TALENを用いたショウジョウバエにおける遺伝子ノックイン手法の開発

• 研究課題/領域番号: 25650088
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 発生生物学
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 中村 輝 熊本大学, 発生医学研究所, 教授 (90323245)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円); 2014年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2013年度: 2,470千円 (直接経費: 1,900千円、間接経費: 570千円)
• キーワード: ショウジョウバエ / TALEN / CRISPR/Cas9 / 遺伝子ノックアウト / ゲノム編集 / 相同組み換え / CRISPR/Cas / 相同組換え

研究成果の概要

ポストゲノムプロジェクト時代におけるショウジョウバエ遺伝学を飛躍的に加速させる目的で、TALENならびにCRISPR/Cas9を利用したゲノム編集の手法開発を行った。その結果、標的遺伝子のノックアウトとともに、相同組み換えを利用した遺伝子ノックインも可能となった。ノックインの効率は数％から90%程度と標的部位により異なるが、既に7遺伝子座についてGFP遺伝子のノックインに成功しており、実用的な効率として遺伝子ノックインの手法が確立されたと考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] Region-specific activation of oskar mRNA translation by inhibition of Bruno-mediated repression (2015)
  • 著者名/発表者名: Kim, G., Pai, C.-I., Sato, K., Person, M. D., Nakamura, A. and Macdonald, P. M.
  • 雑誌名: PLoS Genetics 巻: 11 号: 2 ページ: e1004992-e1004992
  • DOI: 10.1371/journal.pgen.1004992
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Endophilin B is required for the Drosophila oocyte to endocytose yolk downstream of Oskar (2014)
  • 著者名/発表者名: 1. Tsai, Y. C., Chang, W., Liou, W., Lee, W. H., Chang, Y. W., Wang, P. Y., Tanaka, T., Nakamura, A. and Pai, L. M.
  • 雑誌名: Development 巻: 141 号: 3 ページ: 563-573
  • DOI: 10.1242/dev.097022
  • 査読あり
• [学会発表] Spatio-temporal regulation of oskar RNA localization and translation by the conserved P-body component, Edc3 (2013)
  • 著者名/発表者名: A, Nakamura
  • 学会等名: The 10th biennial conference on “Intracellular RNA Localization and Localized Translation”
  • 発表場所: Niagara-on-the-Lake, Ontario, Canada
  • 招待講演
• [学会発表] 生殖細胞形成におけるRNA制御 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村 輝
  • 学会等名: RNAフロンティアミーティング
  • 発表場所: ラフォーレ修善寺（静岡県伊豆市）
  • 招待講演
• [学会発表] ショウジョウバエの長鎖dsRNAを介したRNAi誘導における小胞型H+/Cl-交換輸送体Clc-7の役割 (2013)
  • 著者名/発表者名: 田中 翼、反町典子，中村 輝，Katja Bruckner
  • 学会等名: 第15回日本RNA学会年会
  • 発表場所: 愛媛県民文化会館・ひめぎんホール（愛知県松山市）
• [図書] ギルバート発生生物学 (2015)
  • 著者名/発表者名: Scott F. Gilbert (阿形清和、高橋淑子監訳）
  • 総ページ数: 835
  • 出版者: メディカル・サイエンス・インターナショナル
• [備考] 発生医学研究所 研究室紹介ページ
  • URL: http://www.imeg.kumamoto-u.ac.jp/divisions/germline_development/index.html