ＨＬＡ依存性薬剤副作用における候補分子検証の為のモデル細胞・マウスの作製と応用

• 研究課題/領域番号: 24700435
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 実験動物学
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 三浦 浩美 東海大学, 医学部, 特定研究員 (90599523)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2014年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2013年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2012年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
• キーワード: トランスジェニックマウス / 薬剤副作用 / HLA / 肝障害 / PITT法 / トランスジェックマウス作製 / HLA発現確認 / トランスジェックマウス

研究成果の概要

本研究では、特定のHLA多型と強く相関する薬剤副作用の発症機序解明を目指し、その基盤となるべき研究材料である、HLA発現細胞及びHLA発現トランスジェニック(Tg)マウスの作製を行った。細胞については、piggyBacトランスポゾンを利用しHLA-A*33:03、A*31:01、B*15:02、B*58:01発現細胞を、Tgマウスについては独自のTgマウス作製法を用いてHLA-A*33:03とA*31:01発現マウスを作製することに成功した。薬剤投与による肝障害への影響を調べているが、現時点までに有意な結果は得られていない。今後、薬剤代謝産物候補の投与を行うなどして更なる解析を進めたい。

研究成果

• [雑誌論文] One-step generation of multiple transgenic mouse lines using an improved Pronuclear Injection-based Targeted Transgenesis (i-PITT) (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., Miura H., Mochida K., Hirose M., Hasegawa A., Ogura A., Mizutani R., Kimura M., Isotani A., Ikawa M., Sato M. and Gurumurthy C. B.
  • 雑誌名: BMC Genomics 巻: 16 号: 1 ページ: 274-274
  • DOI: 10.1186/s12864-015-1432-5
  • NAID: 120006957412
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] PiggyBac-mediated generation of stable transfectants with surface HLA expression from a small number of cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Miura H., Inoko H., Inoue I., Okada Y., Tanaka M., Sato M. and Ohtsuka M.
  • 雑誌名: Anal. Biochem 巻: 437 号: 1 ページ: 29-31
  • DOI: 10.1016/j.ab.2013.02.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of pronuclear injection-based targeted transgenesis (PITT) by iCre mRNA-mediated site-specific recombination (2013)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Hayashi H, Nakaoka H, Kimura M, Sato M, Gurumurthy CB, Inoko H
  • 雑誌名: Transgenic Research 巻: 22 号: 4 ページ: 873-875
  • DOI: 10.1007/s11248-013-9703-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determination of the Optimal Concentration of Several Selective Drugs Useful for Generating Multi-Transgenic Porcine Embryonic Fibroblasts (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Ohtsuka M, Miura H, Miyoshi K, Watanabe S.
  • 雑誌名: Reproduction in Domestic Animals/John Wiley & Sons, Inc. 巻: 47 号: 5 ページ: 759-765
  • DOI: 10.1111/j.1439-0531.2011.01964.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fluorescent transgenic mice suitable for multi-color aggregation chimera studies (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Gurumurthy CB, Kimura M, Inoko H, Yoshimura S, Sato M
  • 雑誌名: Cell and Tissue Research 巻: 350 号: 2 ページ: 251-260
  • DOI: 10.1007/s00441-012-1470-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] PITT: Pronuclear Injection-Based Targeted Transgenesis, a Reliable Transgene Expression Method in Mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Sato M, Kimura M, Inoko H, Gurumurthy CB
  • 雑誌名: Experimental Animals 巻: 61 号: 5 ページ: 489-502
  • DOI: 10.1538/expanim.61.489
  • NAID: 10031121853
  • ISSN: 0007-5124, 1341-1357, 1881-7122
  • 査読あり
• [学会発表] 薬剤副作用の発症機序解明の為の、HLA遺伝子発現細胞とHLAトランスジェニックマウスの作製 (2014)
  • 著者名/発表者名: 三浦 浩美、大塚 正人
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
• [学会発表] Concurrent production of multiple targeted transgenic mouse lines with C57BL/6N genetic background by improved PITT (2014)
  • 著者名/発表者名: Masato Ohtsuka, Hiromi Miura, Minoru Kimura, Ayako Isotani, Masahito Ikawa, Masahiro Sato, Channabasavaiah Gurumurthy
  • 学会等名: 12th Transgenic Technology Meeting (TT2014)
  • 発表場所: Edinburgh, Scotland, United Kingdom
  • 年月日: 2014-10-06 – 2014-10-08
• [学会発表] C57BL/6Nを遺伝的背景に持つターゲットトランスジェネシス用種マウスの作製と評価 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大塚 正人, 三浦 浩美, 磯谷 綾子, 伊川 正人, 佐藤 正宏, 木村 穣
  • 学会等名: 第61回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター
  • 年月日: 2014-05-15 – 2014-05-17
• [学会発表] 受精卵へのiCre mRNA注入によるターゲットトランスジェネシス法（PITT法）の効率改善 (2013)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、佐藤正宏、木村穣
  • 学会等名: 第60回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: つくば国際会議場
• [学会発表] Neuropathy target esterase（神経障害標的エステラーゼ）遺伝子導入マウスの作成 (2013)
  • 著者名/発表者名: 加賀谷徹、割田貴之、三浦浩美、大塚正人、大久保朋一、坂部貢、木村穣
  • 学会等名: 第22回日本臨床環境医学会学術集会
  • 発表場所: 北里大学白金キャンパス
• [学会発表] トランスポゾンPiggyBacシステムによる複数遺伝子のブタ細胞への同時導入 (2013)
  • 著者名/発表者名: 郡山美優、稲田絵美、齋藤一誠、三浦浩美、大塚正人、中村伸吾、桜井敬之、渡部聡、三好和睦、佐藤正宏
  • 学会等名: 第106回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 東京農工大学農学部府中キャンパス
• [学会発表] Generation of Knockdown Mice Using Pronuclear Injection-Based Targeted Transgenesis: Advantages and Limitations (2013)
  • 著者名/発表者名: Hiromi Miura, Masato Ohtsuka
  • 学会等名: The 27th International Mammalian Genome Conference
  • 発表場所: Salamanca, Spain
• [学会発表] Recombinase及びIntegraseによる部位特異的遺伝子導入効率の比較検討 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 第59回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 別府国際コンベンションセンター
• [学会発表] iCre mRNA注入による次世代型トランスジェニックマウス作製法（PITT）の効率改善 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、佐藤正宏、三浦浩美
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
• [学会発表] PITT法を利用して作製したノックダウンマウスにおけるノックダウン効果の比較解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、佐藤正宏、大塚正人
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
• [産業財産権] 標的遺伝子のノックダウン方法およびそのためのRNAi用発現ベクター (2012)
  • 発明者名: 大塚正人、三浦浩美
  • 権利者名: 大塚正人、三浦浩美
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 2012-259950
  • 出願年月日: 2012-11-28