| 研究課題/領域番号 |
23K21447
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| 補助金の研究課題番号 |
21H02993 (2021-2023)
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 基金 (2024)
補助金 (2021-2023) |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分55010:外科学一般および小児外科学関連
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| 研究機関 | 福岡医療短期大学 |
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研究代表者 |
田口 智章 福岡医療短期大学, 歯科衛生学科, 学長 (20197247)
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| 研究分担者 |
田尻 達郎 九州大学, 医学研究院, 教授 (80304806)
松浦 俊治 九州大学, 医学研究院, 准教授 (10532856)
梶岡 俊一 国際医療福祉大学, 福岡薬学部, 教授 (90274472)
山座 孝義 九州大学, 歯学研究院, 教授 (80304814)
山座 治義 鹿児島大学, 医歯学域歯学系, 教授 (30336151)
孝橋 賢一 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 教授 (10529879)
樗木 晶子 福岡看護大学, 看護学部, 教授 (60216497)
吉丸 耕一朗 九州大学, 大学病院, 講師 (60711190)
松尾 忠行 福岡医療短期大学, 歯科衛生学科, 教授 (00258584)
中園 栄里 福岡医療短期大学, 歯科衛生学科, 講師 (10343732)
河野 淳 九州大学, 大学病院, 助教 (90758418)
桐野 浩輔 九州大学, 大学病院, 助教 (00621707)
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| 研究期間 (年度) |
2024-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2024年度)
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| 配分額 *注記 |
17,420千円 (直接経費: 13,400千円、間接経費: 4,020千円)
2025年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2024年度: 3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
2023年度: 3,250千円 (直接経費: 2,500千円、間接経費: 750千円)
2022年度: 3,250千円 (直接経費: 2,500千円、間接経費: 750千円)
2021年度: 5,720千円 (直接経費: 4,400千円、間接経費: 1,320千円)
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| キーワード | ヒルシュスプルング病 / 腸管神経節細胞僅少症 / 慢性特発性偽性腸閉塞症 / 間葉系細胞 / 再生医療 / 腸管不全 / ヒルシュスプルング病類縁疾患 / 腸管神経節細胞 / ヒト乳歯歯髄幹細胞 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
継続課題のため、記入しない。
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| 研究実績の概要 |
当該年度は4年目として、以下の解析を計画した。
(1)全国的疾患特異的SHED収集、(2)ヒルシュスプルング病及びヒルシュスプルング病類縁疾患モデルに対する患者由来SHED移植効果の検討、(3)臨床グレードの患者由来SHEDの作成。
(1)に関しては、前年度までに引き続きヒルシュスプルング病類縁疾患患児の脱落乳歯の収集に努めている。また、並行して、SHED収集に向けてう蝕歯予防目的に歯科受診を勧めている。
(2)に関してはヒルシュスプルング病類縁疾患モデルマウスである、JF1/Msの繁殖を行ってきたが難渋しており実際にSHEDを移植することは叶わなかった。一方でモデルマウス繁殖に関して改善点の抽出が行えたため、これを生かして次年度の繁殖につながると考えられる。またSHED移植時に手技成功を目的にして他系統のマウスを用いて移植手技のシミュレーションと実践を行った。移植手技を習熟したことにより実際にマウスへSHED移植し治療効果判定の際には安定したデータ取得が可能になったと考えられた。5年次にモデルマウスの個体が得られ次第順次SHEDの移植を行いその治療効果を評価していく。
(3)に関してはKWBを臨床試験のためのミーティングを定期的に執り行い、SHED投与スケジュールや治療効果項目や副反応評価方法などについて検討を重ねている。
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| 現在までの達成度 |
現在までの達成度
2: おおむね順調に進展している
理由
以下の5項目が当研究のタスクである。
[1] 患児由来SHEDの収集と全ゲノム解析・RNAseqによる遺伝子的背景の解析 [2] 患児由来SHEDの幹細胞生物学的解析 [3] 患児由来SHEDを用いた疾患モデルマウスにおける細胞移植効果の解析 [4] [1][2]の解析結果を踏まえたゲノム編集技術による患児由来SHEDの機能改善 [5] 産学官連携によるシームレスな早期臨床試験の実現。
昨年度までに[2]は順調に進み、hypoSHEDのMSCとしての性質の確認を済ませた。具体的にはpopulation doubling assay、colony forming unit assayにより増殖能を確認し、軟骨細胞・骨芽細胞・脂肪細胞への分化誘導を確認して多能性を確認し、flow cytometryにより細胞表面抗原を確認した。[3] 細胞移植前の評価として疾患モデルマウスの表現型の確認を済ませた。
本年度は実験チームメンバの再編があったため、健常児由来SHED及び患児由来SHEDのモデルマウスへの移植の手技取得とモデルマウスの繁殖に重点を置いて計画を進めた。モデルマウスの繁殖においては計画通りに仔マウスが得られずに実際の移植は行えなかったものの、改善点を抽出できたため、次年度において繁殖を進めSHED移植を行う予定である。移植技術に関しては安定した手技獲得が出来たため手技面における懸念は少なくなったと考えられた。
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| 今後の研究の推進方策 |
次年度モデルマウスの個体数を増やしたのちに患児由来SHED移植を行い、治療効果を確認する。群としては、B6マウス群、JF1-PBS群、JF1-患児由来SHED移植群、JF1-健常児由来 SHED移植群を予定し、以下の方策を遂行予定である。
①腸管蠕動評価：Tissue Organ BathやMEAを用いた生理学的評価(ACh, ET1, NO, 電気的刺激, ペースメーカー波形の評価)
②病理組織学的／分子生物学的評価： 神経節細胞数・神経線維密度・カハール細胞面積(免疫染色)、蛋白発現量の解析(qPCR, ELISA)が予定する解析である。患児由来SHEDと健常児SHEDの治療効果の結果次第で実験計画を順次練る。
臨床グレードの疾患特異的SHEDの作成に関しても推進すべく、我々は、臨床試験のための議論／ミーティングを定期的に執り行っている。今後も、GMPに基づいたSHEDの作成をすすめ、AROやPMDA等、産学官連携を強める。
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