| 研究課題/領域番号 |
24350082
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 一部基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生体関連化学
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| 研究機関 | 秋田大学 (2014)
東京農工大学 (2012-2013) |
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研究代表者 |
尾高 雅文 秋田大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (20224248)
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| 連携研究者 |
黒木 良太 独立行政法人日本原子力研究開発機構, 量子ビーム応用研究部門, ユニット長 (30391246)
養王田 正文 東京農工大学, 大学院工学研究院, 教授 (50250105)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2014年度)
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| 配分額 *注記 |
18,460千円 (直接経費: 14,200千円、間接経費: 4,260千円)
2014年度: 5,590千円 (直接経費: 4,300千円、間接経費: 1,290千円)
2013年度: 5,590千円 (直接経費: 4,300千円、間接経費: 1,290千円)
2012年度: 7,280千円 (直接経費: 5,600千円、間接経費: 1,680千円)
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| キーワード | 時間分割結晶構造解析 / 翻訳後修飾 / システインスルフェン酸 / 酵素反応 / 触媒機構 / 反応中間体 / 水和反応 / 結晶構造 / 酵素触媒機構 / 金属酵素 / 構造生物学 / 中性子構造解析 / 酵素反応機構 / 時分割結晶構造解析 |
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| 研究成果の概要 |
鉄型ニトリルヒドラターゼのβR56K変異体を用いて触媒反応の時間分割結晶構造解析を行った。その結果、非ヘム鉄に配位した基質のニトリル炭素原子をαCys-SO－配位子の側鎖O原子が求核攻撃することで環状中間体を形成することを明らかにした。更に、18Oラベルした水の取込をFTIRで解析することにより、αCys-SO－配位子の側鎖O原子が触媒サイクル中にβArg56によって活性化された水分子と交換されることを明らかにした。また、チオシアネートヒドロラーゼ変異体解析から、両酵素は共通の触媒機構を有し、基質ポケットのサイズと構造が基質特異性に重要であることを明らかにした。
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