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次世代型ターゲットトランスジェニック法の技術基盤の整備と実用性の検証

研究課題

研究課題/領域番号 25290035
研究種目

基盤研究(B)

配分区分一部基金
応募区分一般
研究分野 実験動物学
研究機関東海大学

研究代表者

大塚 正人  東海大学, 医学部, 准教授 (90372945)

研究分担者 持田 慶司  理化学研究所, バイオリソースセンター, 専任技師 (60312287)
設楽 浩志  東京都医学総合研究所, 基盤技術研究センター, 主任基盤技術研究職員 (90321885)
研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2016-03-31
研究課題ステータス 完了 (2015年度)
配分額 *注記
17,680千円 (直接経費: 13,600千円、間接経費: 4,080千円)
2015年度: 5,720千円 (直接経費: 4,400千円、間接経費: 1,320千円)
2014年度: 5,720千円 (直接経費: 4,400千円、間接経費: 1,320千円)
2013年度: 6,240千円 (直接経費: 4,800千円、間接経費: 1,440千円)
キーワードトランスジェニックマウス / PITT / Cre-loxP / PhiC31 / Rosa26 / トランスジェニック / PITT法 / 組織特異的プロモーター / ターゲットトランスジェネシス / C57BL/6N
研究成果の概要

既知の遺伝子座位へ1コピーの目的遺伝子を導入することで、期待通りの遺伝子発現を示すトランスジェニック(Tg)マウスを得ることが可能な独自のTgマウス作製手法(PITT法)について、本研究にてCre-loxP系とPhiC31インテグラーゼ系を同時に作用させる「改良型PITT法 (i-PITT法)」を開発することにより、目的遺伝子の挿入効率の向上に成功した。また、複数のドナーベクターを同時に顕微注入することで、“一度に複数系統のTgマウスを得る”ことにも成功している。本技術については標準プロトコルを作成して公開するとともに、C57BL/6N系統の種マウスは理研BRCに寄託した。

報告書

(4件)
  • 2015 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2014 実績報告書
  • 2013 実績報告書
  • 研究成果

    (40件)

すべて 2016 2015 2014 2013 その他

すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (10件) (うち国際共著 2件、 査読あり 9件、 オープンアクセス 5件、 謝辞記載あり 4件) 学会発表 (26件) (うち国際学会 1件、 招待講演 1件) 図書 (2件) 備考 (1件)

  • [国際共同研究] ネブラスカ大学医療センター(米国)

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [雑誌論文] Conditional knockout of Foxc2 gene in kidney: efficient generation of conditional alleles of single-exon gene by double-selection system2016

    • 著者名/発表者名
      Motojima, Masaru; Ogiwara, Sanae; Matsusaka, Taiji; Kim, Sang Yong; Sagawa, Nobuho; Abe, Koichiro; Ohtsuka, Masato
    • 雑誌名

      Mamm Genome

      巻: 27 号: 1-2 ページ: 62-69

    • DOI

      10.1007/s00335-015-9610-y

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Establishment of immortalized mesenchymal stem cells derived from the submandibular glands of tdTomato transgenic mice2015

    • 著者名/発表者名
      Furukawa S., Kuwajima Y., Chosa N., Satoh K., Ohtsuka M., Miura H., Kimura M., Inoko H., Ishisaki A., Fujimura A. and Miura H.
    • 雑誌名

      Exp. Ther. Med.

      巻: 10 ページ: 1380-1386

    • NAID

      120006334507

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] One-step generation of multiple transgenic mouse lines using an improved Pronuclear Injection-based Targeted Transgenesis (i-PITT)2015

    • 著者名/発表者名
      Ohtsuka M., Miura H., Mochida K., Hirose M., Hasegawa A., Ogura A., Mizutani R., Kimura M., Isotani A., Ikawa M., Sato M. and Gurumurthy C. B.
    • 雑誌名

      BMC Genomics

      巻: 16 号: 1 ページ: 274-274

    • DOI

      10.1186/s12864-015-1432-5

    • NAID

      120006957412

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Assessment of artificial miRNA architectures for higher knockdown efficiencies without the undesired effects in mice2015

    • 著者名/発表者名
      Miura H., Inoko H., Tanaka M., Nakaoka H., Kimura M., Gurumurthy C. B., Sato M. and Ohtsuka M.
    • 雑誌名

      PLoS ONE

      巻: 10 号: 8 ページ: e0135919-e0135919

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0135919

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Insertion of sequences at the original provirus integration site of mouse ROSA26 locus using the CRISPR/Cas9 system2015

    • 著者名/発表者名
      Quadros R., Harms D., Ohtsuka M. and Gurumurthy C. B.
    • 雑誌名

      FEBS Open Bio

      巻: 5 号: 1 ページ: 191-197

    • DOI

      10.1016/j.fob.2015.03.003

    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] トランスジェニックマウスの基礎と応用2014

    • 著者名/発表者名
      大塚正人、佐藤正宏
    • 雑誌名

      小児外科

      巻: 46 ページ: 571-574

    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [雑誌論文] Mouse Genome Editing Using the CRISPR/Cas System2014

    • 著者名/発表者名
      Harms DW.*, Quadros RM., Seruggia D., Ohtsuka M., Takahashi G., Montoliu L., and Gurumurthy CB
    • 雑誌名

      Curr Protoc Hum Genet

      巻: 83 号: 1

    • DOI

      10.1002/0471142905.hg1507s83

    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] PiggyBac-mediated generation of stable transfectants with surface HLA expression from a small number of cells.2013

    • 著者名/発表者名
      Miura H., Inoko H., Inoue I., Okada Y., Tanaka M., Sato M. and Ohtsuka M.
    • 雑誌名

      Anal. Biochem

      巻: 437 号: 1 ページ: 29-31

    • DOI

      10.1016/j.ab.2013.02.003

    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Improvement of pronuclear injection-based targeted transgenesis (PITT) by iCre mRNA-mediated site-specific recombination2013

    • 著者名/発表者名
      Ohtsuka M, Miura H, Hayashi H, Nakaoka H, Kimura M, Sato M, Gurumurthy CB, Inoko H
    • 雑誌名

      Transgenic Research

      巻: 22 号: 4 ページ: 873-875

    • DOI

      10.1007/s11248-013-9703-x

    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Site-targeted non-viral gene delivery by direct DNA injection into the pancreatic parenchyma and subsequent in vivo electroporation in mice.2013

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Inada E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T and Watanabe S
    • 雑誌名

      Biotechnology Journal

      巻: 8 号: 11 ページ: 1355-1361

    • DOI

      10.1002/biot.201300169

    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] GONAD and Easy (Isi)-CRISPR: novel mouse genome engineering tools2016

    • 著者名/発表者名
      Masato Ohtsuka
    • 学会等名
      13th Transgenic Technology Meeting
    • 発表場所
      Prague, Czech Republic
    • 年月日
      2016-03-20
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] 顕微注入法を介したターゲットトランスジェネシスによるノックダウンマウス作製2015

    • 著者名/発表者名
      三浦浩美、木村穣、大塚正人
    • 学会等名
      第 29 回モロシヌス研究会
    • 発表場所
      神戸 かんぽの宿 有馬 (兵庫県神戸市)
    • 年月日
      2015-07-03
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] マウス受精卵への顕微注入を介したターゲットトランスジェネシス法の改良2015

    • 著者名/発表者名
      大塚 正人、三浦 浩美、佐藤 正宏、木村 穣
    • 学会等名
      第62回日本実験動物学会総会
    • 発表場所
      京都テルサ (京都府京都市)
    • 年月日
      2015-05-28
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] 神経障害標的エステラーゼ遺伝子発現マウスの特性と有機リンの影響2015

    • 著者名/発表者名
      本杉奈美、山村勇貴、三浦浩美、大塚正人、 大久保朋一、吉野美千代、田中正史、 畑中朋美、坂部貢、木村穣
    • 学会等名
      第62回日本実験動物学会総会
    • 発表場所
      京都テルサ (京都府京都市)
    • 年月日
      2015-05-28
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] 人工 miRNA を用いたマウス遺伝子ノックダウンシステムの検証2015

    • 著者名/発表者名
      三浦 浩美、木村 穣、佐藤 正宏、大塚 正人
    • 学会等名
      第62回日本実験動物学会総会
    • 発表場所
      京都テルサ (京都府京都市)
    • 年月日
      2015-05-28
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] Establishment of a co-culture system for simultaneous proliferation of td-Tomato-expressing mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells and undifferentiated blood cells2014

    • 著者名/発表者名
      滝沢 尚希、客本 斉子、大久保 直登、帖佐 直幸、衣斐 美歩、藤原 英明、加茂 政晴、大塚 正人、八重柏 隆、石崎 明
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2014-11-25 – 2014-11-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] オートファジー動態の可視化を目的とした新規トランスジェニックマウスの作出2014

    • 著者名/発表者名
      秦野 伸二、王 、田中 政之、林 英樹、荻原 早苗、岡田 千沙、伊藤 誠敏、福西 菜穂子、飯田 裕美、中村 彩花、大友 麻子、大塚 正人
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2014-11-25 – 2014-11-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 薬剤副作用の発症機序解明の為の、HLA遺伝子発現細胞とHLAトランスジェニックマウスの作製2014

    • 著者名/発表者名
      三浦 浩美、大塚 正人
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2014-11-25 – 2014-11-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] NTE(神経障害標的エステラーゼ)遺伝子発現マウスと有機リン代謝2014

    • 著者名/発表者名
      山村 勇貴、本杉 奈美、三浦 浩美、大塚 正人、大久保 朋一、吉野 美千代、笹川 昇、坂部 貢、木村 穣
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2014-11-25 – 2014-11-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] Rosa26遺伝子座位における組織特異的プロモーター活性の検証2014

    • 著者名/発表者名
      田村 沙亜希、大塚 正人、三浦 浩美、松阪 泰二、安岡 有紀子
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2014-11-25 – 2014-11-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] Concurrent production of multiple targeted transgenic mouse lines with C57BL/6N genetic background by improved PITT2014

    • 著者名/発表者名
      Masato Ohtsuka, Hiromi Miura, Minoru Kimura, Ayako Isotani, Masahito Ikawa, Masahiro Sato, Channabasavaiah Gurumurthy
    • 学会等名
      12th Transgenic Technology Meeting (TT2014)
    • 発表場所
      Edinburgh, Scotland, United Kingdom
    • 年月日
      2014-10-06 – 2014-10-08
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] RepLiCre: Reporter-linked-Cre transgenic mice for efficient use of conditional knockout mouse resources2014

    • 著者名/発表者名
      Channabasavaiah Gurumurthy, Masato Ohtsuka, Rolen Quadros, Donald Harms, Andras Nagy, Kent Lloyd
    • 学会等名
      12th Transgenic Technology Meeting (TT2014)
    • 発表場所
      Edinburgh, Scotland, United Kingdom
    • 年月日
      2014-10-06 – 2014-10-08
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] Targeted insertion of short sequences in the mouse ROSA 26 locus using CRISPR/Cas9 system2014

    • 著者名/発表者名
      Channabasavaiah Gurumurthy, Rolen Quadros, Donald Harms, Masato Ohtsuka
    • 学会等名
      12th Transgenic Technology Meeting (TT2014)
    • 発表場所
      Edinburgh, Scotland, United Kingdom
    • 年月日
      2014-10-06 – 2014-10-08
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] Presence/absence of a marker gene in artificial microrna expression constructs affects knockdown efficiencies in a targeted transgenic system2014

    • 著者名/発表者名
      Hiromi Miura, Minoru Kimura, Masahiro Sato, Masato Ohtsuka
    • 学会等名
      12th Transgenic Technology Meeting (TT2014)
    • 発表場所
      Edinburgh, Scotland, United Kingdom
    • 年月日
      2014-10-06 – 2014-10-08
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] tdTomato遺伝子導入マウス唾液腺由来間葉系幹細胞株の樹立2014

    • 著者名/発表者名
      古川真司、桑島幸紀、畠山慧、帖佐直幸、佐藤和朗、大塚正人、石崎明、藤村朗、三浦廣行
    • 学会等名
      第56回歯科基礎医学会学術大会・総会
    • 発表場所
      福岡国際会議場
    • 年月日
      2014-09-25 – 2014-09-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] マウス骨髄由来異種細胞共培養系の確立2014

    • 著者名/発表者名
      滝沢尚希、客本斉子、大久保直登、帖佐直幸、衣斐美歩、加茂政晴、大塚正人、八重柏隆、石崎明
    • 学会等名
      第56回歯科基礎医学会学術大会・総会
    • 発表場所
      福岡国際会議場
    • 年月日
      2014-09-25 – 2014-09-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] ファイブロサイトに注目した顎関節領域疾患発症機構の解明2014

    • 著者名/発表者名
      衣斐美歩、堀江沙和、帖佐直幸、吉田茉莉子、加茂政晴、客本斉子、大塚正人、佐原資謹、藤村朗、石崎明
    • 学会等名
      第56回歯科基礎医学会学術大会・総会
    • 発表場所
      福岡国際会議場
    • 年月日
      2014-09-25 – 2014-09-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] マウス受精卵への顕微注入法を介したRosa26 遺伝子座位へのターゲットトランスジェネシス2014

    • 著者名/発表者名
      大塚正人
    • 学会等名
      第28回モロシヌス研究会
    • 発表場所
      修善寺総合会館
    • 年月日
      2014-06-27 – 2014-06-28
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] Neuropathy target esterase(神経障害標的エステラーゼ)遺伝子導入マウスの特徴2014

    • 著者名/発表者名
      木村 穣、加賀谷 徹、本杉奈美、割田貴之、三浦浩美、大塚正人、大久保朋一、坂部 貢
    • 学会等名
      第23回日本臨床環境医学会学術集会
    • 発表場所
      京都大学百周年時計台記念館国際交流ホール
    • 年月日
      2014-06-14 – 2014-06-15
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] C57BL/6Nを遺伝的背景に持つターゲットトランスジェネシス用種マウスの作製と評価2014

    • 著者名/発表者名
      大塚 正人, 三浦 浩美, 磯谷 綾子, 伊川 正人, 佐藤 正宏, 木村 穣
    • 学会等名
      第61回日本実験動物学会総会
    • 発表場所
      札幌コンベンションセンター
    • 年月日
      2014-05-15 – 2014-05-17
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 受精卵へのiCre mRNA注入によるターゲットトランスジェネシス法(PITT法)の効率改善2013

    • 著者名/発表者名
      大塚正人、三浦浩美、佐藤正宏、木村穣
    • 学会等名
      第60回日本実験動物学会総会
    • 発表場所
      つくば国際会議場
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] Neuropathy target esterase(神経障害標的エステラーゼ)遺伝子導入マウスの作成2013

    • 著者名/発表者名
      加賀谷徹、割田貴之、三浦浩美、大塚正人、大久保朋一、坂部貢、木村穣
    • 学会等名
      第22回日本臨床環境医学会学術集会
    • 発表場所
      北里大学白金キャンパス
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] トランスポゾンPiggyBacシステムによる複数遺伝子のブタ細胞への同時導入2013

    • 著者名/発表者名
      郡山美優、稲田絵美、齋藤一誠、三浦浩美、大塚正人、中村伸吾、桜井敬之、渡部聡、三好和睦、佐藤正宏
    • 学会等名
      第106回日本繁殖生物学会
    • 発表場所
      東京農工大学農学部府中キャンパス
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] Generation of Knockdown Mice Using Pronuclear Injection-Based Targeted Transgenesis: Advantages and Limitations2013

    • 著者名/発表者名
      Hiromi Miura, Masato Ohtsuka
    • 学会等名
      The 27th International Mammalian Genome Conference
    • 発表場所
      Salamanca, Spain
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] 赤色蛍光強発現 tg マウス唾液腺細胞の蛍光発現に関する研究2013

    • 著者名/発表者名
      古川真司、畠山慧、堀智樹、石崎明、大塚正人、藤村朗、金野吉晃、清野幸男、三浦廣行
    • 学会等名
      第55回歯科基礎医学会学術大会・総会
    • 発表場所
      岡山コンベンションセンター
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [学会発表] 赤色蛍光強発現tgマウスの唾液腺細胞の蛍光発現 第2報2013

    • 著者名/発表者名
      古川真司、畠山慧、木村仁迪、青松恵美子、石崎明、大塚正人、藤村朗、金野吉晃、清野幸男、三浦廣行
    • 学会等名
      第72回日本矯正歯科学会大会
    • 発表場所
      キッセイ文化ホール(長野県松本文化会館)
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [図書] 遺伝子改変法①部位特異的組換え酵素システム.ES iPS細胞実験スタンダード2014

    • 著者名/発表者名
      大塚正人、角田茂
    • 出版者
      羊土社
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [図書] Development and recent progress in the pronuclear injection-based targeted transgenesis method by site-specific recombination in mice. in Proceedings of the Genetic Transformation Technologies (plants and animals)2013

    • 著者名/発表者名
      Ohtsuka M.
    • 出版者
      MEDIMOND
    • 関連する報告書
      2013 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://masato2.wix.com/ohtsuka-lab

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書

URL: 

公開日: 2013-05-21   更新日: 2022-01-27  

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