| 研究課題/領域番号 |
23K18216
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| 研究種目 |
挑戦的研究(萌芽)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
中区分49:病理病態学、感染・免疫学およびその関連分野
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
井上 毅 東京大学, 新世代感染症センター, 教授 (80466838)
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| 研究期間 (年度) |
2023-06-30 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円)
2024年度: 5,200千円 (直接経費: 4,000千円、間接経費: 1,200千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
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| キーワード | BCR / CRISPR/Cas9 / B細胞受容体 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究では「誘導的BCRスイッチマウス」の開発を試みる。このマウスでは、末梢の成熟B細胞まで分化させたのち、Cre誘導的に目的のBCRに変換させることで分化過程のネガティブセレクションを回避させ、目的のBCRを発現した成熟B細胞を得ることが可能になる。本研究は、B細胞分化、活性化メカニズムの基礎的理解に貢献するだけでなく、自己免疫疾患研究や広域反応性B細胞を対象とした新規ワクチン開発研究において有用なツールを提供すると期待される。
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| 研究実績の概要 |
本研究では「誘導的BCRスイッチマウス」の開発を試みる。このマウスでは、末梢の成熟B細胞まで分化させたのち、Cre誘導的に目的のBCRに変換させることで分化過程のネガティブセレクションを回避させ、目的のBCRを発現した成熟B細胞を得ることが可能になる。
令和5年度では、本研究系の開発に必要な実験システムの樹立・確認を行った。レトロウイルスによるマウスprimary B細胞へのFLEXカセットの導入及び養子移入実験により、in vivoでB細胞特異的に、誘導的かつ不可逆的な目的遺伝子発現系を確立することに成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
予定通り本研究系の開発に必要な実験システムの樹立を達成できている。
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| 今後の研究の推進方策 |
NPハプテン特異的BCRノックインマウスであるB1-8 flox/+マウスの末梢成熟B細胞に、CRISPR/Cas9を用いてFLEXカセットに逆方向に挟んだ目的BCR遺伝子断片を挿入する。このマウスにin vitroでCreを発現、あるいはCreERT2マウスと交配しin vivoでタモキシフェン誘導的にCreを活性化することにより、目的BCRへのスイッチが可能であるか、またその効率を検定する。
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