| 研究課題/領域番号 |
23K09394
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分57060:外科系歯学関連
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
岡部 一登 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 講師 (50801453)
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| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円)
2025年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2024年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | 放射線性顎骨壊死 / エクソソーム / 骨髄由来間葉系幹細胞 / 酸素環境 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
放射線治療は頭頸部がんに対して高い治療効果を有するが、様々な有害事象を必発する。特に晩発性の放射線性顎骨壊死は著しくQOLを低下させるにも関わらず、未だ治療法が確立していない。昨今、難治性疾患に対して、間葉系幹細胞が分泌するエクソソームを用いた新たな治療法が期待されている。エクソソームの組成は培養環境に依存するとされており、本研究では放射線性顎骨壊死をターゲットにして酸素環境が及ぼす影響を最適化し、エクソソームを用いた新たな治療法を確立する。
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| 研究実績の概要 |
放射線治療は頭頸部がんに対して高い治療効果を有するが，口腔粘膜炎や口腔乾燥等の有害事象を必発する.特に晩期に発症する顎骨壊死(ORNJ)は著しくQOLを 低下させるにもかかわらず，未だ治療法は確立していない.研究代表者の最終目的は，難治性疾患であるORNに対して，ヒト骨髄間葉系幹細胞(MSCs)由来エクソソーム（EVs）を用いた治療法を開発することである．培養環境により，MSCsは遺伝子発現や細胞挙動が変化する．特に酸素環境により，EVsの組成が変化することに本研究では着目し，ORNJに対して優れた治療効果を示すEVsを分泌する最適条件を探索する．
MSCsを20％，10％，2％O2の各酸素環境下で培養した後，培養上清から超遠心法によりEVsを回収した．粒径は約100nmであり，ウエスタンブロット法で特異的表面抗原であるCD63，CD81，CD9 を確認した.また透過型電子顕微鏡により形態学的評価を実施した.各環境下で回収したEVsの分泌量を比較した．
現在は，放射線照射したラットMSCsと各環境下で回収したEVsとの共培養による効果に関する評価を開始している．評価項目として，分化能および遊走能，増殖能，血管新生能としている．分化能として， 共培養したラットMSCsを骨芽細胞，脂肪細胞へ分化誘導後にアリザリンレッドS染色，オイルレッドO染色により評価する．遊走能および増殖能は，Gap Closureアッセイ，MTTアッセイで評価する．血管新生能は，各EVsとヒト臍帯血静脈内皮細胞との共培養によるTube formation assayにより評価する．分化能や血管新生能について，骨および血管関連遺伝子であるRunx2，OCN，VEGF-α等の発現量をRT-PCR法でも評価する．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
進捗状況が遅延していることの最大の理由として，研究代表者の研究環境が変わったことが大きい．また，現在着手している実験内容を実施することに支障はないが，安定した結果が得られておらず，テクニカルエラー等の問題点の確認をしている.
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| 今後の研究の推進方策 |
現在着手している内容は時間を要し，テクニカルエラーも生じやすい．前所属施設の研究者に相談することは容易であり，現在の所属施設に本研究における手技，内容に精通している研究者が所属しており，協力体制が整っている．定期的なミーティングを開催し，問題点を随時解決し，研究を推進する予定である．
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