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独自の視点からのヒト歯髄幹細胞の同定、選択的濃縮および特性解析

研究課題

研究課題/領域番号 25463192
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
研究分野 矯正・小児系歯学
研究機関鹿児島大学

研究代表者

稲田 絵美  鹿児島大学, 医歯学域附属病院, 助教 (30448568)

研究分担者 佐藤 正宏  鹿児島大学, 医用ミニブタ・先端医療開発研究センター, 教授 (30287099)
齊藤 一誠  新潟大学, 医歯学系, 准教授 (90404540)
野口 洋文  琉球大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (50378733)
研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2017-03-31
研究課題ステータス 完了 (2016年度)
配分額 *注記
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2016年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円)
2015年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2014年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2013年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
キーワード歯髄幹細胞 / PiggyBacシステム / 選択的濃縮 / アルカリフォスファターゼ / アルカリ性フォスファターゼ
研究成果の概要

アルカリ性フォスファターゼ(ALP)を発現するものが真の歯髄幹細胞と考え、ALP陽性細胞を初代培養歯髄細胞から遺伝子工学的に濃縮し、その特性を解析することを目的とした。
遺伝子導入効率が高いとされるpiggyBacトランスポゾンを用いて蛍光遺伝子を歯髄細胞に遺伝子導入した結果、効率的に遺伝子導入安定株を取得できた。そこで、ALP promoterの制御下、EGFPとpuromycin耐性遺伝子を同時発現するトランスポゾン型プラスミドを導入し、薬剤選別を行なった。残念ながら、その過程で細胞が劣化し、増殖を止めた。目下、親株の特性を保持したまま不死化が可能な細胞株を樹立し、再実験を行っている。

報告書

(5件)
  • 2016 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2015 実施状況報告書
  • 2014 実施状況報告書
  • 2013 実施状況報告書
  • 研究成果

    (22件)

すべて 2016 2015 2014 2013

すべて 雑誌論文 (16件) (うち査読あり 16件、 オープンアクセス 10件、 謝辞記載あり 4件) 学会発表 (6件)

  • [雑誌論文] Alkaline phosphatase and OCT-3/4 as useful markers for predicting susceptibility of human deciduous teeth-derived dental pulp cells to reprogramming factor-induced iPS cells2016

    • 著者名/発表者名
      Inada E, Saitoh I, Miura H, Ohtsuka M, Murakami T, Sawami T, Yamasaki Y, Watanabe S, Aoki R, Sato M
    • 雑誌名

      Journal of Investigative and Clinical Dentistry

      巻: - 号: 4 ページ: 1-11

    • DOI

      10.1111/jicd.12236

    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] The piggyBac-Based Gene Delivery System Can Confer Successful Production of Cloned Porcine Blastocysts with Multigene Constructs.2016

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Maeda K, Koriyama M, Inada E, Saitoh I, Miura H, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S, Miyoshi K.
    • 雑誌名

      Int J Mol Sci.

      巻: 17 号: 9 ページ: 1424-1424

    • DOI

      10.3390/ijms17091424

    • NAID

      130007023583

    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Tissue-Specific Stem Cells Obtained by Reprogramming of Non-Obese Diabetic (NOD) Mouse-Derived Pancreatic Cells Confer Insulin Production in Response to Glucose.2016

    • 著者名/発表者名
      Saitoh I, Sato M, Soda M, Inada E, Iwase Y, Murakami T, Ohshima H, Hayasaki H, Noguchi H.
    • 雑誌名

      PLoS One.

      巻: 11 号: 9 ページ: e0163580-e0163580

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0163580

    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Generation of α-1,3-galactosyltransferase-deficient porcine embryonic fibroblasts by CRISPR/Cas9-mediated knock-in of a small mutated sequence and a targeted toxin-based selection system.2015

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Kagoshima A, Saitoh I, Inada E, Miyoshi K, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
    • 雑誌名

      Domestic Animal Reproduction

      巻: 50 号: 5 ページ: 872-880

    • DOI

      10.1111/rda.12565

    • 関連する報告書
      2015 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] PiggyBac transposon-mediated gene delivery efficiently generates stable transfectants derived from cultured primary human deciduous tooth dental pulp cells (HDDPCs) and HDDPC-derived iPS cells.2015

    • 著者名/発表者名
      Inada E, Saito I, Watanabe S, Aoki R, Miura H, Ohtsuka M, Murakami T, Sawami T, Yamasaki Y, Sato M
    • 雑誌名

      International Journal of Oral Science

      巻: 7 号: 3 ページ: 144-145

    • DOI

      10.1038/ijos.2015.18

    • 関連する報告書
      2015 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Direct injection of CRISPR/Cas9-related mRNA into cytoplasm of parthenogenetically activated porcine oocytes causes frequent mosaicism for indel mutations.2015

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Koriyama M, Watanabe S, Ohtsuka M, Sakurai T, Inada E, Saitoh I, Nakamura S, Miyoshi K
    • 雑誌名

      International Journal of Molecular Sciences,

      巻: 16 号: 8 ページ: 17838-17856

    • DOI

      10.3390/ijms160817838

    • 関連する報告書
      2015 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Choice of feeders is important when first establishing iPSCs derived from primarily cultured human deciduous tooth dental pulp cells.2015

    • 著者名/発表者名
      Saitoh I, Inada E, Iwase Y, Noguchi H, Murakami T, Soda M, Kubota N, Hasegawa H, Akasaka E, Matsumoto Y, Oka K, Yamasaki Y, Hayasaki H, Sato M
    • 雑誌名

      Cell Medicine

      巻: 8 号: 1-2 ページ: 9-23

    • DOI

      10.3727/215517915x689038

    • 関連する報告書
      2015 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] A combination of targeted toxin technology and the piggyBac-mediated gene transfer system enables efficient isolation of stable transfectants in nonhuman mammalian cells2015

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Inada E, Saitoh I, Matsumoto Y, Ohtsuka M, Miura H, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
    • 雑誌名

      Biotechnolgy Journal

      巻: 10 号: 1 ページ: 143-153

    • DOI

      10.1002/biot.201400283

    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Morphological differences of facial soft tissue contours from child to adult of Japanese males: A three-dimensional cross-sectional study.2014

    • 著者名/発表者名
      Murakami D, Inada E, Saitoh I, Takemoto Y, Morizono K, Kubota N, Iwasaki T, Oku T, Yamasaki Y
    • 雑誌名

      Archives of Oral Biology

      巻: 59 号: 12 ページ: 1391-1399

    • DOI

      10.1016/j.archoralbio.2014.08.004

    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Quantitative evaluation of toothbrush and arm-joint motion during tooth brushing.2014

    • 著者名/発表者名
      Inada E, Saitoh I, Yu Y, Tomiyama D, Murakami D, Takemoto Y, Morizono K, Iwasaki T, Iwase Y, Yamasaki Y
    • 雑誌名

      Clinical Oral Investigation

      巻: Dec 4

    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Mosaic Expression of Pluripotency-Related Proteins Oct-3/4 and Alkaline Phosphatase in Human Pancreatic Carcinoma Cell PANC-12013

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Maeda S, Inada E, Saitoh I, Kubota N
    • 雑誌名

      Advanced Studies in Biology

      巻: 5 ページ: 157-172

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Hela cells consist of two cell types, as evidenced by cytochemical staining for alkaline phosphatase activity: A possible model for cancer stem cell study.2013

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Kubota N, Inada E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
    • 雑誌名

      Advances in Stem Cells

      巻: 2013 ページ: 15-15

    • DOI

      10.5171/2013.208514

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Site-targeted non-viral gene delivery by direct DNA injection into the pancreatic parenchyma and subsequent in vivo electroporation in mice.2013

    • 著者名/発表者名
      Sato M, Inada E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T and Watanabe S
    • 雑誌名

      Biotechnology Journal

      巻: 8 号: 11 ページ: 1355-1361

    • DOI

      10.1002/biot.201300169

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] STO feeder cells are useful for propagation of primarily cultured human deciduous dental pulp cells in view of elimination of contaminated bacteria and promotion of cellular outgrowth.2013

    • 著者名/発表者名
      Murakami T, Saitoh I, Inada E, Kurosawa M, Iwase Y, Noguchi H, Terao Y, Yamasaki Y, Hayasaki H, Sato M
    • 雑誌名

      Cell Medicine

      巻: 7 号: 1-2 ページ: 75-81

    • DOI

      10.3727/215517913x674234

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Smoothness of Jaw Movement during Gum Chewing in Children with Primary Dentition.2013

    • 著者名/発表者名
      Yamada-Ito C, Saitoh I, Yashiro K, Inada E, Maruyama T, Takada K, Hayasaki H, Yamasaki Y
    • 雑誌名

      Journal of Craniomandibular Practice

      巻: 31 ページ: 235-245

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Tongue posture improvement and pharyngeal airway enlargement as secondary effects of rapid maxillary expansion: A cone-beam computed tomography study2013

    • 著者名/発表者名
      Iwasaki T, Saitoh I, Takemoto Y, Inada E, Kakuno E, Kanomi R, Hayasaki H, Yamasaki Y
    • 雑誌名

      American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics

      巻: Vol.143 号: 2 ページ: 235-245

    • DOI

      10.1016/j.ajodo.2012.09.014

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] ヒト乳歯歯髄細胞のアルカリホスファターゼ活性とOCT3/4発現はiPS細胞樹立の可否を予測する有効なマーカーである2015

    • 著者名/発表者名
      稲田 絵美, 佐藤 正宏, 齊藤 一誠, 窪田 直子, 澤味 規, 村上 智哉, 左右田 美樹, 早崎 治明, 山崎 要一
    • 学会等名
      第53回日本小児歯科学会大会
    • 発表場所
      広島国際会議場(広島県広島市)
    • 年月日
      2015-05-21
    • 関連する報告書
      2015 実施状況報告書
  • [学会発表] piggyBac-transposon-mediated gene-delivery efficiently generates stable transfectants from HDDPCs and HDDPC-derived-iPSCs2015

    • 著者名/発表者名
      Soda M, Saitoh I, Inada E, Murakami T, Iwase Y, Kubota N, Sawami T, Matsumoto Y, Yamasaki Y, Hayasaki H, Ohshima H, Sato M
    • 学会等名
      IADR
    • 発表場所
      Boston (America)
    • 年月日
      2015-03-11 – 2015-03-14
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] PiggyBacトランスポゾンによるヒト乳歯髄細胞からの遺伝子導入安定株の効率的取得2014

    • 著者名/発表者名
      稲田絵美,齊藤一誠,窪田直子,松本祐子,村上智哉,澤味 規,山﨑要一
    • 学会等名
      第52回日本小児歯科学会
    • 発表場所
      東京都(品川区立総合区民会館)
    • 年月日
      2014-05-16 – 2014-05-17
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] Multipotency of juvenile human buccal epithelial cells.2014

    • 著者名/発表者名
      T Murakami, I Saitoh, Y Iwase, E Inada, J Mastuyama, H Ohshima, H Hayasaki M Sato
    • 学会等名
      AADR
    • 発表場所
      North Carolina, America
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] ヒト乳歯歯髄由来iPS細胞樹立におけるフィーダー細胞選択の重要性2013

    • 著者名/発表者名
      村上智哉, 齊藤一誠, 稲田絵美, 岩瀬陽子, 長谷川大子, 窪田直子, 松本祐子, 大島邦子, 岡 暁子, 山崎要一, 早崎治明
    • 学会等名
      第51回日本小児歯科学会
    • 発表場所
      岐阜県
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] トランスポゾンPiggyBacシステムによる複数遺伝子のブタ細胞への同時導入2013

    • 著者名/発表者名
      郡山美優,稲田絵美,齋藤一誠,三浦浩美,大塚正人,中村伸吾,桜井敬之,渡部聡,三好和睦,佐藤正宏
    • 学会等名
      第106回日本繁殖生物学会
    • 発表場所
      東京都
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書

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公開日: 2014-07-25   更新日: 2019-07-29  

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