マウス由来膜タンパク質ＴＲＩＣチャネルのＸ線結晶構造解析

• 研究課題/領域番号: 24770089
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 構造生物化学
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 窪田 恵子 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 特任研究員 (50597870)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円); 2013年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円); 2012年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
• キーワード: X線結晶構造解析 / 膜タンパク質 / イオンチャネル

研究概要

Tric チャネルは、小胞体からのカルシウム放出の制御機構の一旦を担っており、近年見つかった新しいタイプの3量体型陽イオンチャネルであるということからも大変興味深い。本研究では、構造学的観点からカルシウムシグナル制御機構を明らかにするために、昆虫細胞と大腸菌を用いたTricチャネルの大量調整法の確立、精製、結晶化、X線回折実験を行った。様々な種のTricを調製することに成功し、結晶化を行ったところ、クラミドモナスとバクテリア2種由来のTricで結晶化に成功した。特にバクテリア由来のSSOではより大きな結晶が得られ、最高分解能7.5Åの回折斑点を得た。

研究成果

• [雑誌論文] Get1 stabilizes an open dimer conformation of get3 ATPase by binding two distinct interfaces. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kubota K, Yamagata A, Sato Y, Goto-Ito S, Fukai S.
  • 雑誌名: J Mol Biol. 巻: 422(3) 号: 3 ページ: 366-75
  • DOI: 10.1016/j.jmb.2012.05.045
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular basis of Lys-63-linked polyubiquitination inhibition by the interaction between human deubiquitinating enzyme OTUB1 and ubiquitin-conjugating enzyme UBC13. (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato Y, Yamagata A, Goto-Ito S, Kubota K, Miyamoto R, Nakada S, Fukai S.
  • 雑誌名: J Biol Chem. 巻: 287(31) 号: 31 ページ: 25860-8
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.364752
  • 査読あり
• [雑誌論文] The crystal structure of an intermediate dimer of aspergilloglutamic peptidase that mimics the enzyme-activation product complex produced upon autoproteolysis (2012)
  • 著者名/発表者名: Sasaki H, Kubota K, Lee WC, Ohtsuka J, Kojima M, Iwata S, Nakagawa A, Takahashi K, Tanokura M
  • 雑誌名: J Biochem 巻: 152 号: 1 ページ: 45-52
  • DOI: 10.1093/jb/mvs050
  • NAID: 10031166113
  • 査読あり
• [雑誌論文] Purification, crystallization and preliminary X-ray analysis of OsAREB8 from rice, a member of the AREB/ABF family of bZIP transcription factors, in complex with its cognate DNA. (2012)
  • 著者名/発表者名: Miyazono, K., Koura, T., Kubota, K., Yoshida, T., Fujita, Y., Yamaguchi-Shinozaki, K., Tanokura, M.
  • 雑誌名: Acta Cryst. Sect. F 巻: 68 号: 4 ページ: 491-494
  • DOI: 10.1107/s1744309112009384
  • 査読あり
• [学会発表] Get1-Get3複合体のX線結晶構造解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: ○窪田恵子、 山形敦史、 佐藤裕介、 伊藤（後藤）桜子、 深井周也
  • 学会等名: 第30回 PFシンポジウム
  • 発表場所: つくば国際会議場（エポカルつくば）
• [備考]
  • URL: http://www.iam.u-tokyo.ac.jp/srro/SRROLifeSciDivJp2/Welcome.html