in vivo定方向進化によるタンパク質耐熱化レパートリーの拡張 [転写調節因子への適用]

• 研究課題/領域番号: 23K18002
• 研究種目: 挑戦的研究(萌芽)
• 配分区分: 基金
• 審査区分: 中区分38:農芸化学およびその関連分野
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 中村 顕 筑波大学, 生命環境系, 教授 (10207863)
• 研究期間 (年度): 2023-06-30 – 2026-03-31
• 研究課題ステータス: 交付 (2023年度)
• 配分額: 6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円); 2025年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円); 2024年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2023年度: 2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
• キーワード: Thermus thermophilus / tetR / directed evolution / thermostabilization

研究開始時の研究の概要

タンパク質の熱安定性向上は産業利用の面からも重要であり、様々なタンパク質の耐熱化変異体の取得が試みられてきた。高度好熱菌Thermusを宿主としたdirected evolutionによる耐熱化変異体のスクリーニングは、耐熱化変異を獲得した場合のみコロニー形成できる条件を設定すれば、培養温度の上昇という簡単な操作で変異体を取得できる利点があるが、対象が限定されていた。そこで大腸菌転写調節因子TetRを対象に耐熱化変異体の取得を行う。これによりThermusでtet誘導体の添加という簡単な操作で誘導発現が可能な発現調節系の構築が可能となる上、タンパク質耐熱化レパートリーの拡張が可能になる。