| 研究課題/領域番号 |
23K06262
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分47060:医療薬学関連
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
鈴木 小夜 慶應義塾大学, 薬学部(芝共立), 教授 (90424134)
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| 研究分担者 |
中村 智徳 慶應義塾大学, 薬学部(芝共立), 教授 (30251151)
金 倫基 北里大学, 薬学部, 教授 (00620220)
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| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2024年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2025年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2024年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2023年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
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| キーワード | 移植片対宿主病 / GVHD / 和漢薬 / 桔梗湯 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
移植片対宿主病（GVHD）は、造血器悪性腫瘍や血液悪性疾患等に対する同種造血幹細胞移植後に発生する最も重篤な合併症であり、その制御は治療成功に不可欠である。申請者はこれまでに和漢薬・桔梗湯がGVHD発症との関連が注目されているマクロファージの生存・増殖・分極化に影響する可能性を見出している。
本研究では、マクロファージ細胞を用いたin vitro実験、及び急性／慢性GVHDマウスモデルを作製することにより桔梗湯及び抗炎症作用を有する和漢薬によるGVHD抑制効果及び作用機序を明らかにし（in vivo実験）、新規GVHD予防・治療法の開発を目指す。
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| 研究実績の概要 |
移植片対宿主病（GVHD）は、造血器悪性腫瘍や血液悪性疾患等に対する唯一の根治療法である同種造血幹細胞移植後に発生する重篤な合併症である。標準一次治療（ステロイド）抵抗性の難治性GVHDは30～70％に及び、重症例は致死的である。近年、新たな二次治療薬も承認されているが、特にRuxolitinibでは骨髄抑制や感染症など重篤な副作用も報告されており、依然として有効かつ安全な新規治療・予防法の開発が求められている。
我々は、抗炎症作用を有する和漢薬・桔梗湯に着目し、桔梗湯が近年GVHDとの関連が注目されているマクロファージ細胞の増殖や分極化に影響することを見出したことから本研究課題に着手した。
初年度の2023年度は、まず和漢薬のGVHDに対する有効性のin vivo評価のための急性/慢性GVHDマウスモデル作製条件（X線照射強度、移植細胞数など）の検討に取り組んだ他、臨床所見（GVHD clinical score）、GVHD主要臓器（腸管、皮膚、肝、肺、涙腺等）の病理組織の評価方法について検討した。
2024年度は、2023年度に作製条件を決定した慢性モデルに加え、急性GVHDモデルの作製条件を決定した。これにより急性/慢性GVHDマウスモデルを作製し、桔梗湯のGVHDに対する抑制・軽減効果につきin vivoで評価した結果、急性GVHDモデルにおいてはGVHD群（薬剤非投与群）と比較して桔梗湯投与群では有意に生存率改善させ（p=0.03）、ポジティブコントロールであるステロイド投与群ともほぼ同等の生存率を示した。慢性GVHDモデルにおいても観察終了日のクリニカルスコアはGVHD群（非薬剤投与群）と比較して桔梗湯投与群において有意に低下した。
以上より、抗炎症作用を有する和漢薬・桔梗湯は急性及び慢性いずれのGVHDも軽減させる可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 |
現在までの達成度
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究課題初年度である2023年度に慢性GVHDマウスモデルの作製条件等を検討し、2024年度には急性GVHDマウスモデルの作製条件も検討し、急性及び慢性GVHDマウスモデル作製条件が決定した。これにより、2024年度は実際にこれらのマウスモデルを作製し、桔梗湯のGVHDに対する効果をin vivoにて評価した結果、急性、慢性のいずれのモデルにおいても桔梗湯がGVHDを軽減させる可能性が示され、大きな成果が得られた。
今後は次のステップとして、桔梗湯によるGVHD軽減・抑制効果に関わるメカニズムの検討に進む予定である。
以上より、本研究課題の進捗状況はおおむね順調と考える。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでの検討により、和漢薬・桔梗湯が、急性／慢性GVHDマウスモデルのいずれにおいてもGVHDを軽減する可能性が示唆されたことから、次のステップとしてその作用メカニズムについて検討する。
具体的には、
１）マクロファージを中心とした病態との関連評価：マウスモデルから採取した組織よりマクロファージを採取し、免疫組織染色によりM1/M2サブタイプバランスの変化を評価するとともに、慢性モデルにおいてはマクロファージが産生する線維化関連因子（TGF-βなど）について評価し、桔梗湯による線維化軽減作用とのかかわりについて検討する。急性モデルにおいては、桔梗湯が効果を発揮したことや急性GVHD発症メカニズム、及び急性GVHDの発症には感染も影響しているとの報告があることなどを踏まえ、とくにTLR4/Myd88/NF-κB Signaling Pathwayに注目し、これらの関連分子及びNLRP3の発現挙動とGVHDとの関連についてする。
２）免疫及び炎症状態の評価：脾臓サンプルを用いたフローサイトメトリーによって各群マウスにおけるCD8陽性T細胞とCD4陽性T細胞の存在割合、CD4陽性T細胞中のTh17細胞、Treg細胞の存在割合をフローサイトメトリーにより解析するとともに、採取血液中の炎症性サイトカイン(IL-17,IFNγ)及び炎症抑制性サイトカイン(IL-10, TGFβ)の発現量をELISAにて分析し、急性GVHD発症に関わる免疫細胞及び全身炎症状態と桔梗湯によるGVHD軽減効果について評価する。
３）腸内細菌叢の解析：β多様性の低下がGVHDの悪化に関わるとの報告がある。近年、漢方薬が腸内細菌叢に影響をもたらすことも報告されていることから、マウスモデルから採取した糞便を用いて次世代シークエンス解析によりβ多様性解析を実施する。
今後は、以上について検討していく予定である。
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