| 研究課題/領域番号 |
23K06414
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分49010:病態医化学関連
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
橋本 登 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 助教 (90712365)
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| 研究分担者 |
加納 史也 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 助教 (40801626)
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| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2024年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2025年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2024年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2023年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
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| キーワード | 関節リウマチ / 乳歯歯髄幹細胞 / Siglec-9 / 破骨細胞 / 可溶性レクチン / 滑膜線維芽細胞 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
関節リウマチは炎症性自己免疫疾患に分類され、関節の腫脹と疼痛を生じ、進行すると関節の変形を引き起こす。本研究代表者のグループは乳歯歯髄幹細胞無血清培養上清SHED-CM中から同定した分泌型シアル酸結合レクチンSiglec-9(sSiglec-9)が関節炎モデルマウスに対し関節の炎症や骨破壊を抑制することを報告している。しかしながら、その分子メカニズムの詳細には不明瞭な点が多い。本研究では、sSiglec-9が破骨細胞と滑膜線維芽細胞に対してどのような影響を与えるかの全貌を明らかにする。そして病態の理解とこれまでにない分子標的治療薬の開発のための情報的基盤の樹立を目指す。
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| 研究実績の概要 |
ヒト歯髄幹細胞培養上清(SHED-CM)において同定された分泌型Siglec-9(sSiglec-9)による関節リウマチに対する効果の検討をするためにこれまでに以下の検討を行っている。
抗2型コラーゲン抗体カクテル誘導関節リウマチモデルマウス(CAIA)にsSiglec-9またはSHED-CMを投与すると関節炎の病態は未治療群に比べ抑制される。Computed Tomography (CT)によってマウス骨組織を評価したところ骨密度が未治療群に比べ治療群で改善していた。さらに組織解析においてもリンパ球浸潤や骨、軟骨破壊の抑制等の結果が得られた。
当該年度では破骨細胞へのsSiglec-9およびSHED-CMの影響を解析した。破骨細胞はマクロファージ様細胞株RAW264.7やマウス骨髄由来マクロファージから誘導し、in vitroで効果の検討を行った。その結果種々の破骨細胞マーカーの抑制効果がrealtime qPCRやwestern blottingによる発現解析により明らかになった。またTRAP染色やアクチンリング形成等の解析により特に成熟破骨細胞の形成に影響していることが明らかになった。
SHED-CM中の効果因子については液体クロマトグラフィー・質量分析の網羅的解析を実施し、sSiglec-9以外の分子も同定した。
単球系細胞から破骨細胞への分化、成熟化において活性酸素が重要である。sSiglec-9を含むSHED-CMは破骨細胞誘導因子RANKLによる活性酸素ROS産生を阻害し骨細胞分化及び成熟化を阻害することがわかった。その際、抗酸化酵素Heme-oxidase-1(HO-1)やSuperoxide Dismutase 1と2 (SOD1 and SOD2)、glutathione peroxidase 1, 2, 3がSHED-CMによって発現が亢進していた。
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| 現在までの達成度 |
現在までの達成度
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究は関節リウマチにおける破骨細胞と滑膜線維芽細胞に対するSHED-CMおよびsSiglec-9の影響を解析する研究である。破骨細胞分化への影響は分化マーカーの抑制効果やROSの産生阻害によることが明らかになった。すでに効果因子の検索は行なっており破骨細胞に対する影響は概ね順調である。また滑膜線維芽細胞の単離はすでに実施されているため順調に進展している。
しかしながら試薬費、動物費の高騰により現在動物モデルの変更を検討している。具体的にはCAIAからコラーゲン誘導関節炎モデル(CIA)に変更した。CIAモデルはCAIAに比べII型コラーゲン免疫するステップが増え、モデル樹立までに免疫期間（３週間）が余分にかかる。一方で、関節炎モデルとして十分確立されたものであり、より安価に作成できるCIAモデルマウスで本研究を実施する。
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| 今後の研究の推進方策 |
本研究は関節リウマチにおける破骨細胞と滑膜線維芽細胞に対するSHED-CMおよびsSiglec-9の影響を解析する研究である。破骨細胞分化への影響は分化マーカーの抑制効果やROSの産生阻害効果から明らかになった。sSiglec-9単独でこれらの効果が見られるかどうかを検討する。sSiglec-9とその他の効果因子の検索から得られた効果因子候補の精製品を加える、または阻害することによりどの因子が必要なのかを明らかにする。特に破骨細胞分化には他段階の機序がありどの分子がどのステップに関与するのかを明らかにする。
滑膜線維芽細胞の単離はすでに実施され ている。腫瘍壊死因子TNFalphaやインターロイキン1beta等で刺激されたのち炎症状態になるが、その際のsSiglec-9とSHED-CMの効果を検討する。
CIAモデルに変更したことからまずSHED-CMの効果について検討する。今後トランスジェニックマウス等の利用も視野に入れる可能性があるため、これまで実施していたDBA1Jマウスに加えB6マウス検討も進める。
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