| 研究課題/領域番号 |
23K24417
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| 補助金の研究課題番号 |
22H03158 (2022-2023)
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 基金 (2024)
補助金 (2022-2023) |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分55030:心臓血管外科学関連
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
濱野 公一 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (60263787)
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| 研究分担者 |
鈴木 亮 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (10570319)
上野 耕司 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教 (30736070)
藏澄 宏之 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (50645116)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2024年度)
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| 配分額 *注記 |
17,420千円 (直接経費: 13,400千円、間接経費: 4,020千円)
2024年度: 5,460千円 (直接経費: 4,200千円、間接経費: 1,260千円)
2023年度: 5,460千円 (直接経費: 4,200千円、間接経費: 1,260千円)
2022年度: 6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円)
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| キーワード | 再生医療 / 血管新生 / エクソソーム / エクソソーム治療 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
細胞治療による血管新生の機序として、その移植された細胞が分泌するエクソソームが関与していることが報告されている。そして、そのエクソソームが血管新生を誘導する機序として、エクソソームに内包されているmicroRNAが主因であるとも報告されている。本研究では、独自のスクリーニング実験による、エクソソームに内包されているmiroRNAの中から、新規の血管新生能を持つmicroRNAを見つけることを研究の目的としている。
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| 研究実績の概要 |
歯髄幹細胞が分泌するエクソソームの血管新生能を確認するために、BALB/c下肢虚血マウスモデルに対して、歯髄幹細胞が分泌するエクソソームを大腿部に投与し、経時的にドップラーで血流を確認したところ、コントロール群と比べて、エクソソーム投与郡では、血流が改善する結果が得られた。
エクソソームによる血管新生は、エクソソームに内包されているmicroRNAが関与しているという報告から、歯髄幹細胞が分泌するエクソソームには、血管新生に関与するmicroRNAが内包されていると考え、そのmicroRNAを探索する解析を実施した。歯髄幹細胞を低酸素培養することで、歯髄幹細胞が血管新生に対応する変化を示すかを確認するために、歯髄幹細胞を通常の酸素濃度での培養と、低酸素培養による比較を行い、その時に、歯髄幹細胞が分泌するエクソソームに内包されているVEGFの量をELISAで解析すると、低酸素培養した歯髄幹細胞が分泌するエクソソームには、通常の酸素濃度で培養した時と比べて、VEGFの量が増加している結果を得た。
先ずは、歯髄幹細胞を通常酸素濃度および低酸素で培養後、培養液からエクソソームを単離し、そのエクソソームに内包されているmicroRNAを抽出し、microRNAアレイ解析を実施することで、低酸素培養でエクソソームでの内包量が上がるmicroRNAを13個特定することが出来た。次に、それらのmicroRNAを内包したエクソソームをヒト大動脈内皮細胞に添加培養し、細胞増殖能を解析することで、細胞増殖を促す4個のmicroRNAを見出した。更に、BALB/c下肢虚血マウスモデルに対して、4個のmicroRNAを個々に内包したエクソソームをを大腿部に投与し、経時的にドップラーで血流を確認することで、最も、血流改善効果を示す1つのmicroRNAを特定することが出来た。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
独自のスクリーニング実験から、血流改善効果を示すmicroRNAを見出すことが出来たため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今回、見出した血管新生能を持つmicroRNAの機能解析を実施する。
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