呼吸器ウイルス検出用オンチップデバイスの開発と診断への応用

• 研究課題/領域番号: 24390146
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 一部基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 中屋 隆明 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80271633)
• 研究分担者: 開發 邦宏 大阪大学, 産業科学研究所, 特任准教授 (70419464)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 18,720千円 (直接経費: 14,400千円、間接経費: 4,320千円); 2014年度: 5,460千円 (直接経費: 4,200千円、間接経費: 1,260千円); 2013年度: 5,330千円 (直接経費: 4,100千円、間接経費: 1,230千円); 2012年度: 7,930千円 (直接経費: 6,100千円、間接経費: 1,830千円)
• キーワード: 迅速診断 / デバイス / インフルエンザウイルス / ペプチド核酸 / ウイルス検出 / マイクロ流体システム / ウイルス / クロマトデバイス / オンチップ / 感染症

研究成果の概要

本研究では、インフルエンザウイルスの亜型特異的な塩基配列を持つ新規ペプチド核酸（PNA）をプローブとして、H1、H3およびH7亜型ウイルス（ゲノム）を検出するためのクロマトグラフィーキットを作製し、その評価を行った。
その結果、PNAクロマトキットは、ヒト由来の季節性H1とH3亜型に対しては1.0×10<4> ffu/kit、トリ由来のH7型に対しては5.0×10<5> ffu/kitのウイルス量があれば検出できることがわかった。加えて、若干の偽陽性反応を示したものの、インフルエンザウイルスの亜型間を識別することができた。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of H5N1 Influenza Virus Variants with Hemagglutinin Mutations Isolated from Patients. (2015)
  • 著者名/発表者名: 1.Watanabe Y, Arai Y, Daidoji T, Kawashita N, Ibrahim MS, El-Gendy E, Hiramatsu H, Kubota-Kokestu R, Takagi T, Murata T, Takahashi K, Okuno Y, Nakaya T, Suzuki Y, Ikuta K.
  • 雑誌名: mBio 巻: 6 号: 2
  • DOI: 10.1128/mbio.00081-15
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Emergence of infectious malignant thrombocytopenia in Japanese macaques (Macaca fuscata) by SRV-4 after transmission to a novel host. (2015)
  • 著者名/発表者名: Okamoto M, Miyazawa T, Morikawa S, Ono F, Nakamura S, Sato E, Yoshida T, Yoshikawa R, Sakai K, Mizutani T, Nagata N, Takano J, Okabayashi S, Hamano M, Fujimoto K, Nakaya T, Iida T, Horri T, Miyabe-Nishiwaki T, Watanabe A, Kaneko A, Saito A, Matsui A, Hayakawa T, Suzuki J, Akari H, Matsuzawa T, Hirai H.
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 5 号: 1 ページ: 8850-8850
  • DOI: 10.1038/srep08850
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Avian Influenza Virus Infection of Immortalized Human Respiratory Epithelial Cells Depends upon a Delicate Balance between Hemagglutinin Acid Stability and Endosomal pH. (2015)
  • 著者名/発表者名: 3.Daidoji T, Watanabe Y, Ibrahim MS, Yasugi M, Maruyama H, Masuda T, Arai F, Ohba T, Honda A, Ikuta K, Nakaya T
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 290 号: 17 ページ: 10627-42
  • DOI: 10.1074/jbc.m114.611327
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Viral detection by high-throughput sequencing (2015)
  • 著者名/発表者名: 4.Motooka D, Nakamura S, Hagiwara K, Nakaya T
  • 雑誌名: Methods Mol Biol 巻: 1236 ページ: 125-34
  • DOI: 10.1007/978-1-4939-1743-3_11
  • ISBN: 9781493917426, 9781493917433
• [雑誌論文] A novel immunochromatographic system for easy-to-use detection of group 1 avian influenza viruses with acquired human-type receptor binding specificity (2014)
  • 著者名/発表者名: Watanabe Y, Ito T, Ibrahim MS, Arai Y, Hotta K, Phuong HVM, Hang NLK Mai LQ, Soda K, Yamaoka M, Poetranto ED, Wulandari L, Hiramatsu H, Daidoji T, Kubota-Koketsu R, Sriwilaijaroen N, Nakaya T, Okuno Y, Takahashi T, Suzuki T, Ito T, Hotta H, Yamashiro T, Hayashi T, Morita K, Ikuta K, Suzuki Y
  • 雑誌名: Biosens Bioelectron 巻: 65 ページ: 211-219
  • DOI: 10.1016/j.bios.2014.10.036
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Virus purification and enrichment by hydroxyapatite chromatography on a chip. (2014)
  • 著者名/発表者名: 6.Niimi M, Masuda T, Kaihatsu K, Kato N, Nakamura S, Nakaya T, Arai F.
  • 雑誌名: Sensors and Actuators B: Chemical 巻: 201 ページ: 185-90
  • DOI: 10.1016/j.snb.2014.04.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Human monoclonal antibodies derived from a patient infected with 2009 pandemic influenza A virus broadly cross-neutralize group 1 influenza viruses (2014)
  • 著者名/発表者名: Pan Y, Sasaki T, Kubota-Koketsu R, Inoue Y, Yasugi M, Yamashita A, Ramadhany R, Arai Y, Du A, Boonsathorn N, Ibrahim MS, Daidoji T, Nakaya T, Ono K, Okuno Y, Ikuta K, Watanabe Y
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 450 号: 1 ページ: 42-48
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2014.05.060
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Sequence-specific and visual identification of influenza virus gene by azobenzene-tethered bis-peptide nucleic acid (2013)
  • 著者名/発表者名: K. Kaihatsu, S. Sawada, S. Nakamura, T. Nakaya, T. Yasunaga, N. Kato
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 号: 5 ページ: e64017-e64017
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0064017
  • 査読あり
• [雑誌論文] Human monoclonal antibodies broadly neutralizing against influenza B virus. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yasugi, M., Kubota-Koketsu, R., Yamashita, A., Kawashita, N., Du, A., Sasaki, T., Nishimura, M., Misaki, R., Kuhara, M., Boonsathorn, N., Fujiyama, K., Okuno, Y., Nakaya, T., and Ikuta, K.
  • 雑誌名: PLoS Pathog. 巻: 9 号: 2 ページ: e1003150-e1003150
  • DOI: 10.1371/journal.ppat.1003150
  • 査読あり
• [雑誌論文] Emergence of HA mutants during influenza virus pneumonia. (2012)
  • 著者名/発表者名: Manriquez ME, Nakaya T, Shinya K, et al.
  • 雑誌名: Int. J. Clin. Exp. Pathol. 巻: 5(8) ページ: 787-795
  • 査読あり
• [雑誌論文] Antigenic analysis of highly pathogenic avian influenza virus H5N1 sublineage co-circulating in Egypt. (2012)
  • 著者名/発表者名: Watanabe, Y., Ibrahim, M.S., Ellakany, H.F., Kawashita, N., Daidoji, T., Takagi, T., Yasunaga, T., Nakaya, T., and Ikuta, K.
  • 雑誌名: J. Gen. Virol. 巻: 93 号: 10 ページ: 2215-2226
  • DOI: 10.1099/vir.0.044032-0
  • 査読あり
• [学会発表] 環境中微生物の網羅的探索（メタゲノム解析） (2015)
  • 著者名/発表者名: 中屋 隆明
  • 学会等名: 第2回大気エアロゾルシンポジウム
  • 発表場所: 北海道江別市
  • 年月日: 2015-02-20
  • 招待講演
• [学会発表] しのび寄る新興感染症における最新の話題 (2014)
  • 著者名/発表者名: 中屋 隆明
  • 学会等名: 第20回京都地域医療フォーラム
  • 発表場所: 京都市
  • 年月日: 2014-09-20
  • 招待講演
• [学会発表] 鳥インフルエンザ (2012)
  • 著者名/発表者名: 中屋 隆明
  • 学会等名: 日本神経感染症学会
  • 発表場所: 京都府京都市
  • 年月日: 2012-10-20
• [学会発表] インフルエンザウイルスの宿主域拡大戦略 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中屋 隆明
  • 学会等名: CREST公開シンポジウム「光が拓く細胞解析の新展開」
  • 発表場所: 東京都品川区
  • 年月日: 2012-08-18
• [学会発表] 新興・再興ウイルス感染症のダイナミクス (2012)
  • 著者名/発表者名: 中屋 隆明
  • 学会等名: びわ湖国際医療フォーラム
  • 発表場所: 滋賀県大津市
  • 年月日: 2012-07-14
• [学会発表] H1N1 2009-HAゲノムのディープシークエンス解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中屋 隆明
  • 学会等名: インフルエンザ研究者交流の会シンポジウム
  • 発表場所: 福島県耶麻郡
  • 年月日: 2012-05-25
• [図書] 次世代シーケンサー活用術 (2015)
  • 著者名/発表者名: 中村昇太、飯田哲也・中屋隆明・堀井俊宏
  • 総ページ数: 199
  • 出版者: 化学同人