超高感度プロテオーム解析を用いた新規ＤＮＡ損傷応答シグナルの解明

• 研究課題/領域番号: 24681009
• 研究種目: 若手研究(A)
• 配分区分: 一部基金
• 研究分野: 放射線・化学物質影響科学
• 研究機関: 独立行政法人医薬基盤研究所
• 研究代表者: 足立 淳 独立行政法人医薬基盤研究所, その他部局等, 研究員 (20437255)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 26,650千円 (直接経費: 20,500千円、間接経費: 6,150千円); 2014年度: 9,230千円 (直接経費: 7,100千円、間接経費: 2,130千円); 2013年度: 9,230千円 (直接経費: 7,100千円、間接経費: 2,130千円); 2012年度: 8,190千円 (直接経費: 6,300千円、間接経費: 1,890千円)
• キーワード: DNA損傷応答 / シグナル伝達 / 翻訳後修飾 / プロテオミクス / 質量分析 / プロテオーム / リン酸化 / ユビキチン化

研究成果の概要

ナノ液体クロマトグラフィータンデム質量分析器(nanoLC-MS/MS)を用いたプロテオーム解析によって、DNA損傷応答シグナルを解析する目的で、ガンマ線照射後のリン酸化修飾変動を定量した。その結果、25971リン酸化サイトを同定し、そのうち6555サイトが照射後1時間以内に変動していた。このリン酸化大規模データをインフォマティクス解析することによって、これまでＤＮＡ損傷応答との関連が知られていなかったキナーゼを見いだすことに成功した。さらにキナーゼの阻害によって、ATM、ATRを含むDNA損傷応答シグナルが活性化されること、コロニー形成能が抑制されることを明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] Proteome-wide discovery of unknown ATP-binding proteins and kinase inhibitor target proteins using an ATP probe. (2014)
  • 著者名/発表者名: Jun Adachi, Marina Kishida, Shio Watanabe, Yuuki Hashimoto, Kazuna Fukamizu, Takeshi Tomonaga.
  • 雑誌名: Journal of proteome research 巻: 13 号: 12 ページ: 5461-5470
  • DOI: 10.1021/pr500845u
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel mechanism of keratin cytoskeleton organization through casein kinase I alpha and FAM83H in colorectal cancer. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kuga, T., Kume, H., Kawasaki, N., Sato, M., Adachi, J., Shiromizu, T., Hoshino, I., Nishimori, T., Matsubara, H., and Tomonaga T.
  • 雑誌名: J Cell Sci 巻: 126 ページ: 4721-31
  • DOI: 10.1242/jcs.129684
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of Missing Proteins in the nextProt Database and Unregistered Phosphopeptides in the PhosphoSitePlus Database As Part of the Chromosome-Centric Human Proteome Project (2013)
  • 著者名/発表者名: Takasi Shiromizu
  • 雑誌名: Journal of Proteome Research 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] In-depth Membrane Proteomic Study of Breast Cancer Tissues for the Generation of a Chromosome-based Protein List (2012)
  • 著者名/発表者名: Muraoka S, Kume H, Adachi J, Shiromizu T, Watanabe S, Masuda T, Ishihama Y, Tomonaga T
  • 雑誌名: J Proteome Res 巻: 12(1) 号: 1 ページ: 208-13
  • DOI: 10.1021/pr300824m
  • 査読あり
• [学会発表] Kinome and ATPome-wide selectivity profiling of ATP-competitive kinase inhibitors. (2014)
  • 著者名/発表者名: Jun Adachi, Takeshi Tomonaga
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] ATP Accessibility Screening (AAS), a high-throughput and high-resolution kinase analysis platform for signaling research (2013)
  • 著者名/発表者名: 1. Adachi J, Higo D, Kishida M, Watanabe S, Kuwano M, Hashimoto Y, Fukamizu K, Nishiwaki E, Tomonaga T
  • 学会等名: Human Proteome Organization (HUPO) 12th annual congress
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] DNA損傷初期応答シグナル解析から創薬標的の探索へ (2012)
  • 著者名/発表者名: 足立淳
  • 学会等名: 第10回北里疾患プロテオーム研究会
  • 発表場所: 神奈川
  • 年月日: 2012-08-23
• [学会発表] ATP Accessibility Screening (AAS), a high-throughput and high-resolution kinase analysis platform for signaling research (2012)
  • 著者名/発表者名: Jun Adachi
  • 学会等名: 2nd Copenhagen Bioscience Conference
  • 発表場所: Copenhagen, Denmark
• [学会発表] Phosphorylation dynamics in an early response of DNA damage signaling (2012)
  • 著者名/発表者名: Jun Adachi
  • 学会等名: HUPO2012
  • 発表場所: Boston, U.S.A
• [学会発表] Global phosphorylation and ubiquitination dynamics in DNA-damage response network (2012)
  • 著者名/発表者名: Jun Adachi
  • 学会等名: Asia Oceania Human Proteome Organization (AOHUPO)6th congress
  • 発表場所: Beijing, China
• [学会発表] リン酸化プロテオミクスを用いた新規DNA損傷初期応答キナーゼの探索 (2012)
  • 著者名/発表者名: 足立淳
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] リン酸化プロテオミクスを用いた新規DNA損傷初期応答キナーゼの探索 (2012)
  • 著者名/発表者名: 足立淳
  • 学会等名: 日本放射線影響学会第55回大会
  • 発表場所: 仙台(招待講演)
• [学会発表] リン酸化プロテオミクスを用いた新規DNA損傷初期応答キナーゼの探索 (2012)
  • 著者名/発表者名: 足立淳
  • 学会等名: 日本プロテオーム学会2012
  • 発表場所: 東京