol 巻: 86(4) ページ: 2143-2152
• [雑誌論文] A Subclone of HuH-7 with Enhanced Intracellular Hepatitis C Virus Production and Evasion of Virus Related-Cell Cycle Arrest. (2012)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Yoshimura S, Ishihara-Sugano M, Masaki T, Kim S, Wakita T, Mishiro S, Kato T
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 7(12) 号: 12 ページ: e52697-e52697
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0052697
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel cell culture-adapted genotype 2a hepatitis C virus infectious clone (2012)
  • 著者名/発表者名: Date T,Tanaka Y.
  • 雑誌名: J Virol. 巻: 86(19) 号: 19 ページ: 10805-10820
  • DOI: 10.1128/jvi.07235-11
  • 査読あり
• [雑誌論文] Japanese reference panel of blood specimens for evaluation of hepatitis C virus RNA and core antigen quantitative assays. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maruyama, A.
  • 雑誌名: J. Clin. Microbiol. 巻: 50(6) 号: 6 ページ: 1943-1949
  • DOI: 10.1128/jcm.00487-12
  • 査読あり
• [雑誌論文] 25-Hydroxyvitamin D3 suppresses hepatitis C virus production (2012)
  • 著者名/発表者名: Matsumura T, Kato T, Sugiyama N, Tasaka-Fujita M, Murayama A, Masaki T, Wakita T, Imawari M
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 56(4) 号: 4 ページ: 1231-9
  • DOI: 10.1002/hep.25763
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of Infectious Chimeric Hepatitis C Virus Genotype 2b Harboring Minimal Regions of JFH-1 (2011)
  • 著者名/発表者名: Murayama A., et al
  • 雑誌名: J Virol 巻: 86 号: 4 ページ: 2143-2152
  • DOI: 10.1128/jvi.05386-11
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo adaptation of hepatitis C virus in chimpanzees for efficient virus production and evasion of apoptosis (2011)
  • 著者名/発表者名: Saeed M, Shiina M, Date T, Akazawa D, Watanabe N, Murayama A, Suzuki T, Watanabe H, Hiraga N, Imamura M, Chayama K, Choi Y, Krawczynski K, Liang TJ, Wakita T, Kato T
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 54 号: 2 ページ: 425-433
  • DOI: 10.1002/hep.24399
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of recombinant hepatitis C virus with NS5A from strains of genotypes 1 and 2 (2011)
  • 著者名/発表者名: Okamoto Y, Masaki T, Murayama A, Munakata T, Nomoto A, Nakamoto S, Yokosuka O, Watanabe H, Wakita T, Kato T
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 410(3) 号: 3 ページ: 404-9
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2011.05.144
  • 査読あり
• [学会発表] An adaptive mutation in NS4A region enhances Hepatitis C Virus replication and virus production in cell culture (2013)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、杉山奈央、脇田隆字、加藤孝宣
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] HCV NS5Aキメラウイルスを用いた第二世代NS5A阻害剤の抗ウイルス活性の評価 (2013)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、杉山奈央、脇田隆字、加藤孝宣
  • 学会等名: 第61回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Evaluation of second-generation NS5A inhibitors against hepatitis C virus by using NS5A replaced JFH-1 viruses and full-length infectious clones other than JFH-1 (2013)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Wakita T, Kato T
  • 学会等名: 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: Washington D.C., USA
• [学会発表] Assessment of antiviral activities of NS5A inhibitors on recombinant HCV replaced with NS5A from genotypes 1 and 2 strains (2013)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Masaki T, Wakita T, Kato T
  • 学会等名: 20th International Symposium on Hepatitis C and Related Viruses
  • 発表場所: Melbourne, Australia
• [学会発表] Identification of cell-culture adapted hepatitis C virus JFH-1 variants by single virus isolation with end-point dilution method (2013)
  • 著者名/発表者名: Sugiyama N, Murayama A, Suzuki R, Shiina M, Wakita T, Kato T
  • 学会等名: 20th International Symposium on Hepatitis C and Related Viruses
  • 発表場所: Melbourne, Australia
• [学会発表] NS5A領域置換HCVキメラ株を用いたNS5A阻害剤の株特異的抗ウイルス活性の評価 (2012)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、杉山奈央、岡本有加、政木隆博、脇田隆字、加藤孝宣
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] C型肝炎ウイルス遺伝子型2b株とJFH-1株のキメラウイルスを用いた抗ウイルス薬評価系の樹立 (2012)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、加藤孝宣、杉山奈央、脇田隆字
  • 学会等名: 第60回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
• [学会発表] Efficient hepatitis C virus production associated with enhanced virus assembly and evasion of cell cycle arrest (2012)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Yoshimura S, Ishihara-Sugano M, Wakita T, Mishiro S, Kato T
  • 学会等名: 63rd Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: Boston, USA
• [学会発表] Infectious Virus Production with Hepatitis C Virus Genotype 2b Genome Harboring Minimal Regions of JFH-1 (2012)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Kato T, Sugiyama N, Wakita T
  • 学会等名: 19th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Venice, Italy
• [学会発表] C型肝炎ウイルス産生効率の良いHuH-7細胞サブクローンの同定と解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、三代俊治、脇田隆字、加藤孝宣
  • 学会等名: 第19回肝細胞研究会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] Efficient hepatitis C virus production associated with enhanced virus assembly and evasion of cell cycle arrest. (2012)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Yoshimura S, Ishihara-Sugano M, Wakita T, Mishiro S, Kato T
  • 学会等名: 63rd Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: Boston, USA
• [学会発表] C型肝炎ウイルス産生効率の良いHuH-7細胞サブクローンの同定と解析. (2012)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、三代俊治、脇田隆字、加藤孝宣
  • 学会等名: 第19回肝細胞研究会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] C型肝炎ウイルス遺伝子型2b株とJFH-1株のキメラウイルスを用いた抗ウイルス薬評価系の樹立. (2012)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、加藤孝宣、杉山奈央、脇田隆字
  • 学会等名: 第60回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
• [学会発表] HuH-7 subclone that supports high HCV production due to high virus assembly (2011)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Yoshimura S, Ishihara- Sugano M, Wakita T, Kato T
  • 学会等名: International Union of Microbiological Societies 2011 Congress. XV International Congress of Virology
  • 発表場所: Sapporo, Japan
• [学会発表] Strain Specific Susceptibility to The Hepatitis C Virus NS5A Inhibitor (2011)
  • 著者名/発表者名: Okamoto Y, Masaki T, Murayama A, Nomoto A, Wakita T, Kato T
  • 学会等名: International Union of Microbiological Societies 2011 Congress. XV International Congress of Virology
  • 発表場所: Sapporo, Japan
• [学会発表] Efficient HCV production system using HuH-7 subclone with high virus assembly efficiency (2011)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Yoshimura S, Ishihara- Sugano M, Wakita T, Kato T
  • 学会等名: 18th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, USA
• [学会発表] Development of recombinant hepatitis C virus with NS5A from strains of genotypes 1 and 2 : virus production and susceptibility to NS5A inhibitor (2011)
  • 著者名/発表者名: Okamoto Y, Masaki T, Murayama A, Wakita T, Kato T
  • 学会等名: 18th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, USA
• [学会発表] 国内献血検体を用いたC型肝炎ウイルス陽性血漿パネルの作製とウイルス量測定法の評価 (2011)
  • 著者名/発表者名: 加藤孝宣、村山麻子、政木隆博、相崎英樹、脇田隆字
  • 学会等名: 第４７回 日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] Efficient HCV production system using HuH-7 subclone with high virus assembly efficiency. (2011)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Yoshimura S, Ishihara- Sugano M, Wakita T, Kato T.
  • 学会等名: 18th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, USA
• [学会発表] Development of recombinant hepatitis C virus with NS5A from strains of genotypes 1 and 2: virus production and susceptibility to NS5A inhibitor. (2011)
  • 著者名/発表者名: Okamoto Y, Masaki T, Murayama A, Wakita T, Kato T.
  • 学会等名: 18th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, USA
• [学会発表] HuH-7 subclone that supports high HCV production due to high virus assembly. (2011)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Yoshimura S, Ishihara- Sugano M, Wakita T, Kato T.
  • 学会等名: International Union of Microbiological Societies 2011 Congress. XV International Congress of Virology.
  • 発表場所: Sapporo, Japan.
• [学会発表] Strain Specific Susceptibility to The Hepatitis C Virus NS5A Inhibitor. (2011)
  • 著者名/発表者名: Okamoto Y, Masaki T, Murayama A, Nomoto A, Wakita T, Kato T.
  • 学会等名: International Union of Microbiological Societies 2011 Congress. XV International Congress of Virology.
  • 発表場所: Sapporo, Japan.
• [学会発表] Identification and analysis of envelope N-glycans required for HCV lifecycle. (2011)
  • 著者名/発表者名: Watanabe N, Murayama A, Date T, Kato T, Aizaki H, Wakita T.
  • 学会等名: International Union of Microbiological Societies 2011 Congress. XV International Congress of Virology.
  • 発表場所: Sapporo, Japan.
• [学会発表] 25-hydroxy- vitamin D inhibits hepatitis C virus replication and production of the infectious viruses. (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsumura T, Kato T, Tasaka-Fujita M, Murayama A, Masaki T, Wakita T, Imawari M.
  • 学会等名: The 62nd Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco, USA.
• [学会発表] C型肝炎ウイルス粒子の産生効率の良いHuH-7細胞サブクローンの分離と同定 (2011)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、三代俊治、脇田隆字、加藤孝宣
  • 学会等名: 第１５回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 福岡
• [産業財産権] C型肝炎ウイルスJ6CF株ゲノム由来の変異体レプリコン(MUTANT REPLICON DERIVED FROM GENOME OF HEPATITIS C VIRUS J6CF STRAIN) (2012)
  • 発明者名: 脇田隆字、村山麻子、加藤孝宣
  • 権利者名: 脇田隆字、村山麻子、加藤孝宣
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2012-05-31
  • 外国
• [産業財産権] C型肝炎ウイルスJ6CF株ゲノム由来の変異体レプリコン (MUTANT REPLICON DERIVED FROM GENOME OF HEPATITIS C VIRUS J6CF STRAIN) (2012)
  • 発明者名: 脇田隆字、村山麻子、加藤孝宣
  • 権利者名: 脇田隆字、村山麻子、加藤孝宣
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2012-05-31
  • 外国
• [産業財産権] 培養細胞で感染性ウイルス粒子産生可能なＣ型肝炎ウイルスJ6CF株変異体 (2011)
  • 発明者名: 脇田隆字、村山麻子、加藤孝宣
  • 権利者名: 脇田隆字、村山麻子、加藤孝宣
  • 出願年月日: 2011