生細胞内RNAの可視化と制御を実現する革新的技術の創出

• 研究課題/領域番号: 25708025
• 研究種目: 若手研究(A)
• 配分区分: 一部基金
• 研究分野: 生体関連化学
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 吉村 英哲 東京大学, 理学(系)研究科(研究院), 助教 (90464205)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 26,260千円 (直接経費: 20,200千円、間接経費: 6,060千円); 2015年度: 6,240千円 (直接経費: 4,800千円、間接経費: 1,440千円); 2014年度: 6,240千円 (直接経費: 4,800千円、間接経費: 1,440千円); 2013年度: 13,780千円 (直接経費: 10,600千円、間接経費: 3,180千円)
• キーワード: RNA / イメージング / 1分子観察 / テロメア

研究成果の概要

本研究では、生細胞内においてテロメアRNA（telomere repeat-containing RNA: TERRA）の1分子可視化蛍光プローブを開発し、TERRAの機能解明を行なった。全反射蛍光顕微鏡を用いてTERRAとテロメアの生細胞内分布を解析し、テロメアから1～2μm離れた領域にTERRAが集積することを明らかにした。さらに、hnRNPA1とTERRA、テロメアの同時観察を行い、hnRNPA1とTERRAがこの領域内で共局在を示すことを発見した。以上より、テロメア上のhnRNPA1をTERRAが捕捉し、hnRNPA1のテロメア調節能を制御していることを見いだした。

研究成果

• [雑誌論文] Genetically Encoded Fluorescent Probe for Imaging Apoptosis in Vivo with Spontaneous GFP Complementation. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Nasu, Yoichi Asaoka, Misako Namae, Hiroshi Nishina, Hideaki Yoshimura and Takeaki Ozawa
  • 雑誌名: Anal Chem 巻: 88 号: 1 ページ: 838-844
  • DOI: 10.1021/acs.analchem.5b03367
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Development of red-shifted mutants derived from luciferase of Brazilian click beetle Pyrearinus termitilluminans (2015)
  • 著者名/発表者名: Tomoki Nishiguchi, Toshimichi Yamada, Yusuke Nasu, Mashiho Ito, Hideaki Yoshimura, Takeaki Ozawa
  • 雑誌名: Journal of Biomedical Optics 巻: 20 号: 10 ページ: 101205-101205
  • DOI: 10.1117/1.jbo.20.10.101205
  • 査読あり
• [雑誌論文] RNAと生細胞内1分子イメージングの可能性 (2015)
  • 著者名/発表者名: 吉村英哲
  • 雑誌名: Labcab 巻: 12 ページ: 19-20
• [雑誌論文] 生細胞内RNAイメージング (2015)
  • 著者名/発表者名: 吉村英哲、小澤岳昌
  • 雑誌名: 細胞工学 巻: 34 ページ: 53-58
• [雑誌論文] Simultaneous time-lamination imaging of protein association using a split fluorescent timer protein (2015)
  • 著者名/発表者名: A. Takamura, M. Hattori, H. Yoshimura and T. Ozawa
  • 雑誌名: Anal. Chem. 巻: 87 号: 6 ページ: 3366-3372
  • DOI: 10.1021/ac504583t
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] 蛍光顕微鏡を用いた生細胞内１分子可視化解析法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 吉村英哲、小澤岳昌
  • 雑誌名: The Bulletin of the Society of Nano Science and Technology 巻: 13 ページ: 61-65
• [雑誌論文] Methods of split-reporter reconstitution for the analysis of biomolecules. (2014)
  • 著者名/発表者名: H. Yoshimura and T. Ozawa
  • 雑誌名: Chem. Record 巻: 14 号: 3 ページ: 492-501
  • DOI: 10.1002/tcr.201402001
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] Analysis of single molecule dynamic to reveal the functional mechanism of telomeric repeat-containing RNA (2016)
  • 著者名/発表者名: YOSHIMURA, Hideaki; YAMADA, Toshimichi; OZAWA, Takeaki
  • 学会等名: 第95日本化学会春季年会
  • 発表場所: 同志社大学京田辺キャンパス（京都府･京田辺市）
  • 年月日: 2016-03-24
• [学会発表] SINGLE-MOLECULE LIVE-CELL IMAGING OF A NON-CODING RNA (2016)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimichi Yamada, Rintaro Shimada, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: Focus on Microscopy 2016
  • 発表場所: 台北（台湾）
  • 年月日: 2016-03-20
  • 国際学会
• [学会発表] Development of a genetically-encoded probe to visualize β-actin mRNA in living cells based on a reconstituted GFP and an RNA binding domain PUM-HD (2015)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimichi Yamada, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: Pacifichem2015
  • 発表場所: Honolulu (U.S.)
  • 年月日: 2015-12-15
  • 国際学会
• [学会発表] A fluorescent probe for single-molecule live-cell imaging of telomeric-repeat containing RNA using fluorescent protein reconstitution and an RNA-binding domain PUM-HD (2015)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimchi Yamada, Rintaro Shimada, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: Pacifichem2015
  • 発表場所: Honolulu (U.S.)
  • 年月日: 2015-12-15
  • 国際学会
• [学会発表] Single molecule imaging of telomeric-repeat containing RNA in living cells (2015)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimichi Yamada, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: 9th International Symposium on Nanomedicine
  • 発表場所: 三重大学（三重県･津市）
  • 年月日: 2015-12-10
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Single molecule imaging of telomeric repeat containing RNA in living cells (2015)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimichi Yamada, Hiroki Segawa, Takeaki ozawa
  • 学会等名: 第５３回生物物理学会
  • 発表場所: 金沢大学 角間キャンパス（石川県・金沢市）
  • 年月日: 2015-09-13
• [学会発表] テロメアRNA生細胞内1分子動態の定量評価法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 吉村英哲、山田俊理、瀬川尋貴、小澤岳昌
  • 学会等名: 分析化学会第６４年会
  • 発表場所: 九州大学伊都キャンパス（福岡県・福岡市）
  • 年月日: 2015-09-09
• [学会発表] Analysis of dynamics on a non-coding RNA in living cells using a single molecule tracking approach (2015)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimichi Yamada, Hiroki Segawa, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: JASIS RSC Tokyo international conference
  • 発表場所: 幕張メッセ（千葉県・千葉市）
  • 年月日: 2015-09-03
  • 国際学会
• [学会発表] 細胞内1分子動態分析に基づくテロメアRNAの作動機構解析法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 吉村英哲、山田俊理、瀬川尋貴、小澤岳昌
  • 学会等名: 第７５回分析化学討論会
  • 発表場所: 山梨大学（山梨県・甲府市）
  • 年月日: 2015-05-23
• [学会発表] Single molecule imaging to reveal mechanisms of complex cellular systems (2015)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura
  • 学会等名: NTU-SNU-UT Chemistry Symposium
  • 発表場所: 台北（台湾）
  • 年月日: 2015-01-16
  • 招待講演
• [学会発表] Single molecule imaging of Akt on the plasma membrane in living cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: 「細胞のメゾスケール構造機能」シンポジウム
  • 発表場所: 京都大学iCeMS本部棟（京都府京都市）
  • 年月日: 2014-12-13
• [学会発表] Single molecule imaging in living cells to reveal the relationship between motions and functions of biological molecules (2014)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: 8th International Symposium on Nanomedicine
  • 発表場所: 愛媛大学（愛媛県松山市）
  • 年月日: 2014-12-04 – 2014-12-06
  • 招待講演
• [学会発表] Signal transduction mechanism of Akt reveald by single molecule imaging of Akt and receptor molecules (2014)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: 第52回生物物理学会年会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（北海道札幌市）
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] 生細胞１分子動態分析によるシグナル伝達タンパク質Aktの機能発現機構解明 (2014)
  • 著者名/発表者名: 吉村英哲・小澤岳昌
  • 学会等名: 第65回分析化学会年会
  • 発表場所: 広島大学東広島キャンパス（広島県東広島市）
  • 年月日: 2014-09-15 – 2014-09-17
• [学会発表] Analysis of single-molecule dynamics of signal transductino molecule Akt in living cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: RSC-TIC JAIMA conference 幕張
  • 発表場所: 幕張メッセ
  • 年月日: 2014-09-04 – 2014-09-05
• [学会発表] Signal transduction mechanism of Akt based on single molecule dynamics in livng cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: 第37回 内藤コンファレンス
  • 発表場所: ニセコヒルトンビレッジ（北海道ニセコ町）
  • 年月日: 2014-07-15 – 2014-07-18
• [学会発表] 新規蛍光プローブ開発を通じたテロメアRNAの生細胞内１分子動態分析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 吉村英哲・小澤岳昌
  • 学会等名: 第74回 分析化学討論会
  • 発表場所: 日本大学郡山キャンパス（福島県郡山市）
  • 年月日: 2014-05-24 – 2014-05-25
• [学会発表] A study of a molecular mechanism of intracellular signal transduction based on single-molecule imaging (2014)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: The 2nd Japan-China Symposium on Nanomedicine
  • 発表場所: 広島大学霞キャンパス（広島県広島市）
  • 年月日: 2014-05-16 – 2014-05-17
  • 招待講演
• [学会発表] Live Cell Imaging of Single-Molecule RNAs Using PUM-HD Based RNA Probes (2014)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimichi Yamada, Asumi Inaguma, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: Focus on Microscopy 2014 (FOM 2014)
  • 発表場所: シドニー（オーストラリア）
  • 年月日: 2014-04-13 – 2014-04-16
• [学会発表] Fluorescence Imaging of Telomeric Repeat-Containing RNA in Living Cells (2014)
  • 著者名/発表者名: 山田俊理・吉村英哲・服部 満・小澤岳昌
  • 学会等名: 日本化学会第９４春季年会
  • 発表場所: 名古屋大学東山キャンパス
• [学会発表] Live-cell imaging of single β-actin mRNAs through development of a specific RNA labeling method (2013)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimichi Yamada, Asumi Inaguma, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: RSC-TIC2013 (JASISカンファレンス)
  • 発表場所: 幕張メッセ
• [学会発表] 緑色蛍光タンパク質を利用した内在性テロメアRNAの一分子イメージング法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 山田 俊理・吉村 英哲・服部 満・小澤 岳昌
  • 学会等名: 日本分析化学会第６２年会
  • 発表場所: 近畿大学東大阪キャンパス
• [学会発表] 生細胞内における内在性テロメアRNA可視化法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 山田俊理・吉村英哲・服部 満・小澤岳昌
  • 学会等名: 第３回CSJ化学フェスタ２０１３
  • 発表場所: タワーホール船堀
• [学会発表] Single molecule imaging of endogenous telomeric RNA in living cells (2013)
  • 著者名/発表者名: 山田俊理・吉村英哲・服部 満・小澤岳昌
  • 学会等名: 第 51 回日本生物物理学会年会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
• [学会発表] Visualization of molecular motion in living cells using a single molecule imaging method (2013)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura
  • 学会等名: 錯体化学会第６３回討論会
  • 発表場所: 琉球大学千原キャンパス
  • 招待講演
• [学会発表] Analysis of RNA dynamics in living cells based on single molecule imaging (2013)
  • 著者名/発表者名: Hideaki Yoshimura, Toshimichi Yamada, Hiroki Segawa, Asumi Inaguma, Takeaki Ozawa
  • 学会等名: 7th International symposium on nanomedicine (ISNM2013)
  • 発表場所: 九州工業大学
  • 招待講演