人工ヌクレアーゼによる遺伝子改変システムを利用した新たなHCV研究系の確立

• 研究課題/領域番号: 25460566
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 福原 崇介 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (70598739)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円); 2015年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2014年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2013年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
• キーワード: C型肝炎ウイルス / 遺伝子改変技術 / アポリポ蛋白質 / オートファジー / マイクロRNA / 遺伝子改変 / アポリポ蛋白 / miR-122 / ノックアウト

研究成果の概要

HCVのIn vitroの感染系が特定の癌細胞株や初代肝細胞に限られており、有用なin vivoモデルの確立も不十分である。そこで本研究では、人工ヌクレアーゼやCRISPR/Cas9系を用いたノックアウト細胞株を作製することにより、ウイルスの感染環や病原性に関する再現性の高い検討を行い、新たな知見を明らかにすることを目的とした。
これらの細胞を用いて、HCVの感染におけるアポリポ蛋白質、miR-122やオートファジーの意義が明らかになった。肝炎ウイルスは狭い感染指向性により、これまで再現性の高い研究を行うことが困難であったが、遺伝子改変技術の革新により、詳細な研究が可能になってきた。

研究成果

• [雑誌論文] Lipoprotein receptors redundantly participate in entry of hepatitis C virus (2016)
  • 著者名/発表者名: 山本聡美、福原崇介、小野慎子、上村健太郎、河内悠華子、塩川舞、森寛行、和田真実、嶋亮一、岡本徹、平賀伸彦、鈴木亮介、茶山一彰、脇田隆字、松浦善治
  • 雑誌名: PLoS Pathogens 巻: 未定
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Roles of Lipoproteins and Apolipoproteins in Particle Formation of Hepatitis C Virus (2015)
  • 著者名/発表者名: Fukuhara T, Ono C, Puig-Basagoiti F, Matsuura Y
  • 雑誌名: Trends in Microbiology 巻: 23 号: 10 ページ: 618-629
  • DOI: 10.1016/j.tim.2015.07.007
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Amphipathic α-Helices in Apolipoproteins Are Crucial to the Formation of Infectious Hepatitis C Virus Particles (2014)
  • 著者名/発表者名: Fukuhara T, Wada M, Nakamura S, Ono C, Shiokawa M, Yamamoto S, Motomura T, Okamoto T, Okuzaki D, Yamamoto M, Saito I, Wakita T, Koike K, Matsuura Y
  • 雑誌名: PLoS Pathog 巻: 10(12) 号: 12 ページ: e1004534-e1004534
  • DOI: 10.1371/journal.ppat.1004534
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] Roles of lipoprotein receptors in the entry of hepatitis C virus (2015)
  • 著者名/発表者名: 福原崇介、山本聡美、小野慎子、森寛行、Puig-Basagoiti Francesc、岡本徹、松浦善治
  • 学会等名: The 22nd International Meeting on HCV and Related Viruses
  • 発表場所: ストラスブルグ、フランス
  • 年月日: 2015-10-09
  • 国際学会
• [学会発表] Characterization of miR-122-independent propagation of HCV (2015)
  • 著者名/発表者名: 小野慎子、福原崇介、山本聡美、森寛行、岡本徹、Su Su Hmwe、脇田隆字、小池和彦、松浦善治
  • 学会等名: The 22nd International Meeting on HCV and Related Viruses
  • 発表場所: ストラスブルグ、フランス
  • 年月日: 2015-10-09
  • 国際学会
• [学会発表] Exchageable apolipoproteins participate in the particle formation of hepatitis C virus. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takasuke Fukuhara, Masami Wada, Shota Nakamura, Chikako Ono, Satomi Yamamoto, Mai Shiokawa, Toru Okamoto, Yoshiharu Matsuura
  • 学会等名: 33rd American Society for Virology, Annual Meeting
  • 発表場所: Colorado（U.S.A.）
  • 年月日: 2014-06-20 – 2014-06-25
• [学会発表] Characterization of HCV Propagation in miR-122 Knockout Cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Chikako Ono, Takasuke Fukuhara, Mai Shiokawa, Satomi Yamamoto, Masami Wada, Toru Okamoto, Daisuke Okuzaki, Yoshiharu Matsuura
  • 学会等名: 33rd American Society for Virology, Annual Meeting
  • 発表場所: Colorado（U.S.A.）
  • 年月日: 2014-06-20 – 2014-06-25
• [学会発表] C型肝炎ウイルスの感染によって誘導されるオートファジーの性状 (2013)
  • 著者名/発表者名: 福原崇介
  • 学会等名: 第61回日本ウイルス学会
  • 発表場所: 神戸国際会議場