| 研究課題/領域番号 |
24K12353
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分56020:整形外科学関連
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
亀井 直輔 宮崎大学, 医学部, 教授 (70444685)
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| 研究分担者 |
味八木 茂 広島大学, 病院(医), 特定教授 (10392490)
中前 稔生 広島大学, 病院(医), 准教授 (40595758)
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| 研究期間 (年度) |
2024-04-01 – 2027-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2024年度)
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| 配分額 *注記 |
4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円)
2026年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2025年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2024年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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| キーワード | マイクロRNA / クラスター / 髄鞘形成 / 中枢神経 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
これまでに髄鞘形成におけるマイクロRNAクラスター（miR-23－27－24）の機能的役割について報告したが，髄鞘特異的にmiR-23－27－24を欠損させていなかった点で解決すべき課題が残っている。そこで本研究では，髄鞘特異的なタンパクであるPLPを発現するオリゴデンドロサイトのみでmiR-23－27－24が欠損するPLP-Cre miR-23－27－24ノックアウトマウスを用いて，以下の事項を明らかにする。
① 髄鞘特異的なmiR-23－27－24の欠損が髄鞘形成に与える影響
② 幼若期からの成長と成熟期からの加齢に分けたmiR-23－27－24欠損の影響
③ 髄鞘におけるmiR-23－27－24の標的遺伝子とその下流因子の動態
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| 研究実績の概要 |
マイクロリボ核酸（miRNA）のうち、miR-23a/bクラスターを構成するmiR-23aとmiR-27aは、中枢神経系におけるミエリン化において異なる役割を果たすことが知られています。しかし、同じクラスター内のmiRNAが補完的に機能する可能性が指摘されているため、クラスター特異的なmiRNAの機能は依然として議論の的となっている。
本研究では、中枢神経の髄鞘特異的にmiR-23a/bクラスターをノックダウンされるマウスし，空間的、時間的に限定したmiR-23a/bクラスターの欠損が髄鞘形成に与える影響を明らかにすることとした。
タモシキフェン投与によりproteolipid protein (PLP) を発現する髄鞘特異的にmiR-23a/bクラスターを欠損させるコンディショナルノックアウトマウス (Plp CreERT2;miR-23a/b cluster) を作製した。生後7日齢あるいは10週齢でタモキシフェンを投与し, それぞれ生後10週齢と12ヶ月齢でのmiR-23a/bクラスター欠損の影響を解析した。またタモキシフェンを投与しなかったマウスをコントロールとして用いた。
コントロールマウスと比較してHanging wire testとBalance beam testにおける運動機能の低下が認められた。また, 電子顕微鏡検査とLuxol Fast Blue染色により, KOマウスの脳と脊髄における髄鞘および脳脊髄白質の形成不全が明らかになった。
これらの結果は、miR-23a/bクラスターが成長と老化におけるミエリン化に重要な影響を与えることを示している。
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| 現在までの達成度 |
現在までの達成度
2: おおむね順調に進展している
理由
Hanging wire testとBalance beam testを用いた運動機能の評価と，電子顕微鏡検査とLuxol Fast Blue染色を用いた髄鞘形成の評価が終了した。
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| 今後の研究の推進方策 |
ウェスタンブロットを用いたタンパク発現解析とオリゴデンドロサイト前駆細胞 (OPC)と成熟オリゴデンドロサイトのマーカーを用いた免疫組織化学染色を行い、オリゴデンドロサイトの分化やそれに関わるシグナル伝達因子の解析を行う。
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