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世界最小サイズのミニブタであるマイクロミニピッグにおける体細胞核移植技術の確立

研究課題

研究課題/領域番号 25450475
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
研究分野 統合動物科学
研究機関鹿児島大学

研究代表者

三好 和睦  鹿児島大学, 農水産獣医学域農学系, 教授 (70363611)

研究分担者 窪田 力  鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 教授 (80420652)
連携研究者 川口 博明  鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 准教授 (60325777)
研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2016-03-31
研究課題ステータス 完了 (2015年度)
配分額 *注記
5,330千円 (直接経費: 4,100千円、間接経費: 1,230千円)
2015年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
2014年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2013年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
キーワード体細胞クローニング / 核移植 / ミニブタ / マイクロミニピッグ
研究成果の概要

振動を与えながら成熟培養した卵子をレシピエント、胎児線維芽細胞をドナーとして使用することにより、マイクロミニピッグ体細胞クローン胚の体外発生が改善された。また、活性化後のバルプロ酸処理は、マイクロミニピッグ体細胞クローン胚の胚盤胞形成率を増加させた。そのような体細胞クローン胚から産子を得ることに成功した。さらに、α-1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子ノックアウト細胞に由来する胚の体外発生も、バルプロ酸処理によって改善した。以上の結果から、マイクロミニピッグにおける効率的な体細胞核移植技術が確立された。また、この技術を応用して遺伝子改変マイクロミニピッグを作出し得る可能性が示された。

報告書

(4件)
  • 2015 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2014 実施状況報告書
  • 2013 実施状況報告書
  • 研究成果

    (20件)

すべて 2015 2014 2013 その他

すべて 雑誌論文 (7件) (うち査読あり 7件、 オープンアクセス 6件、 謝辞記載あり 3件) 学会発表 (10件) (うち招待講演 2件) 備考 (3件)

  • [雑誌論文] Production of cloned miniature pigs expressing high levels of human apolipoprotein(a) in plasma2015

    • 著者名/発表者名
      Ozawa M, Himaki T, Ookutsu S, Mizobe Y, Ogawa J, Miyoshi K, Yabuki A, Fan J, Yoshida M
    • 雑誌名

      PLoS ONE

      巻: 10 号: 7 ページ: e0132155-e0132155

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0132155

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Generation of α-1,3-galactosyltransferase-deficient porcine embryonic fibroblasts by CRISPR/Cas9-mediated knock-in of a small mutated sequence and a targeted toxin-based selection system.2015

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Kagoshima A, Saitoh I, Inada E, Miyoshi K, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
    • 雑誌名

      Domestic Animal Reproduction

      巻: 50 号: 5 ページ: 872-880

    • DOI

      10.1111/rda.12565

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Direct injection of CRISPR/Cas9-related mRNA into cytoplasm of parthenogenetically activated porcine oocytes causes frequent mosaicism for indel mutations.2015

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Koriyama M, Watanabe S, Ohtsuka M, Sakurai T, Inada E, Saitoh I, Nakamura S, Miyoshi K
    • 雑誌名

      International Journal of Molecular Sciences,

      巻: 16 号: 8 ページ: 17838-17856

    • DOI

      10.3390/ijms160817838

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Preincubation with green tea polyphenol extract is beneficial for attenuating sperm injury caused by freezing-thawing in swine.2015

    • 著者名/発表者名
      Kitaji H, Ookutsu S, Sato M, Miyoshi K
    • 雑誌名

      Animal Science Journal

      巻: 86 号: 11 ページ: 922-928

    • DOI

      10.1111/asj.12379

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書 2014 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] A new rolling culture-based in vitro fertilization system capable of reducing polyspermy in porcine oocytes2015

    • 著者名/発表者名
      Kitaji H, Ookutsu S, Sato M, Miyoshi K
    • 雑誌名

      Animal Science Journal

      巻: 86 号: 5 ページ: 494-498

    • DOI

      10.1111/asj.12327

    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Osmolarity- and stage-dependent effects of glycine on parthenogenetic development of pig oocytes2014

    • 著者名/発表者名
      Miyoshi K, Mizobe Y
    • 雑誌名

      Journal of Reproduction and Development

      巻: 60 ページ: 349-354

    • NAID

      130004137829

    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] The combinational use of CRISPR/Cas9-based gene editing and targeted toxin technology enables efficient biallelic knockout of the α-1,3-galactosyltransferase gene in porcine embryonic fibroblasts2014

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Miyoshi K, Nagao Y, Nishi Y, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
    • 雑誌名

      Xenotransplantation

      巻: 21

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] バルプロ酸処理を用いた体細胞クローンマイクロミニピッグの作出2015

    • 著者名/発表者名
      前田昂亮, 秋岡幸兵, 野口倫子, 三浦直樹, 川口博明, 谷本昭英, 三好和睦
    • 学会等名
      第8回日本暖地畜産学会
    • 発表場所
      東海大学(熊本県熊本市)
    • 年月日
      2015-10-24
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] ブタ単為発生卵細胞質へのCRISPR/Cas9系mRNAの直接顕微注入によるゲノム編集は多様な標的遺伝子変異を持つ細胞を生む2015

    • 著者名/発表者名
      佐藤正宏, 郡山実優, 渡部聡, 大塚正人, 桜井敬之, 稲田絵美, 齋藤一誠, 中村伸吾, 三好和睦
    • 学会等名
      第108回日本繁殖生物学会
    • 発表場所
      宮崎大学(宮崎県宮崎市)
    • 年月日
      2015-09-17
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] ミニブタにおける体細胞クローニング技術の確立およびそれを用いた新規商品の評価・開発2015

    • 著者名/発表者名
      三好和睦
    • 学会等名
      先進医用ミニブタの開発と前臨床研究拠点形成プロジェクト第3回公開シンポジウム
    • 発表場所
      鹿児島大学(鹿児島県鹿児島市)
    • 年月日
      2015-03-24
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 次世代型KOシステムCRISPR/Cas9ゲノム編集法による遺伝子改変ブタ作成への可能性2015

    • 著者名/発表者名
      佐藤正宏, 郡山実優, 三好和睦
    • 学会等名
      先進医用ミニブタの開発と前臨床研究拠点形成プロジェクト第3回公開シンポジウム
    • 発表場所
      鹿児島大学(鹿児島県鹿児島市)
    • 年月日
      2015-03-24
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 種々のマイクロミニピッグ体細胞を用いて作出したクローン胚の体外発生2014

    • 著者名/発表者名
      長尾洋三, 三好和睦
    • 学会等名
      第107回日本繁殖生物学会
    • 発表場所
      帯広畜産大学(北海道帯広市)
    • 年月日
      2014-08-21 – 2014-08-23
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩がブタ卵子およびマイクロミニピッグ体細胞クローン胚の体外発生に及ぼす影響2014

    • 著者名/発表者名
      前田昂亮, 三好和睦
    • 学会等名
      第107回日本繁殖生物学会
    • 発表場所
      帯広畜産大学(北海道帯広市)
    • 年月日
      2014-08-21 – 2014-08-23
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] ブタにおけるCRISPR/Cas9, targeted toxin法を用いたmultiple constructsの標的遺伝子導入システムの開発2014

    • 著者名/発表者名
      佐藤正宏, 郡山実優, 三好和睦, 大塚正人, 中村伸吾, 桜井敬之, 渡部聡
    • 学会等名
      第107回日本繁殖生物学会
    • 発表場所
      帯広畜産大学(北海道帯広市)
    • 年月日
      2014-08-21 – 2014-08-23
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] トランスポゾンPiggyBacシステムによる複数遺伝子のブタ細胞への同時導入2013

    • 著者名/発表者名
      郡山実優, 稲田絵美, 齋藤一誠, 三浦浩美, 大塚正人, 中村伸吾, 桜井敬之, 渡部聡, 三好和睦, 佐藤正宏
    • 学会等名
      第106回日本繁殖生物学会
    • 発表場所
      東京農工大学府中キャンパス(東京都)
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] 振動培養装置がヒト体外受精に及ぼす影響2013

    • 著者名/発表者名
      溝部大和, 秋吉俊明, 松尾完, 南志穂, 西垣みなみ, 松崎彰子, 福嶋倫子, 山口敦巳, 岡本純英, 三好和睦
    • 学会等名
      第58回日本生殖医学会
    • 発表場所
      神戸国際会議場(兵庫県)
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] CRISPR/Cas9による遺伝子編集と標的毒素法との組み合わせは、α-1,3-galactosyltransferase遺伝子を完全にKOしたブタ胎仔性線維芽細胞の効率的作製に有効である2013

    • 著者名/発表者名
      佐藤正宏, 三好和睦, 長尾洋三, 西洋平, 大塚正人, 中村伸吾, 桜井敬之, 渡部聡
    • 学会等名
      第36回日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸国際展示場(兵庫県)
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [備考] 鹿児島大学農学部農業生産科学科畜産科学コース家畜繁殖学研究室ホームページ

    • URL

      http://ace1.agri.kagoshima-u.ac.jp/agri0015/

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [備考] 鹿児島大学農学部生物生産学科家畜生産学講座家畜繁殖学研究室ホームページ

    • URL

      http://ace1.agri.kagoshima-u.ac.jp/agri0015/

    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [備考] 鹿児島大学農学部生物生産学科家畜生産学講座家畜繁殖学研究室ホームページ

    • URL

      http://ace1.agri.kagoshima-u.ac.jp/agri0015/

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書

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公開日: 2014-07-25   更新日: 2019-07-29  

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