人工モノクローナル魚類抗体の迅速作出法の開発およびその応用

• 研究課題/領域番号: 25292125
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 一部基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 水圏生命科学
• 研究機関: 東京海洋大学
• 研究代表者: 近藤 秀裕 東京海洋大学, 学術研究院, 准教授 (20314635)
• 研究分担者: 廣野 育生 東京海洋大学, 学術研究院, 教授 (00270926)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 18,850千円 (直接経費: 14,500千円、間接経費: 4,350千円); 2017年度: 3,120千円 (直接経費: 2,400千円、間接経費: 720千円); 2016年度: 3,120千円 (直接経費: 2,400千円、間接経費: 720千円); 2015年度: 3,120千円 (直接経費: 2,400千円、間接経費: 720千円); 2014年度: 3,120千円 (直接経費: 2,400千円、間接経費: 720千円); 2013年度: 6,370千円 (直接経費: 4,900千円、間接経費: 1,470千円)
• キーワード: 魚介類免疫学 / 抗体 / バイオテクノロジー / 免疫学

研究成果の概要

本研究は魚類の抗体産生細胞を単離し、得られた細胞由来の遺伝子を用いて抗原に特異的に結合する人工抗体を作出することを目的とした。ヒラメ、ニジマスおよびチョウザメを対象に、種々の抗原で免疫した際の抗体価の上昇を測定し、抹消白血球より抗原を特異的に認識する細胞の分離を試みたところ、チョウザメでのみ病原微生物菌体を認識し、抗体遺伝子を発現する細胞を分離することができた。今後本手法を改良していくことで、魚類抗体遺伝子を用いた人工抗体を作出できると考えている。
さらに本研究では、魚類の抗体産生に関する免疫機構に関わる遺伝子群の同定および解析を行い、魚類において抗体価を高めるための手法についても検討した。

研究成果

• [雑誌論文] Development and evaluation of polyclonal antisera for detection of the IgM heavy chain of multiple fish species (2017)
  • 著者名/発表者名: Jirapongpairoj Walissara、Hirono Ikuo、Kondo Hidehiro
  • 雑誌名: Journal of Immunological Methods 巻: 449 ページ: 71-75
  • DOI: 10.1016/j.jim.2017.06.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] LAMP-1-chimeric DNA vaccines enhance the antibody response in Japanese flounder, Paralichthys olivaceus (2017)
  • 著者名/発表者名: Rondon-Barragan Iang、Nozaki Reiko、Hirono Ikuo、Kondo Hidehiro
  • 雑誌名: Fish & Shellfish Immunology 巻: 67 ページ: 546-553
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2017.06.045
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of 2 novel type I IFN genes in Japanese flounder, Paralichthys olivaceus (2017)
  • 著者名/発表者名: Hu Yiwen、Yoshikawa Takaki、Chung Seangmin、Hirono Ikuo、Kondo Hidehiro
  • 雑誌名: Fish & Shellfish Immunology 巻: 67 ページ: 7-10
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2017.05.054
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular cloning and expression analysis of NOD-like receptor 5 in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) after injection with two different formalin-killed pathogenic bacteria and poly (I:C). (2017)
  • 著者名/発表者名: Thanasaksiri K, Hirono I, Kondo H.
  • 雑誌名: Dev Comp Immunol. 巻: 67 ページ: 481-484
  • DOI: 10.1016/j.dci.2016.08.017
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Temperature-dependent regulation of gene expression in Japanese flounder Paralichthys olivaceus kidney after Edwardsiella tarda formalin-killed cells. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kaneshige N, Jirapongpairoj W, Hirono I, Kondo H.
  • 雑誌名: Fish Shellfish Immunol. 巻: 59 ページ: 298-304
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2016.10.048
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Identification and expression analysis of suppressors of cytokine signaling (SOCS) of Japanese flounder Paralichthys olivaceus. (2016)
  • 著者名/発表者名: Thanasaksiri K, Hirono I, Kondo H.
  • 雑誌名: Fish Shellfish Immunol. 巻: 58 ページ: 145-152
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2016.09.018
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Identification of endonucleasedomain-containing 1 gene in Japanese flounder Paralichthys olivaceus. (2016)
  • 著者名/発表者名: Lyu ZZ, Zhao BB, Koiwai K, Hirono I, Kondo H.
  • 雑誌名: Fish Shellfish Immunol. 巻: 50 ページ: 43-49
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2016.01.017
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Temperature-dependent regulation of gene expression in poly (I:C)-treated Japanese flounder, Paralichthys olivaceus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Thanasaksiri K, Hirono I, Kondo H.
  • 雑誌名: Fish Shellfish Immunol. 巻: 45 号: 2 ページ: 835-840
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2015.05.036
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative analysis of two types of CXCL8 from Japanese flounder (Paralichthys olivaceus). (2015)
  • 著者名/発表者名: Zhao B, Katagiri T, Kondo H, Hirono I.
  • 雑誌名: Dev Comp Immunol. 巻: 52 号: 1 ページ: 37-47
  • DOI: 10.1016/j.dci.2015.04.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cloning and expression analysis of three novel CC chemokine genes from Japanese flounder (Paralichthys olivaceus). (2014)
  • 著者名/発表者名: Zou GG, Nozaki R, Kondo H, Hirono I.
  • 雑誌名: Fish and Shellfish Immunology 巻: 40 号: 2 ページ: 507-513
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2014.08.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] Influence of temperature on Mx gene expression profiles and the protection of sevenband grouper, Epinephelus septemfasciatus, against red-spotted grouper nervous necrosis virus (RGNNV) infection after poly (I:C) injection. (2014)
  • 著者名/発表者名: Thanasaksiri K, Sakai N, Yamashita H, Hirono I, Kondo H.
  • 雑誌名: Fish and Shellfish Immunology 巻: 40 号: 2 ページ: 441-445
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2014.07.035
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comprehensive gene expression profiling in Japanese flounder kidney after injection with two different formalin-killed pathogenic bacteria. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kondo H, Kawana Y, Suzuki Y, Hirono I.
  • 雑誌名: Fish and Shellfish Immunology 巻: 41 号: 2 ページ: 437-440
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2014.09.038
  • 査読あり
• [学会発表] Identification and characterization of Fc receptor-like proteins in Japanese flounder Paralichthys olivaceus (2018)
  • 著者名/発表者名: Walissara Jirapongpairoj, Ikuo Hirono, Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 平成30年度日本水産学会春季大会
• [学会発表] 抗濾胞刺激ホルモン抗体の誘導によるニジマスの成熟阻害 (2018)
  • 著者名/発表者名: 高瀬研志・安倍裕喜・野崎玲子・原川昭宏・横田昌樹・廣野育生・近藤秀裕
  • 学会等名: 平成30年度日本水産学会春季大会
• [学会発表] 非免疫チョウザメ血清からの抗原特異抗体の精製および性状解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 安本玖太郎・小祝敬一郎 ・平岡潔・廣野育生・近藤秀裕
  • 学会等名: 平成30年度日本水産学会春季大会
• [学会発表] Effects of FCA on the FKC vaccine efficiency against Edwardsiella tarda in Japanese flounder (2017)
  • 著者名/発表者名: Seangmin CHUNG・Ikuo HIRONO・Hidehiro KONDO
  • 学会等名: 平成29年度日本魚病学会春季大会
  • 発表場所: 日本大学、藤沢市
  • 年月日: 2017-03-11
• [学会発表] Application of gene expression profiling in vaccine developments (2017)
  • 著者名/発表者名: Hidehiro Kondo, Norie Kaneshige, Seangmin Chung, Ikuo Hirono
  • 学会等名: Biotechnology Havana 2017
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Development of a novel peptide antibodies for immunoglobulin M heavy chain detection in various fish species (2017)
  • 著者名/発表者名: Walissara Jirapongpairoj, Ikuo Hirono and Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 日本水産学会85周年記念シンポジウム
  • 国際学会
• [学会発表] Induction of autoantibody against follicle stimulating hormone (FSH) in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) by injection of recombinant FSH protein (2017)
  • 著者名/発表者名: Kenji Takase, Reiko Nozaki, Akihiro Harakawa, Masaki Yokota, Ikuo Hirono and Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 日本水産学会85周年記念シンポジウム
  • 国際学会
• [学会発表] ヒラメにおける LPS 接種によるインターフェロンγ発現誘導に及ぼすフロイントコンプリートアジュバントの影響 (2017)
  • 著者名/発表者名: 廣澤英里子・廣野育生・近藤秀裕
  • 学会等名: 平成29年度日本魚病学会秋季大会
• [学会発表] Freund’s adjuvants enhance antibody responses and suppress the upregulation of IFNγ and IL-12 mRNA levels in Japanese flounder (2017)
  • 著者名/発表者名: Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 18th International Conference on Diseases of Fish and Shellfish
  • 国際学会
• [学会発表] Development of peptide antibody for immunoglobulin detection in fish (2017)
  • 著者名/発表者名: Walissara Jirapongpairoj, Ikuo Hirono and Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 10th Symposium on Diseases in Asian Aquaculture
  • 国際学会
• [学会発表] NGS analysis of cytokine gene expression profiles revealed the changes of absolute mRNA levels after po;yI:C treatment in Japanese flounder Paralichthys olivaceus (2017)
  • 著者名/発表者名: Hidehiro Kondo, Takaki Yoshikawa, Reiko Nozaki, Ikuo Hirono
  • 学会等名: 11th Asia-Pacific Marine Biotechnology Conference
  • 国際学会
• [学会発表] ニジマス FSH 組換えタンパクの接種による抗 FSH 自己抗体の誘導 (2017)
  • 著者名/発表者名: 高瀬 研志，野崎 玲子，廣野 育生，近藤 秀裕
  • 学会等名: 第19回マリンバイオテクノロジー学会
• [学会発表] Enhancement of antibody response by LAMP1 chimeric antigen in a DNA vaccine (2016)
  • 著者名/発表者名: Iang S Rondon, Reiko Nozaki, Ikuo Hirono, Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 2nd International Conference of Fish and Shellfish Immunology
  • 発表場所: Portland, Maine
  • 年月日: 2016-06-26
  • 国際学会
• [学会発表] Identification and characterization of Endonuclease domain-containing 1, a novel non-specific nuclease in Japanese flounder Paralichthys olivaceus (2015)
  • 著者名/発表者名: Zhezhe Lyu, Beibei Zhao, Keiichiro Koiwai, Ikuo Hirono, Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 平成27年度日本魚病学会秋季大会
  • 発表場所: 東京大学、東京
  • 年月日: 2015-09-26
• [学会発表] Identification and characterization of Thrombospondin-1a of Japanese flounder Paralichthys olivaceus (2015)
  • 著者名/発表者名: Chung Seangmin, Hidehiro Kondo, Ikuo Hirono
  • 学会等名: 平成27年度日本魚病学会秋季大会
  • 発表場所: 東京大学、東京
  • 年月日: 2015-09-26
• [学会発表] IDENTIFICATION OF THE GENES INVOLVED IN ANTIGEN PRESENTATION AND T-CELL DEVELOPMENT IN JAPANESE FLOUNDER (PARALICHTHYS OLIVACEUS) TO EVALUATE THE VACCINE EFFICACY (2015)
  • 著者名/発表者名: H. Kondo, S. Aoka, N. Kaneshige, I. Hirono
  • 学会等名: 17th EAFP Conference
  • 発表場所: Las Palmas, Spain
  • 年月日: 2015-09-07
• [学会発表] Identification and expression analysis of suppressor of cytokine signaling (SOCS) in Japanese flounder Paralichthys olivaceus (2015)
  • 著者名/発表者名: Kittipong Thanasaksiri, Ikuo Hirono, Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 13th Congress of International Society of Developmental and Comparative Immunology
  • 発表場所: Murcia, Spain
  • 年月日: 2015-06-29
• [学会発表] Different rearing temperatures strongly influence on both type I and II interferon signaling (2015)
  • 著者名/発表者名: Hidehiro Kondo, Kittipong Thanasaksiri, Norie Kaneshige, Ikuo Hirono
  • 学会等名: 13th Congress of International Society of Developmental and Comparative Immunology
  • 発表場所: Murcia, Spain
  • 年月日: 2015-06-29
• [学会発表] Function analysis of two type of IL-8 from Japanese flounder, Paralichthys olivaceus (2015)
  • 著者名/発表者名: Beibei Zhao, Takayuki Katagiri, Hidehiro Kondo, Ikuo Hirono (TUMSAT)
  • 学会等名: 平成27年度日本魚病学会春季大会
  • 発表場所: 東京海洋大学、品川区
  • 年月日: 2015-03-28
• [学会発表] ヒラメよりクローン化した新規I型インターフェロン（I型IFN-3）の解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 吉川尭希・KittipongThanasaksiri・近藤秀裕・廣野育生（海洋大）
  • 学会等名: 平成27年度日本魚病学会春季大会
  • 発表場所: 東京海洋大学、品川区
  • 年月日: 2015-03-28
• [学会発表] ヒラメT-betおよびGATA遺伝子の構造および発現解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 兼重慶恵、近藤秀裕、廣野育生（海洋大）
  • 学会等名: 平成26年度日本魚病学会秋季大会
  • 発表場所: 九州大学、福岡
  • 年月日: 2014-09-22
• [学会発表] Identification of suppressors of cytokine signaling (SOCS) in Japanese flounder Paralichthys olivaceus (2014)
  • 著者名/発表者名: Kittipong Thanasaksiri • Ikuo Hirono • Hidehiro Kondo（海洋大）
  • 学会等名: 平成26年度日本魚病学会秋季大会
  • 発表場所: 九州大学、福岡
  • 年月日: 2014-09-22
• [学会発表] Effect of temperature on innate immune response of Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) (2014)
  • 著者名/発表者名: Norie Kaneshige*, Hidehiro Kondo and Ikuo Hirono
  • 学会等名: 7th International Symposium on Aquatic Animal Health
  • 発表場所: ポートランド、オレゴン州
  • 年月日: 2014-09-04
• [学会発表] 病原微生物に対するヒラメの初期免疫応答に及ぼす水温の影響
  • 著者名/発表者名: 兼重慶恵・近藤秀裕・廣野育生
  • 学会等名: 平成26年度日本水産学会春季大会
  • 発表場所: 北海道大学、函館
• [学会発表] Effects of temperatures on global gene expression of Japanese flounder Paralichthys olivaceus treated with poly (I:C)
  • 著者名/発表者名: Kittipong Thanasaksiri• Ikuo Hirono • Hidehiro Kondo
  • 学会等名: 平成26年度日本水産学会春季大会
  • 発表場所: 北海道大学、函館