| 研究課題/領域番号 |
23K16777
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分59040:栄養学および健康科学関連
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| 研究機関 | 北海道医療大学 |
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研究代表者 |
高橋 祐司 北海道医療大学, 医療技術学部, 講師 (60804292)
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| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2025年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2024年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2023年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | ApoE-HDL / 脳内脂質代謝 / アストロサイト / アルツハイマー / HDL酸化 / 血小板凝集抑制能 / 老化 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
脳内の脂質代謝は、アストロサイトで合成されたApoEから新生されるApoE-HDLが中心的役割を果たしている。ApoE-HDLは、アルツハイマー病の抑制因子としての報告や、血液中では抗動脈硬化作用を有することから“超善玉リポタンパク質”の可能性が示唆されている。高齢化社会で認知症患者の増加が社会問題となる中、脳内脂質代謝と酸化ストレスは未解明の部分が多数残されている。本研究は、脂質代謝の中心にあるApoE-HDLに酸化刺激を行い、アストロサイトの脂質代謝にどのような変化が生じるのかを明らかにする。
脳内脂質代謝においてApoE-HDLの新たなバイオマーカーとしての可能性を広げるものである。
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| 研究実績の概要 |
本研究は、ヒトの培養アストロサイトを酸化ApoE/A1-HDLによって刺激を行い、細胞内脂質代謝にどのような変化が生じるのかを明らかするため、ApoE-HDLとApoA1-HDLを用いてヒト培養アストロサイトに対する比較実験を行うものである。
１）酸化ApoE/A1-HDL刺激は、細胞内脂質代謝に影響を与えるのか
２）酸化Apo-E HDLとApo-A1 HDLの細胞増殖促進効果は、どの経路を介しているのか
３）アストロサイトからのコレステロール引抜き量は、HDLの酸化により変化するのか
を明らかにすることを目的としている。
令和５年度は、健常人血液から分取した未酸化ApoE/ApoA1-HDLが、細胞内代謝にどのような影響をあたえるのかを確認している。ApoE/ApoA1-HDL刺激後の細胞内変化とリポ蛋白の酸化によりその代謝が変化するかを確認するため、酸化ApoE/A1-HDLを取り込んだアストロサイトの増殖率と遺伝子発現解析として、細胞増殖試験及びリアルタイムPCRにより遺伝子発現を解析している。また、アルツハイマー型認知症に加え、血管性認知症とApoE/ApoA1 HDLとの関連性にも着目し、血小板凝集能に及ぼす影響を確認している。健常人HDL亜分画を添加したADP誘発性血小板凝集の測定法を確立し、ApoA1-HDLとApoE-HDLの血小板凝集抑制能を評価した。血小板凝集能に影響を与える因子として、添加ADP濃度、採取からの測定時間および添加溶液の塩濃度の検討を行い、統一条件を設定した。各HDL亜分画で凝集率に有意差は認められなかったが、ApoA1-HDLとApoE-HDLの両者で二次凝集抑制の傾向があった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
実施時期の多少の前後はあるが、あらかじめ計画している通り研究は進行しているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
アストロサイト表面のレセプター別の酸化ApoE/ApoA1 -HDL取り込み率を明らかにする。コレステロールの引抜き量に差があるのかを確認する。
１）酸化ApoE/ApoA1-HDLの取り込みレセプターの確認
細胞表面のリポタンパク質レセプターの取り込みを確認する。酸化修飾を受けたApoE/ApoA1-HDLは、リポタンパク質表面の特性が変化する可能性がある。アストロサイトが反応するApoE-HDL受容体は、LDL receptor, VLDL receptor, LDL receptor-related proteinの３種類が認められている。siRNAを用いたRNA干渉によりレセプターのノックダウンを行い、取り込み量の変化を確認する。
２）コレステロール引抜き量の比較
アストロサイトからのコレステロール引抜き量に未酸化及び酸化ApoE/ApoA1-HDLに差が生じるのか確認する。確認方法は、重水素標識のコレステロールを24時間培養細胞に取り込ませた後、ApoE/ApoA1-HDLでそれぞれ刺激を行う。上清及び細胞のコレステロール量を、酵素法と質量分析計により解析する。
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