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新しい低分子量機能性ドメイン群の創製と臨床化学への応用

研究課題

研究課題/領域番号 25670280
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分基金
研究分野 病態検査学
研究機関神戸薬科大学

研究代表者

小林 典裕  神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (90205477)

研究分担者 大山 浩之  神戸薬科大学, 薬学部, 助教 (80572966)
森田 いずみ  神戸薬科大学, 薬学部, 助手 (20299085)
研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2015-03-31
研究課題ステータス 完了 (2014年度)
配分額 *注記
3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
2013年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
キーワード進化分子工学
研究成果の概要

抗体は診断マーカーの高感度分析に必須であるが、分子量が大きく大腸菌内での発現量も低い。そこで、分子量が小さく大腸菌内で発現率が高い「リガンド結合ドメインタンパク質群」の創製を試みた。まず、抗体のH鎖可変部ドメイン (VH) を基本構造とし、相補性決定部H3のアミノ酸をランダム化したライブラリーを作製したが、実用的な変異体の取得には至らなかった。一方、単量体化したストレプトアビジンの3カ所のループ部位にin silico分子モデリングに基づいてランダム変異を導入したライブラリーを作製したところ、コルチゾールまたはエストラジオールに対して結合能を獲得した変異体をそれぞれ単離することができた。

報告書

(3件)
  • 2014 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2013 実施状況報告書
  • 研究成果

    (17件)

すべて 2015 2014 2013 その他

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (12件) 図書 (1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Direct detection of ABCA1-dependent HDL formation based on lipidation-induced hydrophobicity change in apoA-I.2014

    • 著者名/発表者名
      Risa Omura, Kohjiro Nagao, Norihiro Kobayashi, Kazumitsu Ueda, and Hiroyuki Saito
    • 雑誌名

      J Lipid Res.

      巻: 55 号: 11 ページ: 2423-2431

    • DOI

      10.1194/jlr.d049445

    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Anti-idiotype scFv-enzyme fusion proteins: A clonable analyte-mimicking probe for standardized immunoassays targeting small biomarkers.2013

    • 著者名/発表者名
      Oyama H., Tanaka E., Kawanaka T., Morita I., Niwa T., Kobayashi N.
    • 雑誌名

      Analytical Chemistry

      巻: 85 号: 23 ページ: 11553-11559

    • DOI

      10.1021/ac402868f

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] “Breeding” diagnostic antibodies for higher assay performance: a 250-fold affinity-matured antibody mutant targeting a small biomarker.2013

    • 著者名/発表者名
      Oyama H., Yamaguchi S., Nakata S., Niwa T., Kobayashi N.
    • 雑誌名

      Analytical Chemistry

      巻: 85 号: 10 ページ: 4930-4937

    • DOI

      10.1021/ac3037602

    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 抗エストラジオールscFv試験管内親和性成熟機構の解析2015

    • 著者名/発表者名
      大山 浩之,江波 友理,木口 裕貴,森田 いずみ,小林 典裕
    • 学会等名
      日本薬学会第135年会
    • 発表場所
      神戸市
    • 年月日
      2015-03-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 抗コチニンscFvの親和性成熟における部位特異的点変異の効果2015

    • 著者名/発表者名
      森田 いずみ,西村 沙貴,蓑田 早耶香,木口 裕貴,大山 浩之,小林 典裕
    • 学会等名
      日本薬学会第135年会
    • 発表場所
      神戸市
    • 年月日
      2015-03-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] アミロイドーシスの病態解明を目指した抗ApoA-Ⅰモノクローナル抗体の作製2015

    • 著者名/発表者名
      堀江 有紀,土屋 沙織,大山 浩之,小林 典裕,斎藤 博幸
    • 学会等名
      日本薬学会第135年会
    • 発表場所
      神戸市
    • 年月日
      2015-03-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 大麻成分に対するモノクローナル抗体の調製とキャラクタリゼーション2015

    • 著者名/発表者名
      伊藤 綾,安尾 まゆみ,竜田 都加,森田 いずみ,大山 浩之,小林 典裕
    • 学会等名
      日本薬学会第135年会
    • 発表場所
      神戸市
    • 年月日
      2015-03-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] バイオレイヤー干渉法を用いた人工 HDL 粒子と抗 apoA-I 抗体との相互作用評価2015

    • 著者名/発表者名
      木村 仁,武知 佑樹,小林 典裕,齋藤 博幸
    • 学会等名
      日本薬学会第135年会
    • 発表場所
      神戸市
    • 年月日
      2015-03-27
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 高感度ヒト血清中コルチゾールELISAの開発を目的とするscFv-ルシフェラーゼ融合タンパク質の創製2014

    • 著者名/発表者名
      大山 浩之,三宅 沙也香,森田 いずみ,丹羽 俊文,小林 典裕
    • 学会等名
      日本分析化学会第63年会
    • 発表場所
      東広島市
    • 年月日
      2014-09-19
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 改良型変異scFvフラグメントを用いるヒト尿中コチニンのモノクローナルELISA2014

    • 著者名/発表者名
      森田 いずみ,平井 杏奈,西村 沙貴,大山 浩之,太田 光熙,小林 典裕
    • 学会等名
      日本分析化学会第63年会
    • 発表場所
      東広島市
    • 年月日
      2014-09-19
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [学会発表] 試験管内親和性成熟scFvを用いるヒト尿中コチニンのELISA2013

    • 著者名/発表者名
      大山 浩之,森田 いずみ,太田 光熙,小林 典裕
    • 学会等名
      生物化学的測定研究会 第18回学術集会・総会
    • 発表場所
      京都
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] 高親和力scFv融合タンパク質を用いるコルチゾールの高感度ELISA2013

    • 著者名/発表者名
      大山 浩之,森田 いずみ,太田 光熙,小林 典裕
    • 学会等名
      第53回日本臨床化学会年次学術集会
    • 発表場所
      徳島
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] Anti-Idiotype scFv-Enzyme Fusion Proteins Work as a Clonable Analyte-Mimicking Probe That Enables Standardization of Hapten Immunoassays2013

    • 著者名/発表者名
      Kobayashi N., Oyama H., Morita I., Niwa T.
    • 学会等名
      Fifth Annual PEGS Europe : Protein & Antibody Engineering Summit
    • 発表場所
      Lisbon
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] "Breeding" Diagnostic Antibodies: A 250-Fold Affinity-Matured scFv Mutant for Measuring Human Serum Estradiol-17β2013

    • 著者名/発表者名
      Oyama H., Niwa T., Kobayashi N.
    • 学会等名
      Fifth Annual PEGS Europe : Protein & Antibody Engineering Summit
    • 発表場所
      Lisbon
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [学会発表] "Breeding" Diagnostic Antibodies: An Affinity-Matured scFv for Urinary Cotinine ELISA to Monitor Tobacco Smoke Exposure2013

    • 著者名/発表者名
      Morita I., Oyama H., Banzono E., Ohta M., Kobayashi N.
    • 学会等名
      Fifth Annual PEGS Europe : Protein & Antibody Engineering Summit
    • 発表場所
      Lisbon
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書
  • [図書] 免疫測定法2014

    • 著者名/発表者名
      生物化学的測定研究会
    • 総ページ数
      325
    • 出版者
      講談社
    • 関連する報告書
      2014 実績報告書
  • [備考] 神戸薬科大学 生命分析化学研究室HP

    • URL

      http://www.kobepharma-u.ac.jp/analchem/

    • 関連する報告書
      2014 実績報告書

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公開日: 2014-07-25   更新日: 2019-07-29  

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