| 研究課題/領域番号 |
24657053
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| 研究種目 |
挑戦的萌芽研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 研究分野 |
動物生理・行動
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| 研究機関 | 東京工業大学 |
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研究代表者 |
星島 一幸 東京工業大学, バイオフロンティアセンター, 助教 (70397032)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2013-03-31
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| 研究課題ステータス |
中途終了 (2012年度)
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| 配分額 *注記 |
4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2013年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2012年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
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| キーワード | イオンホメオスタシス / 脂質ラフト / NHE3 / 塩類細胞 / アンモニア輸送体 / Rhcg / トランスポートソーム |
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| 研究概要 |
1. PLA法によるSuper transportsomeの可視化
2種のタンパク質が近接し複合体を作っている場合にのみ蛍光が観察される新しい方法が開発されProximity ligation assay（PLA）ないしはDuolink PLAと命名された。この方法は作製した動物種が異なる抗体があれば，通常の抗体染色法の延長として組織切片にも適用できるという特徴を有する。私たちはラットとウサギで作った種々の抗体を組み合わせて，既にNa+イオンの取り込みに関わるNhe3とCarbonic anhydrases（CA2a & CA15a）及びアンモニア輸送体Rhcg1が，イオン輸送に特化した塩類細胞膜上で，複合体を作っていることを明らかにした。淡水中で濃度勾配に逆らってイオンを取り込むために，Super transportsomeともいうべき複雑な複合体を形成していることを明らかにした。
2. Super transportsomeの機能解析
Na+/H+ exchanger（Nhe3）のイオン輸送活性を電気生理学的に測定するのは難しいとされてきたが，私たちはゼブラフィッシュのNhe3bをアフリカツメガエル卵で発現させ電気生理学的に活性を測定することにはじめて成功した。しかも結果は，これまで仮定されていた電気的に中性ではなく，起電性であることを強く示唆した。上記1の結果と合わせると，動物生理学上の長年の課題であった淡水魚のNa+イオンの取り込み問題をほぼ解決したことになる。
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