| 研究課題/領域番号 |
23K06400
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分49010:病態医化学関連
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
大谷 淳二 神戸大学, 医学研究科, 助教 (10770878)
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| 研究分担者 |
西尾 美希 神戸大学, 医学研究科, 講師 (10467897)
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| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2025年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2024年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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| キーワード | Hippo経路 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
Hippo-YAP経路は、強力なドライバー経路であるものの、その制御機構は未だ不明な点が多く、この経路を標的とする優れた抗癌剤はまだない。本研究では、全ゲノムsiRNAライブラリー、低分子化合物ライブラリーを用いたスクリーニングにより得られたヒット遺伝子、化合物の作用機構を解明し、新規のYAP転写複合体制御機構を提示するとともに、これを標的とした阻害剤探索を行う。
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| 研究実績の概要 |
多種類のがんで転写共役因子YAP/TAZの異常な活性化が認められ、その活性を抑制するHippo経路の構成因子欠損マウスにおいて、種々のがんが早期から高率に発症することから、Hippo-YAP経路のがんの発症、進展における役割に注目が集まっている。本研究では、ゲノムワイドsiRNAスクリーニングにより、YAP依存的な遺伝子転写活性に強力に作用する薬剤標的分子を同定し、YAP活性を標的とした抗腫瘍薬の開発に貢献することを目指している。
YAPによる遺伝子転写の活性を感度良くモニターするレポーター細胞を用いて、ヒト全遺伝子に対するsiRNAライブラリーを用いたスクリーニングを行った。このスクリーニングにおいて、配列特異的RNA結合ドメインを持ち、mRNAの分解、翻訳抑制に働く蛋白質であるRNABPのノックダウンにより、最も強くYAPによる遺伝子転写活性が抑制された。CRISPR/Cas9を用いてRNABPを欠損させた細胞株では、YAP依存的な遺伝子転写が顕著に不活化され、RNABPの過剰発現により、YAP依存的な遺伝子転写が活性化した。ヌードマウスを用いたin vivoでの腫瘍形成実験において、RNABPの過剰発現は腫瘍形成を促進し、RNABPの欠失により腫瘍形成が阻害されたことから、生体内での腫瘍形成にRNABPが寄与することが明らかになった。また、RNABPのYAP活性抑制機構として、RNABPが、YAP抑制因子であるVGLL4の発現を抑制し、YAPを活性化していることを明らかにした。組換え蛋白質を用いたRNABP-RNA結合可視化系確立し、結合阻害剤のスクリーニングを行なっている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
RNABPによるYAP活性制御の分子機構について、YAP活性の制御に重要なRNABPの抑制標的遺伝子としてVGLL4の同定に成功し、YAP転写活性への寄与を、ノックアウト細胞株を作成することで明らかにした。さらに、VGLL4と協調して他の転写コリプレッサーがVGLL4によるYAP下流の転写抑制に必要であることを明らかにすることができた。また、RNABPのRNA結合ドメインと基質RNAの結合阻害剤のスクリーニングに着手できたことから、おおむね順調であるとした。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、RNABP-標的RNA間の結合阻害剤の探索を進め、RNABPを標的としたYAP活性阻害剤を開発する。また、RNABPを過剰発現するトランスジェニックマウスを作成し、マウスの肝臓における過形成、腫瘍形成の有無を検討することを予定している。
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