| 研究課題/領域番号 |
23K09314
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分57060:外科系歯学関連
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
杉山 悟郎 九州大学, 歯学研究院, 助教 (00722828)
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| 研究分担者 |
高 靖 九州大学, 歯学研究院, 助教 (40585882)
山田 朋弘 九州大学, 歯学研究院, 共同研究員 (60335619)
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| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円)
2025年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2024年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2023年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
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| キーワード | ミリストイル化 / NMT1 / 骨免疫 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
骨芽細胞の免疫機構を考える中で、免疫応答に重要な脂質修飾であるミリストイル化タンパク質の発現量や局在が変化する一方で、触媒酵素であるNMT1の発現量が増加することを明らかにした。このことから、NMT1と結合する機能調節分子の存在が示唆された。本研究では、プロテオミクス解析と大腸菌発現システムを用いた精製タンパク質解析から、NMT1結合分子を同定し、量的および構造的な関係性から相互作用を解明する。免疫沈降実験により結合分子を同定し、遺伝子工学を用いて必要なタンパク質の精製を行うことで相互作用実験を行う。これにより、NMT1結合分子を介した免疫制御機構を解明する分子基盤を構築することができる。
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、骨芽細胞におけるNMT1結合分子を同定し、ミリストイル化タンパク質の基質特異性や局在を調節する機能調節分子の存在を明らかにすることである。目的達成のために、大腸菌発現システムによるタンパク質発現技術を駆使して、その複合体の構造的関係性を明らかにする。これにより炎症と骨免疫の関連性に新たな知見が得られると考え研究を行った。まず、炎症性刺激時のNMT1結合分子を同定するために、NMT1抗体を用いた免疫沈降実験を行った。回収したサンプルをCBB染色で解析すると、刺激していないレーンに比べてTNFa刺激を行った群では2本のバンドが描出された。このバンドをゲルから切り取り、質量分析を行った。すると、2本のバンドともArgBP2というアダプタータンパク質が結合分子として同定された。このことから、NMT1はTNFa刺激でArgBP2を新規結合分子として同定することができた。ArgBP2は主に細胞膜などに局在しているといわれており、NMT1が炎症性刺激時にこの分子と相互作用して局在変化に関与している可能性などが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の計画通り、NMT1抗体を用いた結合実験において、新たな結合分子を同定することができたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後はNMT1の骨芽細胞内の生理的意義やミリストイル化における役割、そして細胞の生存や増殖、分化といった反応におよぼす影響について詳細に検討していく必要がある。そのために、細胞内発現を安定的に行えるコンストラクトの調製を行っていく。
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