無細胞蛋白質アレイによる炎症カスパーゼ基質シグナル伝達分子の網羅的同定と解析

• 研究課題/領域番号: 25290077
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 一部基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: システムゲノム科学
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 澤崎 達也 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 教授 (50314969)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 18,460千円 (直接経費: 14,200千円、間接経費: 4,260千円); 2015年度: 5,330千円 (直接経費: 4,100千円、間接経費: 1,230千円); 2014年度: 5,330千円 (直接経費: 4,100千円、間接経費: 1,230千円); 2013年度: 7,800千円 (直接経費: 6,000千円、間接経費: 1,800千円)
• キーワード: カスパーゼ１ / 無細胞 / プロテインアレイ / 基質探索 / プロテアーゼ / 炎症 / 蛋白質 / 基質 / カスパーゼ / 無細胞タンパク質合成 / プロテオリシス / タンパク質 / 切断 / コムギ胚芽

研究成果の概要

約1000種類のシグナル伝達タンパク質cDNAクローン［300種類のプロテインキナーゼ（PK）および700種類の１回膜貫通領域タンパク質（sTMP）］を用いて、Ｎ末端にFlagタグ、C末端にビオチン化した組換えプロテインアレイ（NCタグプロテインアレイ）を合成することに成功し、カスパーゼ１（CASP1）で切断される基質を探索した。その結果、１種類のタンパク質がCASP1で切断される基質として見出された。それらの切断部位を同定し、in vitroおよび細胞内で切断されることを明らかとした。さらに、C末側の切断断片が核内で安定に存在することが確認された。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of RyDEN (C19orf66) as an interferon-stimulated cellular inhibitor against dengue virus replication. (2016)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Y, Chin WX, Han Q, Ichiyama K, Lee CH, Eyo ZW, Ebina H, Takahashi H, Takahashi C, Tan BH, Hishiki T, Ohba K, Matsuyama T, Koyanagi Y, Tan YJ, Sawasaki T, Chu1 JJ, Vasudevan SG, Sano K, Yamamoto N.
  • 雑誌名: PLoS Pathogen 巻: 12 号: 1 ページ: 275-275
  • DOI: 10.1186/s12870-015-0660-9
  • NAID: 120005763386
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Production of monoclonal antibodies against GPCR using cell-free synthesized GPCR antigen and biotinylated liposome-based interaction assay (2015)
  • 著者名/発表者名: Takeda H, Ogasawara T, Ozawa T, Muraguchi A, Jih PJ, Morishita R, Uchigashima M, Watanabe M, Fujimoto T, Iwasaki T, Endo Y, Sawasaki T
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 5 号: 1 ページ: 11333-11333
  • DOI: 10.1038/srep11333
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Members of the Plant CRK-superfamily are Capable of trans-/auto-Phosphorylation of Tyrosine Residues. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nemoto K, Takemori N, Seki M, Shinozaki K, Sawasaki T.
  • 雑誌名: The Journal of Biological Chemistry 巻: 290 号: 27 ページ: 16665-16677
  • DOI: 10.1074/jbc.m114.617274
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Na,K-ATPaseα3 is a death target of alzheimer patient amyloid-β assembly. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohnishi T, ..., Matsui K, ..., Hoshi M （計35名, 記載欄不足）
  • 雑誌名: Proc Natl Acad Sci U S A 巻: 112 号: 32 ページ: 4465-4474
  • DOI: 10.1073/pnas.1421182112
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Functional Characterization of the Receiver Domain for Phosphorelay Control in Hybrid Sensor Kinases. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta E, Kinoshita E, Eguchi Y, Yanagihara S, Edahiro K, Inoue Y, Taniguchi M, Yoshida M, Yamamoto K, Takahashi H, Sawasaki T, Utsumi R, Koike T.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 号: 7 ページ: e0132598-e0132598
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0132598
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] High-throughput synthesis of stable isotope-labeled transmembrane proteins for targeted transmembrane proteomics using a wheat germ cell-free protein synthesis system. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takemori N, Takemori A, Matsuoka K, Morishita R, Matsushita N, Aoshima M, Takeda H, Sawasaki T, Endo Y, Higashiyama S.
  • 雑誌名: Mol Biosyst. 巻: 11 号: 2 ページ: 361-365
  • DOI: 10.1039/c4mb00556b
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] MAPK Phosphatase 5 Expression Induced by Influenza and Other RNA Virus Infection Negatively Regulates IRF3 Activation and Type I Interferon Response. (2015)
  • 著者名/発表者名: James SJ, Jiao H, Teh HY, Takahashi H, Png CW, Phoon MC, Suzuki Y, Sawasaki T, Xiao H, Chow VT, Yamamoto N, Reynolds JM, Flavell RA, Dong C, Zhang Y.
  • 雑誌名: Cell Rep. 巻: 10 号: 10 ページ: 1722-1734
  • DOI: 10.1016/j.celrep.2015.02.030
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] In situ visualization of plasma cells producing antibodies reactive to Porphyromonas gingivalis in periodontitis: The application of the enzyme-labeled antigen method. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mizutani Y, Tsuge S, Takeda H, Hasegawa Y, Shiogama K, Onouchi T, Inada KI, Sawasaki T, Tsutsumi Y.
  • 雑誌名: Mol Oral Microbiol. 巻: 29 ページ: 156-173
  • DOI: 10.1111/mom.12052
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Involvement of Hepatitis C Virus NS5A Hyperphosphorylation Mediated by Casein Kinase I-α in Infectious Virus Production. (2014)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Matsunaga S, Takahashi H, Nakashima K, Kimura Y, Ito M, Matsuda M, Murayama A, Kato T, Hirano H, Endo Y, Lemon SM, Wakita T, Sawasaki T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Virol 巻: 88(13) 号: 13 ページ: 7541-55
  • DOI: 10.1128/jvi.03170-13
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Pctaire1/Cdk16 promotes skeletal myogenesis by inducing myoblast migration and fusion. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shimizu K, Uematsu A, Imai Y, Sawasaki T.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 巻: 588 号: 17 ページ: 3030-3037
  • DOI: 10.1016/j.febslet.2014.05.060
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] creenCap3: Improving prediction of caspase-3 cleavage sites using experimentally verified noncleavage sites. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fu SC, Imai K, Sawasaki T, Tomii K.
  • 雑誌名: Proteomics. 巻: 14 号: 17-18 ページ: 2042-2046
  • DOI: 10.1002/pmic.201400002
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of RFPL3 protein as a novel E3 ubiquitin ligase modulating the integration activity of human immunodeficiency virus, type 1 preintegration complex using a microtiter plate-based assay. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tan BH, Suzuki Y, Takahashi H, Ying PH, Takahashi C, Han Q, Chin WX, Chao SH, Sawasaki T, Yamamoto N, Suzuki Y.
  • 雑誌名: J Biol Chem. 巻: 289 号: 38 ページ: 26368-26382
  • DOI: 10.1074/jbc.m114.561662
  • 査読あり
• [雑誌論文] The apoptotic initiator caspase-8: its functional ubiquity and genetic diversity during animal evolution. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sakamaki K, Shimizu K, Iwata H, Imai K, Satou Y, Funayama N, Nozaki M, Yajima M, Nishimura O, Higuchi M, Chiba K, Yoshimoto M, Kimura H, Gracey AY, Shimizu T, Tomii K, Gotoh O, Akasaka K, Sawasaki T, Miller DJ.
  • 雑誌名: Mol Biol Evol. 巻: 31 号: 12 ページ: 3282-3301
  • DOI: 10.1093/molbev/msu260
  • 査読あり
• [雑誌論文] Overexpression of the PAP1 transcription factor reveals a complex regulation of flavonoid and phenylpropanoid metabolism in Nicotiana tabacum plants attacked by Spodoptera litura. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mitsunami T, Nishihara M, Galis I, Alamgir KM, Hojo Y, Fujita K, Sasaki N, Nemoto K, Sawasaki T, Arimura G.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 9
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The ligand binding ability of dopamine D1 receptors synthesized using a wheat germ cell-free protein synthesis system with liposomes. (2014)
  • 著者名/発表者名: Arimitsu E, Ogasawara T, Takeda H, Sawasaki T, Ikeda Y, Hiasa Y, Maeyama K.
  • 雑誌名: Eur J Pharmacol. 巻: 745 ページ: 117-122
  • DOI: 10.1016/j.ejphar.2014.10.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Myosin phosphatase is inactivated by caspase-3 cleavage and phosphorylation of myosin phosphatase targeting subunit 1 during apoptosis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Iwasaki T, Katayama T, Kohama K, Endo Y, Sawasaki T.
  • 雑誌名: Mol Biol Cell 巻: 24 号: 6 ページ: 748-756
  • DOI: 10.1091/mbc.e11-08-0740
  • 査読あり
• [雑誌論文] Anti-interleukin-5 and multiple autoantibodies are associated with human atherosclerotic diseases and serum interleukin-5 levels (2013)
  • 著者名/発表者名: Ishigami T, Abe K, Aoki I, Minegishi S, Ryo A, Matsunaga S, Matsuoka K, Taleda H, Sawasaki T, Umemura S, Endoh Y.
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 27 号: 9 ページ: 3437-45
  • DOI: 10.1096/fj.12-222653
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nek5, a novel substrate for caspase-3, promotes skeletal muscle differentiation by un-reaulatine casnase activity (2013)
  • 著者名/発表者名: 清水康平、澤崎達也
  • 雑誌名: FEBS Letters 巻: Vol.587 号: 14 ページ: 2219-2225
  • DOI: 10.1016/j.febslet.2013.05.049
  • 査読あり
• [雑誌論文] Suppression of DS1 phosphatidic acid phosphatase confirms resistance to Ralstonia solanacearum in Nicotiana benthamiana (2013)
  • 著者名/発表者名: Masahiro Nakano, Masahiro Nishihara, Hirofumi Yoshioka, Kouhei Ohnishi, Yasufumi Hikichi, A kinori Kiba
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8 号: 9 ページ: e75124-e75124
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0075124
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cell-free based protein array technology for analyses of protein kinases and ubiquitin ligases. (2013)
  • 著者名/発表者名: Sawasaki T, Takeda H, Takahashi H, Nemoto K.
  • 雑誌名: Seikagaku 巻: 85 ページ: 438-446
  • NAID: 10031184264
• [学会発表] コムギ無細胞系を基盤としたサイトカイン関連プロテインアレイを用いた カスパーゼ1 新規基質の探索と解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 増原 有紀, 高橋 宏隆, 桑原 誠, 山下 政克, 澤崎 達也
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会 合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] 脱ユビキチン化酵素CYLDを分解し、がん化を促進するE3リガーゼの同定・解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 上松 篤史, 高橋 宏隆, 竹田 浩之, 徳永 文稔, 山田 六平, 宮城 洋平, 澤崎 達也
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会 合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] コムギ無細胞系を用いた287種類のヒトとマウスからなるE3ユビキチンリガーゼプロテインアレイの作製と生化学的解析への応用 (2015)
  • 著者名/発表者名: 高橋 宏隆, 中島 達朗, 今村 芽依, 高橋 千佳子, 澤崎 達也
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会 合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] コムギ無細胞系を基盤とした脱ユビキチン化酵素CYLDおよびOTULINの阻害剤開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 山中 聡士, 高橋 宏隆, 徳永 文稔, 澤崎 達也
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会 合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] コムギ無細胞系を用いたキナーゼ基質の探索技術 (2015)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第１５回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: あわぎんホール（徳島県徳島市）
  • 年月日: 2015-06-24
  • 招待講演
• [学会発表] 大規模生化学的解析はバイオインフォマティクス解析を凌駕するか？ (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 産総研・東京大学合同 創薬等支援技術基盤プラットフォーム(PDIS)ワークショップ ～実験とバイオインフォマティクスの協奏による構造生命科学～
  • 発表場所: 産総研臨海副都心センター別館（東京都江東区）
  • 年月日: 2014-12-18
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞技術を基盤とした化合物スクリーニング (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞HTSを用いた創薬基盤技術 (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都国際会議場（京都府京都市）
  • 年月日: 2014-10-15 – 2014-10-18
  • 招待講演
• [学会発表] 無細胞技術を基盤とした自己抗体探索によるアンチエイジング医学のブレークスルーをめざして (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第14回 日本抗加齢医学会総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2014-06-06 – 2014-06-08
  • 招待講演
• [学会発表] GPCR研究のためのコムギ無細胞系プロテオリポソーム技術 (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第１１回GPCR研究会
  • 発表場所: 日本科学未来館 みらいCANホール（東京都江東区）
  • 年月日: 2014-05-09 – 2014-05-10
  • 招待講演
• [学会発表] 創薬等プラットフォームにおけるコムギ無細胞基盤膜蛋白質生産と高親和膜蛋白質抗体作成技術 (2013)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也、竹田 浩之
  • 学会等名: 第13回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: とりぎん文化会館（鳥取県）
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞蛋白質合成系を基盤とした膜タンパク質解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第65回日本細胞生物学会大会
  • 発表場所: ウインクあいち（愛知）
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞蛋白質合成系を基盤とした膜蛋白質の合成・精製と細胞への導入技術 (2013)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也、竹田 浩之
  • 学会等名: 第65回日本細胞生物学会大会
  • 発表場所: ウインクあいち（愛知）
  • 招待講演
• [学会発表] 無細胞プロテインアレイを用いたプロテインキナーゼおよびユビキチンリガーゼの基質タンパク質探索技術 (2013)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也, 根本 圭一郎, 高橋 宏隆, 竹田 浩之
  • 学会等名: 第86回日本生化学会大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞蛋白質合成技術と乳がんバイオマーカー探索
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 日本プロテオーム学会主催プロテオサイエンスセンター JHUPOサテライトジョイントシンポジウム
  • 発表場所: 愛媛大学総合情報メデイアセンター・メディアホール
  • 招待講演
• [学会発表] 創薬等プラットフォーム事業におけるコムギ無細胞基盤蛋白質生産支援と高親和抗体構築技術開発
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: よこはまNMR構造生物学研究会 第47回ワークショップ「創薬等プラットフォーム」
  • 発表場所: 理化学研究所横浜研究所
  • 招待講演
• [備考] CELL-FREE Technology
  • URL: http://www.pros.ehime-u.ac.jp/cell-free/index.html
• [備考] CELL-FREE Technology
  • URL: http://www.pros.ehime-u.ac.jp/cell-free/
• [備考] CELL-FREE Technology
  • URL: http://www.pros.ehime-u.ac.jp/cell-free/index.html