異種間キメラによるウシES細胞の多能性評価と生殖系列細胞の誘導

• 研究課題/領域番号: 25450480
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 統合動物科学
• 研究機関: 国立研究開発法人農業生物資源研究所
• 研究代表者: 徳永 智之 国立研究開発法人農業生物資源研究所, 動物発生分化研究ユニット, ユニット長 (50355731)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 中途終了 (2015年度)
• 配分額: 5,200千円 (直接経費: 4,000千円、間接経費: 1,200千円); 2015年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2013年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: ウシES細胞 / 異種間キメラ / ES細胞

研究実績の概要

ウシ体外授精胚及び体細胞核移植胚より樹立したES細胞のキメラ形成能を評価する簡便法を開発するため、ウシES細胞をマウス8細胞期胚に注入／集合して異種間キメラ胚を作出し、発生したキメラ胚におけるウシ細胞の局在を調べた。その結果、ウシ細胞はキメラ胚盤胞のICM のみならずTEにも寄与することが判明した。また、ウシES細胞にTet-onシステムを用いたOct3/4遺伝子発現系を導入することにより、Oct3/4遺伝子の発現を補強すると、ウシES細胞のキメラ寄与率が向上することが判明した。しかし、キメラ胚盤胞を胚移植して得られた6.5dcp胚でもウシ細胞の寄与は認められたが、何れも胚胎外組織に僅かに局在するのみであった。同様の傾向は、キメラ胚盤胞をin vitroでoutgrowthさせた場合にも観察された。さらに、ウシES細胞をキメラ作出に供試する前に、Collagen Type4をコートした培養皿で前培養することにより、キメラ胚盤胞の形成率、寄与率が向上することが判明した。後期発生における動態については未確認である。