核磁気共鳴法による巨大蛋白質多量体の動態解析法の開発

• 研究課題/領域番号: 25840021
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 構造生物化学
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 宮ノ入 洋平 名古屋大学, 理学(系)研究科(研究院), 特任助教 (80547521)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2014年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円); 2013年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: NMR / 蛋白質動態

研究成果の概要

本研究課題では、分子量884kDaの巨大蛋白質複合体であるGroEL-ES複合体について、核磁気共鳴法を用いて、蛋白質複合体内に存在する運動性を捉える手法を開発した。代表者は蛋白質を構成するアミノ酸に対し、部位特異的に高度な安定同位体標識を施すことにより、GroEL-ES複合体の核磁気共鳴信号を高感度に観測する手法を確立し、複合体の形成に伴う運動性の変化を捉えることに成功した。本手法を利用する事により、多くの生体高分子複合体について立体構造、動的側面から生体機能を明らかにすることが期待できる。

研究成果

• [雑誌論文] Expression and purification of a GRAS domain of SLR1, the rice DELLAprotein (2014)
  • 著者名/発表者名: Sato, T., Miyanoiri, Y., Takeda, M., Naoe, Y., Mitani, R., Hirano, K., Takehara, S., Kainosho, M., Matsuoka, M., Ueguchi-Tanaka, M., Kato, H.
  • 雑誌名: Protein Expr. Purif. 巻: N/A ページ: 248-254
  • DOI: 10.1016/j.pep.2014.01.006
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Use of H/D isotope effects to gather information about hydrogen bonding and hydrogen exchange rates (2014)
  • 著者名/発表者名: Mitsuhiro Takeda, Yohei Miyanoiri, Tsutomu Terauchi, Chun-Jiun Yang, Masatsune Kainosho
  • 雑誌名: J. Magn. Reson. 巻: 241 ページ: 148-154
  • DOI: 10.1016/j.jmr.2013.10.001
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Differential isotope-labeling for Leu and Val residues in a protein by E. coli cellular expression using stereo-specifically methyl labeled amino acids (2013)
  • 著者名/発表者名: Yohei Miyanoiri, Mitsuhiro Takeda, Kosuke Okuma, Akira M. Ono, Tsutomu Terauchi, Masatsune Kainosho
  • 雑誌名: J. Biomol. NMR 巻: 57 号: 3 ページ: 237-249
  • DOI: 10.1007/s10858-013-9784-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular bases of multimodal regulation of a fungal transient receptor potential (TRP) channel (2013)
  • 著者名/発表者名: Ihara M,Hamamoto S, Miyanoiri Y, Takeda M, Kainosho M, Yabe I, Uozumi N, Yamashita A
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 巻: (in press) 号: 21 ページ: 15303-17
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.434795
  • 査読あり
• [学会発表] 高度な安定同位体標識技術を利用した 高分子量蛋白質の立体構造解析法の開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 宮ノ入洋平、武田光広、楊淳竣、寺内勉、甲斐荘正恒
  • 学会等名: 第四回 岐阜構造生物学・医学・論理的創薬研究会 シンポジウム
  • 発表場所: 岐阜薬科大学、岐阜県
  • 年月日: 2015-03-05
  • 招待講演
• [学会発表] 大腸菌生合成系を利用した新規SAILアミノ酸標識法の開発 (2014)
  • 著者名/発表者名: 宮ノ入洋平、石田洋二郎、武田光広、寺内勉、井上正順、甲斐荘正恒
  • 学会等名: 第53回 NMR討論会
  • 発表場所: 大阪大学、 大阪府
  • 年月日: 2014-11-04 – 2014-11-06
• [学会発表] Structural analysis of large molecular proteins using SAIL method and non-uniform sampling (2014)
  • 著者名/発表者名: Miyanoiri Y, Takeda M, Yang CJ, Terauchi T, Kainosho M
  • 学会等名: IPR seminar “Practical Aspects of in Non-uniform Sampling in Multi-dimensional NMR Spectroscopy & Applications for Biological Systems”
  • 発表場所: Nagoya University, Aichi
  • 年月日: 2014-06-18 – 2014-06-19
• [学会発表] 高分子量蛋白質の立体構造解析に向けた新規SAILアミノ酸標識法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 宮ノ入洋平、武田光広、寺内勉、甲斐荘正恒
  • 学会等名: 第52回 NMR討論会
  • 発表場所: 石川県立音楽堂 〒920-0856 石川県金沢市昭和町20-1
• [備考] 名古屋大学大学院理学研究科附属構造生物学研究センター 甲斐荘グループ 研究業績
  • URL: http://str.bio.nagoya-u.ac.jp:8080/Plone/753265908358/753265908358/78147a76696d7e3e
• [備考] 名古屋大学大学院理学研究科生命理学専攻 論文紹介
  • URL: http://www.bio.nagoya-u.ac.jp/paper/23th.html
• [備考] 名古屋大学大学院理学研究科附属構造生物学研究センター 甲斐荘グループ 研究業績
  • URL: http://str.bio.nagoya-u.ac.jp:8080/Plone/753265908358/753265908358/78147a76696d7e3e
• [備考] 名古屋大学大学院理学研究科生命理学専攻 論文紹介
  • URL: http://www.bio.nagoya-u.ac.jp/paper/index.html