脂質膜を反応場とするジスルフィドリッチペプチド合成法の確立

• 研究課題/領域番号: 24651242
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 生物分子科学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 原 利明 大阪大学, 理学(系)研究科(研究院), 特任講師(常勤) (90528233)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円); 2013年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2012年度: 2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
• キーワード: 脂質膜 / ペプチド化学

研究概要

リン脂質膜を反応の場として用い、ジスフフィド結合を豊富に含むペプチドの酸化的フォールディング反応の開発とその解析に取り組んだ。まず、化学合成法によりシステインリッチペプチドを調製し、様々なリン脂質組成の脂質膜を用い反応を試みた。グリセロリン脂質が良好な結果を与えた一方、スフィンゴミエリンなどアミド結合を含む脂質では低収率であった。また、逆相HPLCのペプチドの保持時間から反応結果の予測が可能であることを見いだした。次に、ジスルフィド結合の形成過程を酵素消化と質量分析により解析し、従来の溶相反応とは異なる中間体を検出し、脂質膜上での反応ではユニークな反応経路を経ることが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Folding of cysteine-rich peptides on phospholipid membranes. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hara1, T.; Purwati, E.M.; Wada, A.; Hasegawa, M.; Murata, M.; Aimoto, S.
  • 雑誌名: Peptides Science 2013 巻: 未定
  • 査読あり
• [雑誌論文] Purification of Transmembrane Peptides using RP-HPLC. (2014)
  • 著者名/発表者名: Huang, Y.; Hara, T.; Murata M.
  • 雑誌名: Peptides Science 2013 巻: 未定
  • 査読あり
• [雑誌論文] Differential Effects of Peptides Stomagen, EPF1, and EPF2 on Activation of the MAP Kinase MPK6 and the SPCH Protein Level (2013)
  • 著者名/発表者名: Pawan, K. J., Hara, T., Tanaka, H., Kondo, T., Betsuyaku, S., Sawa, S., Sakagami, Y., Aimoto, S., and Kakimoto, T.
  • 雑誌名: Plant Cell Physiol 巻: 54 ページ: 1253-1262
  • NAID: 10031195179
  • 査読あり
• [雑誌論文] Structure of the human heart fatty acid-binding protein in complex with the fluorescent probe 1-anilinonaphtalene-8-sulphonic acid (2013)
  • 著者名/発表者名: Hirose, M., Sugiyama, S., Ishida, H., Niiyama, M., Matsuoka, D., Hara, T., Mizohata, E., Murakami, S., Inoue, T., Matsuoka, S. and Murata, M.
  • 雑誌名: Journal of Synchrotron Radiation 巻: 20 ページ: 923-928
  • 査読あり
• [雑誌論文] Purification of Transmembrane Peptides using RP-HPLC., Ed. Teshima T. and Nishiushi Y (2013)
  • 著者名/発表者名: Huang, Y.; Hara, T.; Murata M.
  • 雑誌名: Peptides Science 2013 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Folding of cysteine-rich peptides on phospholipid membranes (2013)
  • 著者名/発表者名: Hara1, T.; Purwati, E.M.; Wada, A.; Hasegawa, M.; Murata, M.; Aimoto, S.
  • 雑誌名: Peptides Science 2013 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Structure of the human heart fatty acid-binding protein in complex with the fluorescent probe 1-anilinonaphtalene-8- sulphonic acid. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hirose, M., Sugiyama, S., Ishida, H., Niiyama, M., Matsuoka, D., Hara, T., Mizohata, E., Murakami, S., Inoue, T., Matsuoka, S. and Murata, M.
  • 雑誌名: Journal of Synchrotron Radiation 巻: 20 ページ: 923-928
  • 査読あり
• [雑誌論文] Differential Effects of Peptides Stomagen, EPF1, and EPF2 on Activation of the MAP Kinase MPK6 and the SPCH Protein Level. (2013)
  • 著者名/発表者名: Pawan, K. J., Hara, T., Tanaka, H., Kondo, T., Betsuyaku, S., Sawa, S., Sakagami, Y., Aimoto, S., and Kakimoto, T.
  • 雑誌名: Plant Cell Physiol. 巻: 54 ページ: 1253-1262
  • NAID: 10031195179
  • 査読あり
• [学会発表] Purification of Transmembrane Peptides using RP-HPLC (2013)
  • 著者名/発表者名: Huang, Y.; Hara, T.; Murata M.
  • 学会等名: 4th Asia-Pacific International Peptide Symposium & 50th Japanese Peptide Symposium
  • 発表場所: 大阪(ポスター発表)
• [学会発表] Folding of cysteine-rich peptides on phospholipid membranes (2013)
  • 著者名/発表者名: Hara, T.; Purwati, E.M.; Wada, A.; Hasegawa, M.; Murata, M.; Aimoto, S.
  • 学会等名: 4th Asia-Pacific International Peptide Symposium & 50th Japanese Peptide Symposium
  • 発表場所: 大阪(ポスター発表)
• [学会発表] ヒト心筋型脂肪酸結合タンパク質FABP3と蛍光プローブ1-anilinonaphtalene-8-sulphonic acidの複合体結晶構造解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 廣瀬未果、松岡茂・石田英子・松岳大輔・原利明・溝端栄一・村上聡・井上豪・村田道雄・杉山成
  • 学会等名: 日本結晶学会平成25年度年会
  • 発表場所: 熊本(ポスター発表)
• [学会発表] Structure of the human muscle fatty acid-binding protein complexed with competitive inhibitor (2013)
  • 著者名/発表者名: Mika Hirose, Shigeru Sugiyama, Hanako Ishida, Daisuke Matsuoka, Toshiaki Hara, Eiichi Mizohata, Tsuyoshi Inoue, Shigeru Matsuoka, Michio Murata
  • 学会等名: The International Conference on Structural Genomics 2013 (ICSG2013)第7回国際構造ゲノム会議
  • 発表場所: 北海道(札幌)(ポスター発表)
• [学会発表] Novel fatty acid analogues for the understanding of lipid-protein interactions (2013)
  • 著者名/発表者名: Hanako Ishida, Shigeru Sugiyama, Mika Hirose, Sebastien Lethu, Hikaru Ano, Fuminori Sato, Daisuke Matsuoka, Toshiaki Hara, Eiichi Mizohata, Tsuyoshi Inoue, Shigeru Matsuoka, Michio Murata
  • 学会等名: The International Conference on Structural Genomics 2013 (ICSG2013)第7回国際構造ゲノム会議
  • 発表場所: 北海道(札幌)(ポスター発表)
• [学会発表] Structure of the human muscle fatty acid-binding protein complexed with Hydrophobic ligand (2013)
  • 著者名/発表者名: Shigeru Sugiyama, Hanako Ishida, Daisuke Matsuoka, Toshiaki Hara, Eiichi Mizohata, Tsuyoshi Inoue, Shigeru Matsuoka, Michio Murata
  • 学会等名: 4th International Symposium on Diffraction Structural Biology(第4回回折構造生物国際シンポジウム2013)
  • 発表場所: (ポスター発表)
• [学会発表] Folding of cysteine-rich peptides on phospholipid membranes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hara1, T.; Purwati, E.M.; Wada, A.; Hasegawa, M.; Murata, M.; Aimoto, S.
  • 学会等名: 4th Asia-Pacific International Peptide Symposium & 50th Japanese Peptide Symposium
  • 発表場所: 吹田市
• [学会発表] Purification of Transmembrane Peptides using RP-HPLC. (2013)
  • 著者名/発表者名: Huang, Y.; Hara, T.; Murata M.
  • 学会等名: 4th Asia-Pacific International Peptide Symposium & 50th Japanese Peptide Symposium
  • 発表場所: 吹田市
• [学会発表] ヒト心筋型脂肪酸結合タンパク質FABP3と蛍光プローブ1-anilinonaphtalene-8-sulphonic acidの複合体結晶構造解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 廣瀬未果、松岡茂・石田英子・松岳大輔・原利明・溝端栄一・村上聡・井上豪・村田道雄・杉山成、
  • 学会等名: 日本結晶学会 平成25年度年会
  • 発表場所: 熊本市
• [学会発表] Novel fatty acid analogues for the understanding of lipid-protein interactions. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hanako Ishida, Shigeru Sugiyama, Mika Hirose, Sebastien Lethu, Hikaru Ano, Fuminori Sato, Daisuke Matsuoka, Toshiaki Hara, Eiichi Mizohata, Tsuyoshi Inoue, Shigeru Matsuoka, Michio Murata.
  • 学会等名: he International Conference on Structural Genomics 2013 (ICSG2013)
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] システインリッチペプチドの脂質膜上での酸化的フォールディング反応 (2013)
  • 著者名/発表者名: 原利明、Euis Maras Purwati 、和田昭裕、長谷川慎、村田道雄、相本三郎
  • 学会等名: 第13回 日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 鳥取
• [学会発表] システインリッチペプチドの脂質膜上での酸化的フォールディング反応 (2012)
  • 著者名/発表者名: 原利明、エイスマラスプルワティ、和田昭裕、長谷川慎、村田道雄、相本三郎
  • 学会等名: 第13回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 鳥取(ポスター発表)
• [学会発表] 脂質膜を用いるシステインリッチペプチドのフォールディング反応 (2012)
  • 著者名/発表者名: 原利明、Euis Maras Purwati 、和田昭裕、長谷川慎、村田道雄、相本三郎
  • 学会等名: 第７回 日本ケミカルバイオロジー学会年回
  • 発表場所: 京都
• [図書] 原利明「化学合成ペプチド・タンパク質の調製と結晶構造解析」、杉山成編『タンパク質結晶の最前線』第II編 (2013)
  • 著者名/発表者名: 原利明
  • 出版者: シーエムシー出版
• [図書] タンパク質結晶の最前線 第 II 編 (2013)
  • 著者名/発表者名: 原利明 (杉山成 編)
  • 総ページ数: 7
  • 出版者: シーエムシー出版
• [備考] ERATO村田脂質活性構造プロジェクト
  • URL: http://www.jst.go.jp/erato/murata/
• [備考] 蛋白質有機化学研究室 研究内容
  • URL: http://www.protein.osaka-u.ac.jp/organic/index.html