| 研究課題/領域番号 |
23K09371
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分57060:外科系歯学関連
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
太田 耕司 広島大学, 医系科学研究科(歯), 教授 (20335681)
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| 研究分担者 |
相川 友直 広島大学, 医系科学研究科(歯), 教授 (00362674)
坂口 剛正 広島大学, 医系科学研究科(医), 教授 (70196070)
小松澤 均 広島大学, 医系科学研究科(歯), 教授 (90253088)
重石 英生 広島大学, 医系科学研究科(歯), 講師 (90397943)
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| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2025年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2024年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | SARS-CoV-2 / 口腔粘膜細胞 / ACE2 / TMPRSS2 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
口腔粘膜における新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)の標的蛋白の発現誘導や免疫応答機能については報告がない。今回の予備実験において口腔粘膜上皮細胞にウイルス摸倣核酸導入によってACE2, TMPRSS2が発現誘導されること，その誘導にウイルス関連受容体が関与していることを発見した。これらの結果から，本研究では口腔粘膜細胞におけるACE2, TMPRSS2などSARS-COV-2標的蛋白の新しい発現誘導機構やウイルス構成成分に対する新規免疫応答機能を明らかにし，SARS-COV-2感染やCOVID-19重症化の鍵となる活性化因子や制御因子を明らかにする。
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| 研究実績の概要 |
新型コロナウイルス感染症の原因ウイルスSARS-CoV-2は標的細胞に侵入する際，エンベロープの構成成分Spike 蛋白が細胞表面のAngiotensin converting enzyme 2(ACE2)に結合し，侵入を開始する。その後，Spike 蛋白は標的細胞のセリンプロテアーゼ Transmembrane serine protease 2(TMPRSS2)に切断され，膜融合が進行する。しかしながら口腔粘膜における新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)の標的蛋白ACE2やTMPRSS2の発現誘導や免疫応答機能については報告がない。
今回の予備実験において口腔粘膜上皮細胞にウイルス摸倣核酸導入によってACE2, TMPRSS2が発現誘導されること，その誘導にウイルス関連受容体が関与していることを発見した。さらにSARS-CoV-2のSpike 蛋白が口腔粘膜上皮細胞におけるIFN-g 誘導性CXCL10を増加すること，またその応答にACE2が関係することを発見した。これらの結果から，本研究では口腔粘膜細胞におけるACE2, TMPRSS2などSARS-COV-2標的蛋白の新しい発現誘導機構やウイルス構成成分に対する新規免疫応答機能を明らかにし，SARS-COV-2感染やCOVID-19重症化の鍵となる活性化因子や制御因子を明らかにする。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ACE2やTMPRSS2が口腔粘膜上皮細胞、線維芽細胞に発現しているかを検討した. RT-PCR法にてACE2やTMPRSS2 mRNA発現を, 蛍光免疫染色法にてACE2蛋白発現を検討した結果, 両細胞において定常的な発現を認めた。二本鎖RNA やDNA の細胞内導入によってACE2 mRNA, 蛋白の発現が増加することをReal-time PCR 法, Western blotting 法にて確認した。siRNAによるRIG-IノックダウンのACE2 発現への影響について検討した結果, 両細胞において二本鎖核酸導入で誘導されるACE2発現が抑制されることが示された。二本鎖RNA やDNA の細胞内導入によって誘導されるACE2 は炎症性サイトカインの存在によって著しく発現が増加することが示唆された。これらの研究結果を日本口腔感染症学会などの学会に報告した。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は口腔粘膜上皮細胞や線維芽細胞にウイルス構成成分，ウイルス模倣核酸，炎症性サイトカインの添加によるTMPRSS2 の発現誘導を検討し、口腔粘膜細胞におけるTMPRSS2 等のセリンプロテアーゼの発現誘導因子を同定する。さらにTMPRSS2の発現に関連する細胞内受容体やシグナル伝達経路を解析する。
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