微少薬剤耐性細胞検出への挑戦

• 研究課題/領域番号: 25670184
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 実験病理学
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 大場 雄介 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30333503)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2013年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: バイオイメージング / 腫瘍 / 薬剤耐性 / フローサイトメーター / FRET / CML / 蛍光寿命

研究成果の概要

フィラデルフィア染色体陽性白血病の発症原因は、染色体相互転座により形成される融合遺伝子産物BCR-ABLの恒常的チロシンキナーゼ活性であり、BCR-ABLの特異的チロシンキナーゼ阻害薬の導入によりその治療成績は劇的に向上した。しかし、治療開始時・途上を問わず薬剤耐性症例が認められるため、極少数存在する耐性細胞の検出を可能とする技術開発が望まれている。本研究では、我々が開発した薬剤耐性細胞検出技術を基に、FRETバイオセンサーの改良、検出法の開発と改良、解析法の改良により薬剤耐性細胞検出能を従前技術の100倍に向上することを目的とし、結果として162倍の高感度化を達成した。

研究成果

• [雑誌論文] Fluorescent protein-based biosensors to visualize signal transduction beneath the plasma membrane (2015)
  • 著者名/発表者名: Y. Fujioka, et al.
  • 雑誌名: Anal. Sci. 巻: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular role of RNF43 in canonical and noncanonical Wnt signaling (2015)
  • 著者名/発表者名: T. Tsukiyama,et al.
  • 雑誌名: Mol. Cell. Biol. 巻: in press 号: 11 ページ: 2007-2023
  • DOI: 10.1128/mcb.00159-15
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] CRK adaptor protein induces epithelial-mesenchymal transition and metastasis of bladder cancer cells via HGF/c-Met feedback loop. (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto R, Tsuda M, Wang L, Maishi N, Abe t, Kimura T, Tanino M, Nishihara H, Hida K, Ohba Y, Shinohara N, Nonomura K, Tanaka S.
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: in press 号: 6 ページ: 709-17
  • DOI: 10.1111/cas.12662
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] p18/Stathmin1 is regulated by miR-31 in ovarian cancer in response to taxane (2015)
  • 著者名/発表者名: M.K. Hassan,et al.
  • 雑誌名: Oncoscience 巻: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibition of multidrug transporter in tumor endothelial cells enhances antiangiogenic effects of low-dose metronomic paclitaxel (2015)
  • 著者名/発表者名: 1.Akiyama K., Maishi N., Ohga N., Hida Y., Ohba Y., Alam Mohammad Towfik, Kawamoto T., Ohmura H., Yamada K., Torii C., Shindoh M. and *Hida K.
  • 雑誌名: Am J Pathol 巻: 185(2) 号: 2 ページ: 572-580
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2014.10.017
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Apoptosis and Molecular Targeting Therapy in Cancer (2014)
  • 著者名/発表者名: M. Hassan, et al.
  • 雑誌名: Biomed Res. Int. 巻: 2014 ページ: 150845-150845
  • DOI: 10.1155/2014/150845
  • 査読あり
• [雑誌論文] Agonist-promoted ubiquitination differentially regulates receptor trafficking of endothelin type A and type B receptors. (2014)
  • 著者名/発表者名: Terada K., Horinouchi T., Fujioka Y., Higashi T., Nepal P., Horiguchi M., Sarita K., Hatate C., Hoshi A., Harada T., Mai Y., Ohba Y. and Miwa S.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 巻: 289 号: 51 ページ: 35283-35295
  • DOI: 10.1074/jbc.m113.544171
  • NAID: 120005549588
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Lysosomal interaction of Akt with Phafin2 : a critical step in the induction of autophagy (2014)
  • 著者名/発表者名: M. Matsuda-Lennikov, F. Suizu, N. Hirata, M. Hashimoto, K. Kimura, T. Nagamine, Y. Fujioka, Y. Ohba, T. Iwanaga, and M. Noguchi
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9 号: 5 ページ: 671-685
  • DOI: 10.1093/neuonc/not239
  • NAID: 120005385325
  • 査読あり
• [雑誌論文] Histone deacetylase inhibitors sensitize lung cancer cells to hyperthermia : involvement of Ku70/SirT-1 in thermo-protection (2014)
  • 著者名/発表者名: M.K. Hassan, H. Watari, A.E. Salah-EldinAE, A.S. Sultan, Z. Mohamed, Y. Fujioka, Y. Ohba, N. Sakuragi
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9 号: 4 ページ: e94213-e94213
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0094213
  • NAID: 120005462418
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] ［特集］細胞の少数制と多様性に挑むシングルセルアナリシス―患者血液とFRETバイオセンサーを用いた薬効効果予測 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 雑誌名: 生体の科学 巻: 65 ページ: 171-175
• [雑誌論文] A Ca2+-dependent signaling circuit regulates influenza A virus internalization and infection (2013)
  • 著者名/発表者名: Fujioka Y, Tsuda M, Nanbo A, Hattori T, Sasaki J, Sasaki T, Miyazaki T, Ohba Y
  • 雑誌名: Nature Co㎜unnications 巻: 4 号: 1 ページ: 2-763
  • DOI: 10.1038/ncomms3763
  • 査読あり
• [雑誌論文] Beneficial innate signaling interference for anti-bacterial responses by a TLR-mediated enhancement of the MKP-IRF3 axis (2013)
  • 著者名/発表者名: Negishi H, Matsuki K, Endo N, Sarashina H. Miki S, Matsuda A, Fukazawa K, Taguchi-Atarashi N, Ikushima H, Yanai H, Nishio J, Honda K, Fujioka Y, Ohba Y, Noda T, Taniguchi S, Nishida E, Zhang Y, Chi H, Flavell RA, Taniguchi T
  • 雑誌名: Proc Nat1 Acad Sci U S A 巻: 49 号: 49 ページ: 19884-19889
  • DOI: 10.1073/pnas.1320145110
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibition of influenza A virus infection by Galectin-9 (2013)
  • 著者名/発表者名: T. Hattori, J. Maruyama, Y. Fujioka, Y. Nakayama, Y. Ohba, T. Niki, T. Arikawa, T. Miyazaki, M. Hirashima, and H. Kida a
  • 雑誌名: Jpn. J. Vet. Res. 巻: 61 ページ: 5-18
  • NAID: 120005289519
  • 査読あり
• [雑誌論文] All members of the EPI64 subfamily of TBC/RabGAPs also have GAP activities toward Ras (2013)
  • 著者名/発表者名: Hiroyuki Nagai
  • 雑誌名: J. Biochem 巻: 153 号: 3 ページ: 283-288
  • DOI: 10.1093/jb/mvs147
  • 査読あり
• [学会発表] FRET イメージングによる BMAL1-CLOCK 相互作用の解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 西出真也他
  • 学会等名: 第92回日本生理学会
  • 発表場所: 神戸国際会議場（兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2015-03-23
• [学会発表] Development of FRET-based biosensors for detection of CML cells resistant to molecular target drugs (2015)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Ohba et al.
  • 学会等名: International Symposium on Multi-dimensional Fluorescence Live Imaging of Cellular Function and Molecular Activities
  • 発表場所: 国立京都国際会館 （京都府京都市）
  • 年月日: 2015-01-26 – 2015-01-27
• [学会発表] Ca2+ signaling mediated influenza virus internalization into host cells (2015)
  • 著者名/発表者名: Yoichiro Fujioka et al.
  • 学会等名: International Symposium on Multi-dimensional Fluorescence Live Imaging of Cellular Function and Molecular Activities
  • 発表場所: 国立京都国際会館 （京都府京都市）
  • 年月日: 2015-01-26 – 2015-01-27
• [学会発表] Ca2+ signaling is involved in influenza virus entry into host cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoichiro Fujioka et al.
  • 学会等名: The 2014 ASCB/IFCB meeting
  • 発表場所: Pennsylvania Convention Center (Philadelphia, PA, USA)
  • 年月日: 2014-12-07
• [学会発表] FRETバイオセンサーを用いたCML生細胞におけるBCR-ABL活性測定 (2014)
  • 著者名/発表者名: 藤岡真理他
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県 横浜市）
  • 年月日: 2014-11-27
• [学会発表] Ras-PI3Kによるエンドサイトーシス制御に関与する因子の機能解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 堀内浩水他
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県 横浜市）
  • 年月日: 2014-11-27
• [学会発表] Ras-PI3Kシグナルによるエンドサイトーシス制御に関与する分子の探索 (2014)
  • 著者名/発表者名: 佐藤 絢他
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県 横浜市）
  • 年月日: 2014-11-27
• [学会発表] Ca2+シグナルを介したインフルエンザウイルス宿主細胞侵入メカニズムの解明 (2014)
  • 著者名/発表者名: 藤岡容一朗他
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県 横浜市）
  • 年月日: 2014-11-26
• [学会発表] 光による細胞の『観察』から『操作』へ (2014)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県 横浜市）
  • 年月日: 2014-11-25
  • 招待講演
• [学会発表] イメージング技術を用いた分子標的治療薬効果判定法の開発と応用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: 第4回北海道探索病理学研究シンポジウム
  • 発表場所: 京王プラザホテル札幌（北海道札幌市）
  • 年月日: 2014-10-25
  • 招待講演
• [学会発表] 癌細胞におけるシグナル伝達イメージングとその応用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館（京都府京都市）
  • 年月日: 2014-10-17
  • 招待講演
• [学会発表] ウイルス-宿主相互作用を可視化する (2014)
  • 著者名/発表者名: 南保明日香他
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館（京都府京都市）
  • 年月日: 2014-10-15
  • 招待講演
• [学会発表] Clinical application of fluorescence imaging (2014)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川横浜市）
  • 年月日: 2014-09-27
  • 招待講演
• [学会発表] カルシウムシグナルを介した外来因子の細胞取り込み機構 (2014)
  • 著者名/発表者名: 藤岡容一朗他
  • 学会等名: 第94回北海道医学大会生理系分科会
  • 発表場所: 北海道大学学術交流会館（北海道札幌市）
  • 年月日: 2014-08-30
• [学会発表] Ras-PI3Kシグナルによるエンドサイトーシス制御機構の解明 (2014)
  • 著者名/発表者名: 佐藤絢他
  • 学会等名: 第94回北海道医学大会生理系分科会
  • 発表場所: 北海道大学学術交流会館（北海道札幌市）
  • 年月日: 2014-08-30
• [学会発表] インフルエンザウイルスのCa+2シグナルを介した宿主細胞侵入機構 (2014)
  • 著者名/発表者名: 藤岡容一朗他
  • 学会等名: 第66回日本細胞生物学会大会
  • 発表場所: 奈良県新公会堂（奈良県奈良市）
  • 年月日: 2014-06-11
• [学会発表] フェルスター共鳴エネルギー移動を用いたシグナル伝達の可視化とその応用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: 第91回日本生理学会大会
  • 発表場所: 鹿児島大学郡元キャンパス（鹿児島）
  • 招待講演
• [学会発表] Involvement of Ras-PI3K-mediated calcium signaling in the regulation of endocytosis (2014)
  • 著者名/発表者名: Y. Fujioka, M. Tsuda, A. Nanbo, T. Hattori, J. Sasaki, T. Sasaki, T. Miyazaki and Y. Ohba
  • 学会等名: 第91回日本生理学会大会
  • 発表場所: 鹿児島大学郡元キャンパス（鹿児島）
• [学会発表] Influenza viruses internalize into host cells via calcium signaling (2013)
  • 著者名/発表者名: Y. Fujioka, M. Tsuda, A. Nanbo, T. Hattori, J. Sasaki, T. Sasaki, T. Miyazaki and Y. Ohba
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸国際会議場他（神戸）
• [学会発表] P-gp阻害剤はメトロノミックケモセラピーの血管新生阻害効果を強める (2013)
  • 著者名/発表者名: 秋山廣輔，大賀則孝，樋田泰浩，間石奈湖，Alam Mohammad Towfik，川本泰輔，大村瞳，山田健司，鳥居ちさほ，進藤正信，大場雄介，樋田京子
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（横浜）
• [学会発表] 血管内皮細胞によるがん転移促進 (2013)
  • 著者名/発表者名: 間石奈湖，大場雄介，大賀則孝,秋山廣輔,山本和幸，浜田淳一，川本泰輔，Alam Mohammad Towfik, 大村瞳，進藤正信，樋田泰浩，樋田京子
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（横浜）
• [学会発表] 細胞機能の蛍光バイオイメージング (2013)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: 第33回日本骨形態計測学会
  • 発表場所: アクトシティ浜松コングレスセンター（浜松）
  • 招待講演
• [学会発表] Involvement of Ras-PI3K signaling in the uptake of exogenous factors into cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Y. Fujioka, M. Tsuda, A. Nanbo, T. Hattori, J. Sasaki, T. Sasaki, T. Miyazaki and Y. Ohba
  • 学会等名: 第65回日本細胞生物学会大会
  • 発表場所: ウインクあいち（名古屋）
• [学会発表] 細胞機能とシグナル伝達の蛍光イメージング
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: 日本生化学会北海道支部例会第50回記念大会
  • 発表場所: 北海道大学医学部学友会館（札幌市）
  • 招待講演
• [図書] Fluorescence-Based Biosensors-concepts and applications. Progress in Molecular Biology and Translational Science (2013)
  • 著者名/発表者名: Y, Ohba, Y. Fujioka, S. Nakada and M. Tsuda
  • 総ページ数: 429
  • 出版者: Elsevier, London
• [産業財産権] フェルスター共鳴エネルギー移動用ポリペプチド (2014)
  • 発明者名: 大場雄介
  • 権利者名: 大場雄介
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2014-04-08
  • 外国
• [産業財産権] フェルスター共鳴エネルギー移動用ポリペプチド (2013)
  • 発明者名: 大場雄介
  • 権利者名: 北海道大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2013-04-08