診断・ワクチン用ウイルス抗原タンパク質の酵母による多種類大量生産技術の開発

• 研究課題/領域番号: 24658096
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 応用生物化学
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 赤田 倫治 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20201882)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円); 2014年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2013年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2012年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
• キーワード: ウイルス表面タンパク質 / 抗原 / HBsL / Saccharomyces cerevisiae / Kluyveromyces marxianus / 非相同末端結合 / ワクチン / 診断薬 / B型肝炎ウイルス / 酵母 / 耐熱性酵母 / 表面抗原タンパク質 / Ｂ型肝炎ウイルス

研究成果の概要

組換えウイルスタンパク質はワクチンや診断薬に利用されており、その低コストでの生産が求められている。本研究では，酵母におけるウイルスタンパク質の高発現系を開発した。B型肝炎ウイルスの表面タンパク質HBsLを酵母で発現させると分解されることがわかった。そこで、分解されないHBsL変異タンパク質、および、高発現によりウイルス安定発現が可能な酵母発現系を確立した。以上のことから、将来必ず現れるウイルスによる社会問題に対処する方法論が準備できた。

研究成果

• [雑誌論文] Screening of accurate clones for gene synthesis in yeast (2015)
  • 著者名/発表者名: Tohru Yarimizu, Mikiko Nakamura, Hisashi Hoshida, and Rinji Akada
  • 雑誌名: Journal of Bioscience and Bioengineering 巻: 119 号: 3 ページ: 251-259
  • DOI: 10.1016/j.jbiosc.2014.08.006
  • NAID: 110009923563
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Synthetic signal sequences that enable efficient secretory protein production in the yeast Kluyveromyces marxianus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tohru Yarimizu, Mikiko Nakamura, Hisashi Hoshida and Rinji Akada
  • 雑誌名: Microbial Cell Factories 巻: 14 号: 1 ページ: 20-20
  • DOI: 10.1186/s12934-015-0203-y
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Non-homologous end joining-mediated functional marker selection for DNA cloning in the yeast Kluyveromyces marxianus. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hoshida H, Murakami N, Suzuki A, Tamura R, Asakawa J, Abdel-Banat BM, Nonklang S, Nakamura M, Akada R.
  • 雑誌名: Yeast 巻: 31 号: 1 ページ: 29-46
  • DOI: 10.1002/yea.2993
  • 査読あり
• [雑誌論文] Designed construction of recombinant DNA at the ura3Δ0 locus in the yeast Saccharomyces cerevisiae. (2013)
  • 著者名/発表者名: Fukunaga T, Cha-Aim K, Hirakawa Y, Sakai R, Kitagawa T, Nakamura M, Nonklang S, Hoshida H, Akada R.
  • 雑誌名: Yeast 巻: 30 号: 6 ページ: 243-253
  • DOI: 10.1002/yea.2957
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of auxotrophic mutants of the yeast Kluyveromyces marxianus by non-homologous end joining-mediated integrative transformation with genes from Saccharomyces cerevisiae. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yarimizu T, Nonklang S, Nakamura J, Tokuda S, Nakagawa T, Lorreungsil S, Sutthikhumpha S, Pukahuta C, Kitagawa T, Nakamura M, Cha-Aim K, Limtong S, Hoshida H, Akada R.
  • 雑誌名: Yeast 巻: 30 号: 12 ページ: 485-500
  • DOI: 10.1002/yea.2985
  • 査読あり
• [学会発表] 酵母によるウイルスワクチン生産とウイルス粒子形成メカニズムの解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 山本祐司，鈴木絢子，中村美紀子，星田尚司，赤田倫治
  • 学会等名: 第３２回Yeast Workshop
  • 発表場所: ビューポートくれ、広島
  • 年月日: 2014-11-14 – 2014-11-15
• [学会発表] 酵母Kluyveromyces marxianusの非相同末端結合の機構解析とそれを用いたプラスミドの構築 (2013)
  • 著者名/発表者名: 星田尚司，飯泉広葉，土屋元靖，村上允唯，鎗水透，鈴木絢子，中村美紀子，赤田倫治
  • 学会等名: 日本生物工学会大会
  • 発表場所: 広島国際会議場
• [学会発表] NHEJ-mediated recombinant DNA construction and its application for gene cloning and genetic analysis in the yeast Kluyveromyces marxianus (2013)
  • 著者名/発表者名: Hisashi Hoshida, Nobutada Murakami, Ryoko Tamura, Ayako Suzuki, Rinji Akada
  • 学会等名: 26th International Conference on Yeast Genetics and Molecular Biology
  • 発表場所: Frankfurt/Main, Germany
• [学会発表] B 型肝炎ワクチン開発に向けた酵母におけるウイルス表面タンパク質の発現解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 冨吉啓介，中村美紀子，星田尚司，赤田倫治
  • 学会等名: 日本農芸化学会中四国支部大会
  • 発表場所: 宇部工学部キャンパス
• [図書] Minimum GC-rich sequences for overlap extension PCR and primer annealing. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakamura M, Suzuki A, Hoshida H, Akada R.
  • 総ページ数: 17
  • 出版者: Humana Press