| 研究課題/領域番号 |
23K24144
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| 補助金の研究課題番号 |
22H02882 (2022-2023)
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 基金 (2024)
補助金 (2022-2023) |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分49060:ウイルス学関連
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| 研究機関 | 独立行政法人国立病院機構(名古屋医療センター臨床研究センター) |
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研究代表者 |
岩谷 靖雅 独立行政法人国立病院機構(名古屋医療センター臨床研究センター), その他部局等, 部長 (90303403)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2024年度)
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| 配分額 *注記 |
17,290千円 (直接経費: 13,300千円、間接経費: 3,990千円)
2024年度: 5,850千円 (直接経費: 4,500千円、間接経費: 1,350千円)
2023年度: 5,850千円 (直接経費: 4,500千円、間接経費: 1,350千円)
2022年度: 5,590千円 (直接経費: 4,300千円、間接経費: 1,290千円)
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| キーワード | レトロウイルス / 抗ウイルス作用 / APOBEC3A / RNA / 変異 / 核酸 / 構造 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
宿主由来のAPOBEC3AはDNAのみに作用する酵素であると考えられてきたが, 近年, 申請者らはウイルスのRNAにも変異を導入することを見出した。このRNA編集現象の情報を活用して, 未だ明らかでない, 「APOBEC3Aによる抗レトロウイルス作用, ウイルス遺伝子の多様変化, ならびにその分子機序」を解明する研究を実施する。近視的には, 薬剤耐性ウイルスの出現への影響や新たな疾患との因果関係の発見にもつながる学術的情報を得る。
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| 研究実績の概要 |
本研究課題では、これまで想定していなかった、APOBEC3AによるRNA編集という視点からAPOBEC3Aによる抗レトロウイルス作用と変異導入効果の分子機序、ならびに細胞内制御機序を精査することを目的で研究を行っている。本年度は、1)APOBEC3ファミリーのうち、APOBEC3AのみがRNA編集効果を示す理由の解明、2)レトロウイルの遺伝的多様性への効果について進展があった。まず、APOBEC3AのRNA編集における基質特異性として、RNAの二次構造上のloopやbulge領域に存在するUUCトリヌクレオチドを好むことがわかった。通常、DNAとRNAとではリボースの違いにより塩基間距離が異なり、RNAのUUCはAPOBEC3の基質認識部位への配位に不適である。しかし、RNAのloopやbulge(U-shape構造)ではリボースのsugar packerがDNA型(C2´-endo pucker)に変化するため、UUCの塩基間距離はDNAと近似し、APOBEC3の基質認識部位に認識されることがわかった。さらに、APOBEC3ファミリーのうち、APOBEC3Aのみが酵素基質認識領域のloop1配列が短いため、U-shapeのRNAとの立体障害がなく結合できることが分子構造計算により判明した。これらの理由から、APOBEC3Aのみが高効率なRNA編集作用をもつと考えられた (Nakata et al. NAR 2023)。レトロウイルスの遺伝的多様性への影響については、APOBEC3AによるHIV-1の感受性には違いがあることを明らかにした。マクロファージ指向性HIV-1では、T細胞指向性HIV-1に比べAPOBEC3Aに抵抗性をもつことを見出した。APOBEC3AはHIV-1の遺伝的多様性に影響を与え、結果的にHIV-1に細胞指向性による感受性の違いが生じたと考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
APOBEC3ファミリーのうちAPOBEC3Aのみが高効率にRNA編集する分子機序を明らかにしたことは、当該分野において重要な知見を取得したといえる。一方で、2022年度に投稿した論文のリバイズの過程で、APOBEC3Aノックアウト細胞の作製に想定外の時間を要し、レトロウイルスの遺伝的多様性の評価の着手が遅れた。以上の理由から、総じておおむね順調に進展していると判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
野生型あるいは酵素活性欠失型(E72Q)APOBEC3Aを発現したCD4+リンパ球細胞を用いてHIVの順化実験を実施することにより、「APOBEC3AがHIV-1の細胞指向性の変化に影響を与える因子である」という知見を裏付けるデータを取得する。さらに、計画通り、レトロトランスポゾンに対するAPOBEC3Aの影響についてもLINE-1を用いて詳細な解析を進める。RNA編集による宿主細胞の影響に関するテーマでは、APOBEC3A発現細胞における宿主mRNAを次世代シーケンサーにより解析し、APOBEC3AによるRNA編集とウイルス・宿主RNAの遺伝的変化の検出しその効果を分析する予定である。
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