EXiLE法と質量分析法とを用いたアレルゲンエピトープの網羅的解析技術の開発

• 研究課題/領域番号: 25460082
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物系薬学
• 研究機関: 国立医薬品食品衛生研究所
• 研究代表者: 中村 亮介 国立医薬品食品衛生研究所, 医薬安全科学部, 室長 (50333357)
• 研究分担者: 中村 里香 国立医薬品食品衛生研究所, 代謝生化学部, 研究員 (40643333)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 4,940千円 (直接経費: 3,800千円、間接経費: 1,140千円); 2015年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2014年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2013年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
• キーワード: アレルゲン / EXiLE法 / 質量分析法 / IgE / ルシフェラーゼ / エピトープ / 抗原抗体反応

研究成果の概要

本研究では、我々が近年開発したIgE crosslinking-induced luciferase expression（EXiLE）法に基づき、新しいアレルゲンエピトープの網羅的解析技術を開発することを目指した。卵白アルブミン（OVA）をモデル抗原とし、OVAが液相と固相にある時である種のIgEの架橋活性が異なることを示すとともに、ペプチドをキャリアタンパク質に結合させることにより、極めて微量（数十pM）のエピトープペプチドをEXiLE法で検出できることを示した。今後、本エピトープ解析技術は、低アレルゲン化食品の開発や、より安全なバイオロジクス医薬品の開発等への貢献が期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Use of humanized rat basophilic leukemia reporter cell lines as a diagnostic tool for detection of allergen-specific IgE in allergic patients: Time for a reappraisal? (2015)
  • 著者名/発表者名: Falcone FH, Alcocer MJC, Okamoto-Uchida Y, Nakamura R
  • 雑誌名: Curr Allergy Asthma Rep. 巻: 15 号: 11 ページ: 67-67
  • DOI: 10.1007/s11882-015-0568-3
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Drugs causing severe ocular surface involvements in Japanese patients with StevenseJohnson syndrome/toxic epidermal necrolysis (2015)
  • 著者名/発表者名: Kaniwa N, Ueta M, Nakamura R, Okamoto-Uchida Y, Sugiyama E, Maekawa K, Takahashi Y, Furuya H, Yagami A, Matsukura S, Ikezawa Z, Matsunaga K, Sotozono C, Aihara M, Kinoshita S, Saito Y.
  • 雑誌名: Allergology International 巻: 64 号: 4 ページ: 379-381
  • DOI: 10.1016/j.alit.2015.05.002
  • NAID: 130005290406
  • ISSN: 1323-8930, 1440-1592
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] IKZF1, a new susceptibility gene for cold medicine-related Stevens-Johnson syndrome/toxic epidermal necrolysis with severe mucosal involvements. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ueta M, Sawai H, Sotozono C, Hitomi Y, Kaniwa N, Kim MK, Seo KY, Yoon KC, Joo CK, Kannabiran C, Wakamatsu TH, Sangwan V, Rathi V, Basu S, Ozeki T, Mushiroda T, Sugiyama E, Maekawa K, Nakamura R, Aihara M, Matsunaga K, Sekine A, Gomes JÁP, Hamuro J, Saito Y, Kubo M, Kinoshita S, Tokunaga K.
  • 雑誌名: J. Allergy Clin. Immunol. 巻: 未定 号: 6 ページ: 03744-0
  • DOI: 10.1016/j.jaci.2014.12.1916
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Genetic variants associated with phenytoin-related severe cutaneous adverse reactions (2014)
  • 著者名/発表者名: Chung WH, Chang WC, Lee YS, Wu YY, Yang CH, Ho HC, Chen MJ, Lin JY, Hui RC, Ho JC, Wu WM, Chen TJ, Wu T, Wu YR, Hsih MS, Tu PH, Chang CN, Hsu CN, Wu TL, Choon SE, Hsu CK, Chen DY, Liu CS, Lin CY, Kaniwa N, Saito Y, Takahashi Y, Nakamura R, et al.
  • 雑誌名: JAMA 巻: 312 号: 5 ページ: 525-534
  • DOI: 10.1001/jama.2014.7859
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Independent strong association of HLA-A*02:06 and HLA-B*44:03 with cold medicine-related Stevens-Johnson syndrome with severe mucosal involvement. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ueta M, Kaniwa N, Sotozono C, Tokunaga K, Saito Y, Sawai H, Miyadera H, Sugiyama E, Maekawa K, Nakamura R, Nagato M, Aihara M, Matsunaga K, Takahashi Y, Furuya H, Muramatsu M, Ikezawa Z, Kinoshita S.
  • 雑誌名: Sci Rep. 巻: 4 号: 1 ページ: 4862-4862
  • DOI: 10.1038/srep04862
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Anaphylactic transfusion reaction in homozygous haptoglobin deficiency detected by CD203c expression on basophils. (2014)
  • 著者名/発表者名: Iwamoto S, Yonekawa T, Azuma E, Fujisawa T, Nagao M, Shimada E, Nakamura R, Teshima R, Ohishi K, Toyoda H, Komada Y.
  • 雑誌名: Pediatr Blood Cancer 巻: 61 号: 7 ページ: 1160-1161
  • DOI: 10.1002/pbc.24965
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Use of Humanised Rat Basophilic Leukaemia Cell Line RS-ATL8 for the Assessment of Allergenicity of Schistosoma mansoni Proteins (2014)
  • 著者名/発表者名: Wan D, Ludolf F, Alanine DG, Stretton O, Ali Ali E, Al-Barwary N, Wang X, Doenhoff MJ, Mari A, Fitzsimmons CM, Dunne DW, Nakamura R, Oliveira GC, Alcocer MJ, Falcone FH
  • 雑誌名: PLoS Negl Trop Dis 巻: 8 号: 9 ページ: e3124-e3124
  • DOI: 10.1371/journal.pntd.0003124
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Low-affinity allergen-specific IgE in cord blood and affinity maturation after birth (2014)
  • 著者名/発表者名: Kamemura N., Kawamoto N., Nakamura R., Teshima R., Fukao T., Kido H
  • 雑誌名: J. Allergy Clin. Immunol 巻: 133(3) 号: 3 ページ: 904-905
  • DOI: 10.1016/j.jaci.2013.09.034
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of CD203c on basophils as a marker of immunoglobulin E-mediated l-asparaginase allergy (2014)
  • 著者名/発表者名: Hino M, Shimojo N, Ochiai H, Inoue Y, Ando K, Chikaraishi K, Ota S, Okimoto Y, Sunami S, Nakamura R, Teshima R, Sato Y, Kohno Y
  • 雑誌名: Leuk Lymphoma 巻: 55 号: 1 ページ: 92-96
  • DOI: 10.3109/10428194.2013.794944
  • 査読あり
• [雑誌論文] Tissue transglutaminase generates deamidated epitopes on gluten, increasing reactivity with hydrolyzed wheat protein-sensitized IgE. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakamura R, Nakamura R, Sakai S, Adachi R, Hachisuka A, Urisu A, Fukutomi Y, Teshima R.
  • 雑誌名: J. Allergy Clin. Immunol. 巻: 132 号: 6 ページ: 1436-1438
  • DOI: 10.1016/j.jaci.2013.07.017
  • 査読あり
• [学会発表] セルベーストアッセイによる牛肉アレルギー患者血清中IgEの糖鎖抗原への反応性の解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: 岡本(内田)好海, 中村亮介, 千貫祐子, 若林翼, 打田光宏, 土屋敏行, 斎藤嘉朗, 森田栄伸
  • 学会等名: 日本薬学会第136年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2016-03-27
• [学会発表] Drugs and HLA types associated with Stevens-Johnson syndrome/toxic epidermal necrolysis with severe ocular surface involvements in Japanese patients (2016)
  • 著者名/発表者名: Nakamura R, Kaniwa N, Ueta M, Okamoto-Uchida Y, Sugiyama E, Maekawa K, Takahashi Y, Furuya H, Yagami A, Matsukura S, Ikezawa Z, Matsunaga K, Tokunaga K, Sotozono C, Aihara M, Kinoshita S, Saito Y.
  • 学会等名: 1st International Stevens- Johnson Syndrome Symposium
  • 発表場所: ウェスティン都ホテル京都
  • 年月日: 2016-01-24
  • 国際学会
• [学会発表] EXiLE法を用いたモデル抗原のIgEエピトープ解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介, 岡本(内田)好海, 松澤由美子, 石井明子, 斎藤嘉朗
  • 学会等名: 第22回日本免疫毒性学会学術年会
  • 発表場所: 京都大学百周年時計台記念館国際交流ホール
  • 年月日: 2015-09-10
• [学会発表] 重篤副作用発症における感染症併発の影響 ― 横紋筋融解症及び重症薬疹の事例 ― (2015)
  • 著者名/発表者名: 佐井君江, 中村亮介, 今任拓也, 岡本好海, 梶波康二, 松永佳世子, 相原道子, 斎藤嘉朗
  • 学会等名: 第42回日本毒性学会学術年会
  • 発表場所: 金沢市アートホール
  • 年月日: 2015-06-29
• [学会発表] 国内の動向：臨床試料を用いた安全性バイオマーカー探索と検証―セーフティートランスレーションにおける課題― (2015)
  • 著者名/発表者名: 斎藤嘉朗, 前川京子, 齊藤公亮, 中村亮介, 熊谷雄治
  • 学会等名: 第42回日本毒性学会学術年会
  • 発表場所: 金沢市アートホール
  • 年月日: 2015-06-29
• [学会発表] EXiLE法を用いた経口免疫療法実施時における減感作状態の評価法の検討 (2015)
  • 著者名/発表者名: 秋山晴代, 政岡智佳, 中村亮介, 小野佳代, 田中裕, 甲斐茂美, 栗原和幸, 宮澤眞紀
  • 学会等名: 第64回日本アレルギー学会学術大会
  • 発表場所: グランドプリンスホテル新高輪
  • 年月日: 2015-05-26
• [学会発表] 重症眼粘膜障害を伴うSJS/TENの発症と関連する被疑薬およびHLA型について (2015)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介, 鹿庭なほ子,上田真由美, 岡本(内田)好海, 杉山永見子, 高橋幸利, 古谷博和, 矢上晶子, 松倉節子, 池澤善郎, 松永佳世子, 徳永勝士, 外園千恵, 相原道子, 木下茂, 斎藤嘉朗
  • 学会等名: 第64回日本アレルギー学会学術大会
  • 発表場所: グランドプリンスホテル新高輪
  • 年月日: 2015-05-26
• [学会発表] 架橋誘導活性の異なるモノクローナルIgEの抗原認識様式の違いについて (2015)
  • 著者名/発表者名: 岡本(内田)好海, 中村亮介, 相馬愛実, 石井明子, 最上知子, 川崎ナナ, 川上 浩, 手島玲子, 斎藤嘉朗
  • 学会等名: 日本薬学会第135年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-03-26 – 2015-03-28
• [学会発表] 口腔アレルギー症候群における新たなin vitro試験法の検討 (2015)
  • 著者名/発表者名: 秋山晴代, 河又小夏, 政岡智佳, 中村亮介, 福冨友馬, 甲斐茂美, 松藤 寛, 宮澤眞紀
  • 学会等名: 日本薬学会第135年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-03-26 – 2015-03-28
• [学会発表] 新規培養細胞株を用いたインフュージョン反応惹起性の評価法開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介
  • 学会等名: 平成26年度創薬基盤推進研究事業成果発表会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-02-26
  • 招待講演
• [学会発表] EXiLE法を用いた口腔アレルギー症候群の新たなin vitro検査法の検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 秋山晴代, 河又小夏, 中村亮介, 福冨友馬, 甲斐茂美, 松藤 寛, 宮澤眞紀
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
• [学会発表] 新規蛋白チップによる臍帯血特異的IgEの検出と、離乳完了期までに見られるIgE抗体の低親和性から高親和性への変化 (2014)
  • 著者名/発表者名: 亀村典生, 川本典生, 中村亮介, 手島玲子, 下条直樹, 深尾敏幸, 木戸 博
  • 学会等名: 第51回日本小児アレルギー学会
  • 発表場所: 四日市
  • 年月日: 2014-11-08 – 2014-11-09
• [学会発表] 「風邪薬」による重症眼粘膜障害を伴うスティーブンス・ジョンソン症候群及び中毒性表皮壊死症発症に関連するHLAについて (2014)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介, 鹿庭なほ子, 上田真由美, 外園千恵, 杉山永見子, 前川京子, 内田好海, 矢上晶子, 松倉節子, 池澤善郎, 松永佳世子, 徳永勝士, 相原道子, 木下 茂, 斎藤嘉朗
  • 学会等名: 第21回日本免疫毒性学会学術年会
  • 発表場所: 徳島
  • 年月日: 2014-09-11 – 2014-09-12
• [学会発表] 日本人のスティーブンス・ジョンソン症候群及び中毒性表皮壊死症患者における重症眼粘膜障害発症に関連する医薬品の傾向 (2014)
  • 著者名/発表者名: 内田好海, 鹿庭なほ子, 上田真由美, 中村亮介, 杉山永見子, 高橋幸利, 古谷博和, 矢上晶子, 松倉節子, 池澤善郎, 松永佳世子, 外園千恵, 相原道子, 木下 茂, 斎藤嘉朗
  • 学会等名: 第21回日本免疫毒性学会学術年会
  • 発表場所: 徳島
  • 年月日: 2014-09-11 – 2014-09-12
• [学会発表] 培養細胞を用いるアレルギー試験「EXiLE法」の開発と応用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介
  • 学会等名: 第41回日本毒性学会学術年会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-07-02 – 2014-07-04
  • 招待講演
• [学会発表] 臍帯血の抗原特異的低親和性IgE検出と，生後6，14ヶ月の高親和性IgEへの変化 (2014)
  • 著者名/発表者名: 木戸 博，亀村典生，中村亮介, 手島玲子，深尾敏幸
  • 学会等名: 第26回日本アレルギー学会春季臨床大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2014-05-09 – 2014-05-11
• [学会発表] Biomarkers for risk of SJS/TEN in Japanese compared to other populations (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakamura R
  • 学会等名: Drug Information Association
  • 発表場所: メリーランド（米国）
  • 年月日: 2014-05-07 – 2014-05-09
  • 招待講演
• [学会発表] HLA association with antipyretic analgesics-induced Stevens-Johnson syndrome / toxic epidermal necrolysis with severe ocular surface complications in Japanese patients (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakamura R, Kaniwa N, Ueta M, Sotozono C, Sugiyama E, Maekawa K, Yagami A, Matsukura S, Ikezawa Z, Matsunaga K, Tokunaga K, Aihara M, Kinoshita S Saito Y
  • 学会等名: Drug Hypersensitivity Meeting 2014
  • 発表場所: ベルン（スイス）
  • 年月日: 2014-04-09 – 2014-04-12
• [学会発表] Medication tendencies for inducing severe ocular surface symptoms in Japanese Stevens-Johnson syndrome / toxic epidermal necrolysis patients (2014)
  • 著者名/発表者名: Kaniwa N, Ueta M, Nakamura R, Sugiyama E, Maekawa K, Takahashi Y, Furuya H, Yagami A, Matsukura S, Ikezawa Z, Matsunaga K, Sotozono C, Aihara M, Kinoshita S, Yoshiro S
  • 学会等名: Drug Hypersensitivity Meeting 2014
  • 発表場所: ベルン（スイス）
  • 年月日: 2014-04-09 – 2014-04-12
• [学会発表] 抗原の加熱･消化･固相化がIgE架橋活性に及ぼす影響について (2014)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介，相馬愛実，中村里香，斎藤嘉朗，最上知子，川上 浩，手島玲子
  • 学会等名: 日本薬学会第134年会
  • 発表場所: 熊本
• [学会発表] 小麦グルテンはトランスグルタミナーゼ処理により酸加水分解小麦と同様のIgE反応性を獲得する (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介，中村里香，酒井信夫，安達玲子，宇理須厚雄，福冨友馬，手島玲子
  • 学会等名: 第25回アレルギー学会春季臨床大会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] EXiLE法を用いた卵白アルブミンのIgE架橋活性への加熱および固相化の影響の解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 相馬愛実，中村亮介，中村里香，斎藤嘉朗，川上 浩，手島玲子
  • 学会等名: 第19回日本食品化学学会
  • 発表場所: 名古屋
• [学会発表] 酸加水分解コムギ特異的患者血清IgEはトランスグルタミナーゼ処理コムギグルテンと交差反応する (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介，中村里香，酒井信夫，安達玲子，斎藤嘉朗，宇理須厚雄，福冨友馬，手島玲子
  • 学会等名: 第20回日本免疫毒性学会学術大会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] Human Cell Line Activation Test（h-CLAT）の医薬品のアレルゲン性評価試験法としての応用 (2013)
  • 著者名/発表者名: 宇梶真帆，杉山永見子，中村亮介，斎藤嘉朗，打田光宏，土屋敏行，黒瀬光一
  • 学会等名: 第20回日本免疫毒性学会学術大会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] EXiLE法を用いた牛乳アレルギー患者IgEに応答する 乳糖中に含まれるアレルゲンの解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 唐澤未来，中村亮介，酒井信夫，安達玲子，斎藤嘉朗， 最上知子，山崎 壮，手島玲子
  • 学会等名: 第106 回日本食品衛生学会学術講演会
  • 発表場所: 沖縄
• [学会発表] 加水分解コムギ感作血清中IgEのEXiLE法による検出とその有用性評価 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介，中村政志，矢上晶子，酒井信夫，中村里香，安達玲子，斎藤嘉朗，相原道子，秀 道広，千貫祐子，森田栄伸，松永佳世子，手島玲子
  • 学会等名: 第63回アレルギー学会秋季学術大会
  • 発表場所: 東京
• [図書] 食物アレルギーの現状とリスク低減化食品素材の開発 (EXiLE法) (2015)
  • 著者名/発表者名: 中村亮介
  • 総ページ数: 299
  • 出版者: シーエムシー出版
• [図書] 食物アレルギーの現状とリスク低減化食品素材の開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 監修：森山達哉, 穐山 浩
  • 総ページ数: 299
  • 出版者: シーエムシー出版
• [図書] Basophils and Mast Cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Edited by Gibbs BF and Falcone FH
  • 総ページ数: 251
  • 出版者: Humana Press