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DNA合成反応の可視化技術を基としたタンパク質複合体の精密挙動解析

研究課題

研究課題/領域番号 24770164
研究種目

若手研究(B)

配分区分基金
研究分野 分子生物学
研究機関群馬大学

研究代表者

大重 真彦  群馬大学, 大学院理工学府, 准教授 (00451716)

研究期間 (年度) 2012-04-01 – 2015-03-31
研究課題ステータス 完了 (2014年度)
配分額 *注記
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2014年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2013年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2012年度: 2,470千円 (直接経費: 1,900千円、間接経費: 570千円)
キーワード1分子観察 / 計測技術 / 可視化技術 / DNA代謝反応 / DNA複製 / DNAポリメラーゼ / ヌクレアーゼ / DNA結合タンパク質 / 分子計測 / DNA / DNAポリメラーゼ / 1分子解析 / 1本鎖DNA / マイクロ流路 / 形態制御 / タンパク質 / モニタリング / 表面修飾
研究成果の概要

1分子解析技術は、DNAやタンパク質の1分子を対象とした分子挙動やその分布に基づきDNA代謝反応の素過程等を解析することが可能である。この技術を用いて、DNA代謝反応であるDNA合成反応とDNA分解反応の1分子観察技術を開発した。クレノウフラグメントによるDNA合成の1分子観察により、鋳型DNAの形態変化はDNA合成速度へ影響を与え、伸長させた鋳型DNAの方が縮んだランダムコイル形態の時よりも75%速くなることを見出した。一方、T7エキソヌクレアーゼによるDNA分解反応の解析では、酵素の供給を制御する事により分解反応の一時停止がおきることを見出し、その挙動を明らかにすることに成功した。

報告書

(4件)
  • 2014 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2013 実施状況報告書
  • 2012 実施状況報告書
  • 研究成果

    (12件)

すべて 2015 2014 2013 その他

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (8件) (うち招待講演 1件)

  • [雑誌論文] Direct Single-Molecule Observations of Local Denaturation of a DNA Double Helix under a Negative Supercoil State.2015

    • 著者名/発表者名
      Takahashi S, Motooka S, Usui T, Kawasaki S, Miyata H, Kurita H, Mizuno T, Matsuura S, Mizuno A, Oshige M, Katsura S.
    • 雑誌名

      Analytical Chemistry

      巻: 87 号: 6 ページ: 3490-3497

    • DOI

      10.1021/acs.analchem.5b00044

    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Real-time single-molecule observations of T7 Exonuclease activity in a microflow channel2014

    • 著者名/発表者名
      S. Takahashi, T. Usui, S. Kawasaki, H. Miyata, H. Kurita, S.-i. Matsuura, A. Mizuno, M. Oshige, and S. Katsura
    • 雑誌名

      Analytical Biochemistry

      巻: - ページ: 24-30

    • DOI

      10.1016/j.ab.2014.04.012

    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] A New Direct Single-Molecule Observation Method for DNA Synthesis Reaction Using Fluorescent Replication Protein A2014

    • 著者名/発表者名
      S. Takahashi, S. Kawasaki, H. Miyata, H. Kurita, T. Mizuno, S.-i. Matsuura, A. Mizuno, M. Oshige, and S. Katsura
    • 雑誌名

      Sensors

      巻: 14 号: 3 ページ: 5174-5182

    • DOI

      10.3390/s140305174

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Direct observation of fluorescently labeled single-stranded λDNA molecules in a micro-flow channel2013

    • 著者名/発表者名
      S. Takahashi, S. Kawasaki, K. Yamaguchi, H. Miyata, H. Kurita, T. Mizuno, S. Matsuura, A. Mizuno, M. Oshige, and S. Katsura
    • 雑誌名

      Journal of Fluorescence

      巻: - 号: 4 ページ: 635-640

    • DOI

      10.1007/s10895-013-1210-1

    • 関連する報告書
      2012 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 表面修飾技術による生体分子固定と分析技術への応用2015

    • 著者名/発表者名
      大重真彦
    • 学会等名
      ナノ・バイオ静電気工学シンポジウム
    • 発表場所
      東京都目黒区
    • 年月日
      2015-03-20
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] Real-time single-molecule observations of T7 Exonuclease activity in a microflow channel2014

    • 著者名/発表者名
      Shunsuke Takahashi, Tomohiro Usui, Shohei Kawasaki, Hidefumi Miyata, Hirofumi Kurita, Shun-ichi Matsuura, Akira Mizuno, Masahiko Oshige, and Shinji Katsura
    • 学会等名
      1st International Symposium of Gunma University Medical Innovation and 6th International Conference on Advanced Micro-Device Engineering (GUMI&AMDE2014)
    • 発表場所
      群馬県桐生市
    • 年月日
      2014-12-05
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 蛍光T4 DNA Ligaseの1分子解析の試み2014

    • 著者名/発表者名
      碓井智大, 高橋俊介, 川崎祥平, 宮田英史, 栗田弘史, 松浦俊一, 水野彰, 大重真彦, 桂進司
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      神奈川横浜市
    • 年月日
      2014-11-26
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 微細流路中でのT7 Exonuclease活性のリアルタイム1分子観察2014

    • 著者名/発表者名
      高橋俊介, 碓井智大, 川崎祥平, 宮田英史, 栗田弘史, 松浦俊一, 水野彰, 大重真彦, 桂進司
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      神奈川県横浜市
    • 年月日
      2014-11-26
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 負の超らせん導入による二重らせんの局所的な開裂の1分子直接観測2014

    • 著者名/発表者名
      高橋俊介, 本岡伸也, 川崎祥平, 宮田英史, 栗田弘史, 松浦俊一, 水野武, 水野彰, 大重真彦, 桂進司
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      神奈川県横浜市
    • 年月日
      2014-11-26
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 蛍光複製タンパク質Aを用いた1本鎖DNA標識によるDNA合成反応のリアルタイム1分子

    • 著者名/発表者名
      高橋俊介、川崎祥平、宮田英史、栗田弘史、水野武、松浦俊一、水野彰、大重真彦、桂進司
    • 学会等名
      第36回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      兵庫県神戸市
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] Direct observation of fluorescently labeled single-stranded λDNA molecules in a micro-flow channel.

    • 著者名/発表者名
      Takahashi S, Kawasaki S, Yamaguchi K, Miyata H, Kurita H, Mizuno T, Matsu-ura SI, Mizuno A, Oshige M, Katsura S
    • 学会等名
      5th International Conference on Advanced Micro-Device Engineering (AMDE2013)
    • 発表場所
      Kiryu, Gunma
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] 微細流路中での1本鎖DNA認識ペプチドを用いた1本鎖DNAの直接観察法

    • 著者名/発表者名
      高橋俊介、川崎祥平、山口晃史、宮田英史、栗田弘史、水野武、松浦俊一、水野彰、大重真彦、桂進司
    • 学会等名
      第35回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      福岡県
    • 関連する報告書
      2012 実施状況報告書

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公開日: 2013-05-31   更新日: 2019-07-29  

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