iPS細胞とRNAiを用いた新規解析戦略の確立とそれを用いたHTT遺伝子機能探索

• 研究課題/領域番号: 25670428
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 神経内科学
• 研究機関: 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター
• 研究代表者: 北條 浩彦 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター, 神経研究所神経薬理研究部, 室長 (60238722)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2015年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2014年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2013年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
• キーワード: 神経変性疾患 / ハンチントン病 / ハンチンチン遺伝子 / RNAi / shRNA / AAV / ES細胞 / Htt / アデノ随伴ウイルス / 多能性幹細胞 / iPS細胞

研究成果の概要

ハンチンチン（Htt）遺伝子の機能や役割についてはよく分かっていない。本研究は、多能性幹細胞とRNAiを組み合せた新しいアプローチによって、その解明につながるデータの取得を目指した。Httを抑制するsiRNA・shRNAの設計を完了し、アデノ随伴ウイルス（AAV）を用いたshRNA発現AAVの構築も完了した。そしてshRNA発現AAVをマウスES細胞に感染させHttのノックダウンを試みたが、導入効率の低さが原因で目的を達成することができなかった。従来法による導入も試みたが、強力な抑制を誘導することができなかった。今後はCRISPR/Cas9を採用した新規戦略で目的達成を目指したいと考えている。

研究成果

• [雑誌論文] Eomesodermin-expressing T-helper cells are essential for chronic neuroinflammation (2015)
  • 著者名/発表者名: Raveney, J.E.B., S. Oki, H. Hohjoh, M. Nakamura, W. Sato, M. Murata, and T. Yamamura
  • 雑誌名: Nature Communications 巻: 6 号: 1 ページ: 8437-8437
  • DOI: 10.1038/ncomms9437
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Glucocorticoid affects dendritic transport of BDNF-containing vesicles. (2015)
  • 著者名/発表者名: Adachi N, Numakawa T, Nakajima S, Fukuoka M, Odaka H, Katanuma Y, Ooshima Y, Hohjoh H, Kunugi H.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 5 号: 1 ページ: 12684-12684
  • DOI: 10.1038/srep12684
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Normalization of overexpressed alpha-synuclein causing Parkinson’s disease by a moderate gene silencing with RNA interference. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M., Suzuki M., Fukuoka M., Fujikake N., Watanabe S., Murata M., Wada K., Nagai Y., and *Hohjoh H.
  • 雑誌名: Mol Ther Nucleic Acids 巻: 4 ページ: e241-e241
  • DOI: 10.1038/mtna.2015.14
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] ずくなしのミニプレップ (2015)
  • 著者名/発表者名: 北條浩彦
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 33 ページ: 3161-3165
• [雑誌論文] ずくなしのトランスフォーメーション法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 北條浩彦
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 33 ページ: 1465-1460
• [雑誌論文] Gene silencing mediated by endogenous microRNAs under heat stress conditions in mammalian cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fukuoka M., Yoshida M., Eda A., Takahashi M., *Hohjoh H.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 9(7) 号: 7 ページ: e103130-e103130
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0103130
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] A novel measurement of allele discrimination for assessment of allele-specific silencing by RNA interference. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M. and *Hohjoh H.
  • 雑誌名: Mol Biol Rep 巻: 41 号: 11 ページ: 7115-7120
  • DOI: 10.1007/s11033-014-3586-7
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Disease-associated mutations of TDP-43 promote turnover of the protein through the proteasomal pathway. (2014)
  • 著者名/発表者名: Araki W., Minegishi S., Motoki K., Kume H., Hohjoh H., Araki YM., and Tamaoka A.
  • 雑誌名: Mol Neurobiol 巻: 50 号: 3 ページ: 1049-1058
  • DOI: 10.1007/s12035-014-8644-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Disease-causing allele-specific silencing by RNA interference. (2013)
  • 著者名/発表者名: *Hohjoh H.
  • 雑誌名: Pharmaceuticals 巻: 6 号: 4 ページ: 522-535
  • DOI: 10.3390/ph6040522
  • 査読あり
• [雑誌論文] Specific inhibition of tumor cells by oncogenic EGFR specific silencing by RNA interference. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M., Chiyo T., Okada T., and *Hohjoh H.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8（８） 号: 8 ページ: e73214-e73214
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0073214
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ubiquitin C-terminal hydrolase L1 (UCH-L1) act as a novel potentiator of cyclin-dependent kinases to enhance cell proliferation, independent of its hydrolase activity (2013)
  • 著者名/発表者名: Kabuta, T., Mitsui, T., Takahashi, M., Fujiwara, Y., Kabuta, C., Konya, C., Tsuchiya, Y., Hatanaka, Y., Uchida, K., Hohjoh, H., Wada, K
  • 雑誌名: J. Biol. Chem 巻: 288 号: 18 ページ: 12615-12626
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.435701
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of a novel bone morphogenetic protein (BMP)-inducible transcript, BMP-inducible transcript-1, by utilizing the conserved BMP-responsive elements in the Id genes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shin M, Ohte S, Fukuda T, Sasanuma H, Yoneyama K, Kokabu S, Miyamoto A. Tsukamoto S, Hohjoh H, Jimi E, Katagiri T.
  • 雑誌名: J Bone Miner Metab. 巻: 31 号: 1 ページ: 34-43
  • DOI: 10.1007/s00774-012-0381-1
  • NAID: 10031168835
  • 査読あり
• [雑誌論文] RNA expression during neuronal differentiation of human teratocarcinoma NTera2D1 and mouse embryonic carcinoma P19 cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hohjoh H.
  • 雑誌名: Methods Mol Biol. 巻: 936 ページ: 257-269
• [学会発表] 若年および老齢マウスの血中miRNAの解析：若年マウス高発現miRNAの筋分化への関与 (2015)
  • 著者名/発表者名: 福岡聖之、北條浩彦
  • 学会等名: 第38回日本分子生物学会大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] Difference in plasma circulating free microRNAs between young and aged mice: A possible contribution of miR-1 on myogenic differentiation under a low temperature condition. (2015)
  • 著者名/発表者名: Fukuoka M, and Hohjoh H.
  • 学会等名: 65th Annual Meeting of the American Society of Human Genetics
  • 発表場所: San Diego, CA, USA。
  • 年月日: 2015-10-09
  • 国際学会
• [学会発表] Long-term clinical outcome of SCA8 in Japanese. (2015)
  • 著者名/発表者名: Furuya H, Arahata H, Watanabe A, Ohyagi Y, Hohjoh H, Maeda N, Iwaki T, and Fujii N.
  • 学会等名: 8th International Conference on Unstable Microsatellites and Human Disease
  • 発表場所: Guanancaste, Costa Rica
  • 年月日: 2015-01-17
• [学会発表] 熱ストレス下におけるマイクロRNAの遺伝子発現制御に関する解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 福岡聖之、吉田満史子、枝亜希子、高橋理貴、北條浩彦.
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(横浜）
  • 年月日: 2014-11-26
• [学会発表] 老化モデルマウスおよび正常加齢マウスにおけるmiR-29の発現上昇とそれに伴うコラーゲンタイプIVの発現低下 (2014)
  • 著者名/発表者名: 北條浩彦、高橋理貴、枝亜希子、福島達伸
  • 学会等名: 第59回日本人類遺伝学会大会
  • 発表場所: タワーホール船堀（東京）
  • 年月日: 2014-11-21
• [学会発表] Application of atypical RNAi for human diseases. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Nakamura Y, and Hohjoh H.
  • 学会等名: Joint Australia and Japan RNA (jajRNA) meeting
  • 発表場所: Sydney, Australia
  • 年月日: 2014-11-03
• [学会発表] Gene silencing mediated by endogenous miRNAs under heat stress conditions in mammalian cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fukuoka M, Yoshida M, Eda A, Takahashi M, and Hohjoh H.
  • 学会等名: 64rd Annual Meeting of the American Society of Human Genetics
  • 発表場所: San Diego Convention Center, San Diego, CA, USA
  • 年月日: 2014-10-20
• [学会発表] Early drug responses that are followed by an acquired drug resistance in non-small cell lung cancer cells exposed to gefitinib. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Fukuoka M, and Hohjoh H.
  • 学会等名: 64rd Annual Meeting of the American Society of Human Genetics
  • 発表場所: San Diego Convention Center, San Diego, CA, USA
  • 年月日: 2014-10-19
• [学会発表] デジタルPCRを利用した新しい研究の可能性 (2014)
  • 著者名/発表者名: 北條浩彦
  • 学会等名: ライフテクノロジーズ・オンラインセミナー
  • 発表場所: ライフテクノロジーズジャパン株式会社本社、東京
  • 年月日: 2014-05-29
  • 招待講演
• [学会発表] A corrective gene silencing by RNA interference to control over-expressed SNCA. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Suzuki M, Fujikake N, Murata M, Wada K, Nagai Y, and Hohjoh H.
  • 学会等名: 63rd Annual Meeting of the American Society of Human Genetics
  • 発表場所: Boston Convention & Exhibition Center, Boston, MA, USA
• [学会発表] 野生型α-シヌクレイン過剰発現に対する遺伝子発現量補正型RNAi誘導法の確立と有効性評価 (2013)
  • 著者名/発表者名: 高橋理貴、鈴木マリ、藤掛伸宏、村田美穂、和田圭司、永井義隆、北條浩彦
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場(神戸)
• [学会発表] 進行性骨化性線維異形成症のiPS細胞を用いたアレル特異的RNAi(ASP-RNAi)と薬剤スクリーニング
  • 著者名/発表者名: 古谷博和、菅原三和、渡邊暁博、荒畑創、笹ヶ迫直一、藤井直樹、 高橋理貴、北條浩彦、江良択実
  • 学会等名: 第54回日本神経学会学術大会総会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム(東京)
• [図書] 医学のあゆみ (2014)
  • 著者名/発表者名: 北條浩彦
  • 総ページ数: 1
  • 出版者: 医歯薬出版株式会社
• [図書] 原理からよくわかるリアルタイムPCR完全実験ガイド(編集：北條浩彦) (2013)
  • 著者名/発表者名: 北條浩彦
  • 総ページ数: 34
  • 出版者: 羊土社
• [図書] 原理からよくわかるリアルタイムPCR完全実験ガイド(編集：北條浩彦) (2013)
  • 著者名/発表者名: 高橋理貴、北條浩彦
  • 総ページ数: 15
  • 出版者: 羊土社
• [産業財産権] シナプス形成増強剤及び神経変性疾患治療剤 (2015)
  • 発明者名: 北條浩彦、高橋理貴
  • 権利者名: 国立精神・神経医療研究センター
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2015-12-21