肝細胞特異的機能発現機構の統合的理解と高度機能維持肝細胞/培養系の構築

• 研究課題/領域番号: 25460088
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物系薬学
• 研究機関: 国立研究開発法人国立成育医療研究センター
• 研究代表者: 中村 和昭 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 薬剤治療研究部, 室長 (80392356)
• 研究協力者: Kyaw Htet Aung ; 相澤 和子
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円); 2015年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円); 2014年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円); 2013年度: 3,510千円 (直接経費: 2,700千円、間接経費: 810千円)
• キーワード: 肝細胞培養系 / DNAメチル化 / 高機能培養肝細胞 / PKR / 転写因子

研究成果の概要

本研究では、培養肝細胞の高機能化を目指し、肝機能特異的機能発現機構の解明と高機能肝細胞培養系の検討を行った。ヒト肝癌由来細胞株であるHepG2細胞を用いて、DMAメチル化阻害剤であるゼブラリンによる肝機能亢進とその作用機序を検討した。ゼブラリンはHepG2細胞のシトクロムP450（CYP）遺伝子発現を亢進させた。その作用機序を検討した結果、ゼブラリンはDNMT阻害とともに二重鎖RNA依存性プロテインキナーゼ（PKR）発現抑制を介してCYP発現を亢進することを明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] DNA methyltransferase inhibitor zebularine induces human cholangiocarcinoma cell death through alteration of DNA methylation status. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakamura K, Nakabayashi K, Kyaw Htet Aung, Aizawa K, Hori N, Yamauchi J, Hata K, Tanoue A.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 10 号: 3 ページ: e0120545-e0120545
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0120545
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] contributed equally to this work. Hepatocytes buried in the cirrhotic livers of biliary atresia patients proliferate and function in the liver of uPA-NOG mice (2014)
  • 著者名/発表者名: Suemizu H, Nakamura K, Kawai K, Higuchi Y, Kasahara M, Fujimoto J, Tanoue A, Nakamura M
  • 雑誌名: Liver Transplantation 巻: (In press) 号: 9 ページ: 1127-1137
  • DOI: 10.1002/lt.23916
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Hepatocyte transplantation using the living donor reduced-graft in a baby with ornithine transcarbamylase deficiency : a novel source for hepatocytes (2014)
  • 著者名/発表者名: Enosawa S, Horikawa R, Yamamoto A, Sakamoto S, Shigeta T, Nosaka S, Fujimoto J, Tanoue A, Nakamura K, Umezawa A, Matsubara Y, Matsui A, Kasahara M
  • 雑誌名: Liver Transplantation 巻: 20 号: 3 ページ: 391-393
  • DOI: 10.1002/lt.23800
  • 査読あり
• [学会発表] Regulation of Cell Death and Cell Specific Functions by Inhibition of DNA Methylation (2016)
  • 著者名/発表者名: Kazuaki Nakamura
  • 学会等名: The 2016 World Congress on In Vitro Biology
  • 発表場所: Ｔhe Sheraton San Diego Hotel & Marina
  • 年月日: 2016-06-11
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] 高機能肝細胞培養系の検討と毒性評価系開発の試み (2016)
  • 著者名/発表者名: 中村和昭
  • 学会等名: 日本組織培養学会第89回大会
  • 発表場所: 千里ライフサイエンスセンター
  • 年月日: 2016-05-25
  • 招待講演
• [学会発表] DNAメチル化阻害剤ゼブラリンによるHepG2細胞のシトクロムP450遺伝子発現亢進 (2015)
  • 著者名/発表者名: 中村和昭、相澤和子、Kyaw Htet Aung, 田上昭人
  • 学会等名: 第42回日本毒性学会学術年会
  • 発表場所: 石川県立音楽堂
  • 年月日: 2015-06-29
• [学会発表] DNAメチル化阻害剤ゼブラリンの抗胆管癌作用の検討 (2015)
  • 著者名/発表者名: 中村和昭、中林一彦、相澤和子、Kyaw Htet Aung、秦健一郎、田上昭人
  • 学会等名: 日本組織培養学会第88回大会
  • 発表場所: 広島大学歯学部
  • 年月日: 2015-05-26
• [学会発表] DNAメチル化阻害剤ゼブラリンのヒト胆管癌細胞に対する抗腫瘍活性 (2014)
  • 著者名/発表者名: 中村和昭、中林一彦、Kyaw Htet Aung、秦健一郎、田上昭人
  • 学会等名: 日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
• [学会発表] Zebularine enhances expression of cytochrome P450 genes and induces cell death in HepG2 cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakamura K, Aizawa K, Nakabayashi K, Hori N, Kyaw Htet Anung, Hata K, Tanoue A
  • 学会等名: Japanese Tissue Culture Association
  • 発表場所: 星陵会館
  • 年月日: 2014-05-29 – 2014-05-30
• [学会発表] DNAメチル化阻害剤ゼブラリンによるHepG2細胞の肝機能亢進と細胞死誘導 (2014)
  • 著者名/発表者名: 中村和昭, 相澤和子, 中林一彦, 堀尚子, Kyaw Htet Anung, 秦健一郎, 田上昭人
  • 学会等名: 日本組織培養学会
  • 発表場所: 星陵会館
• [学会発表] DNAメチル化阻害剤ゼブラリンのヒト肝細胞癌に対する抗腫瘍活性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村和昭、中林一彦、秦健一郎、田上昭人
  • 学会等名: 日本分子生物学会
  • 発表場所: 神戸国際展示場
• [学会発表] DNAメチル化阻害剤ゼブラリンによるヒト肝細胞癌に対する細胞毒性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村和昭、中林一彦、秦健一郎、田上昭人
  • 学会等名: 日本毒性学会
  • 発表場所: 幕張メッセ
• [備考] 国立成育医療研究センター研究所薬剤治療研究部ホームページ
  • URL: http://www.ncchd.go.jp/scholar/research/section/pharmac/index.html
• [備考] 国立成育医療研究センター研究所薬剤治療研究部ホームページ
  • URL: http://nrichd.ncchd.go.jp/pharmac/index.html