LC/MS/MSを用いたリゾリン脂質超高感度精密定量分析に関する研究

• 研究課題/領域番号: 25860021
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 物理系薬学
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 三枝 大輔 東北大学, 東北メディカル・メガバンク機構, 助教 (90545237)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2013年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: リゾリン脂質 / スフィンゴ脂質 / LC/MS/MS / レーザーマイクロダイセクション / ヒートスタビライザー / 微量組織切片 / 原子間力顕微鏡 / S1Pトランスポーター / 固相抽出カラム / ジルコニア / メタボローム解析

研究成果の概要

本研究の目的は、LC/MS/MSを用いる超高感度リゾリン脂質検出系を構築し、レーザーマイクロダイセクション(LMD) によって切り出された微量組織切片によるリゾリン脂質解析を実施することである。
初めに、分析カラムの最適化、カラムスイッチグ法の導入、流路の改善等のHPLC条件の最適化により、リゾリン脂質の検出限界を100倍程度向上させた。さらに、ヒートスタビライザーを用いLMD処理中における組織中リゾリン脂質の分解を抑制する条件を最適化し、構築した定量法を用い、マウス組織切片（肝臓及び脾臓）数百から数千細胞におけるリゾリン脂質の検出に成功し、組織分布局在を明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] Functional characterization of 10 CYP4A11 allelic variants to evaluate the effect of genotype on arachidonic acid ω-hydroxylation (2015)
  • 著者名/発表者名: Saito T, Honda M, Saigusa D, Suzuiki N, Tomioka Y, Hirasawa N, Hiratsuka M.
  • 雑誌名: Drug Metabal.& Pharmacokin 巻: 30 号: 1 ページ: 119
  • DOI: 10.1016/j.dmpk.2014.09.001
  • NAID: 50014415989
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Separation and quantification of 2-acyl-1-lysophospholipids and 1-acyl-2-lysophospholipids in biological samples by LC-MS/MS (2014)
  • 著者名/発表者名: Okudaira M, Inoue A, Shuto A, Nakanaga K, Kano K, Makide K, Saigusa D, Tomioka Y, Aoki J.
  • 雑誌名: J. Lipid Res. 巻: 55 号: 10 ページ: 2178
  • DOI: 10.1194/jlr.d048439
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Simultaneous Quantification of Sphingolipids in Small Quantities of Liver by LC-MS/MS (2014)
  • 著者名/発表者名: Okudaira M, Inoue A, Shuto A, Nakanaga K, Kano K, Makide K, Saigusa D, Tomioka Y and Aoki J
  • 雑誌名: Mass Spectrometry 巻: 3 号: Special_Issue_3 ページ: S0046-S0046
  • DOI: 10.5702/massspectrometry.S0046
  • NAID: 130004972834
  • ISSN: 2186-5116, 2187-137X
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Overexpression of autotaxin, a lysophosphatidic acid-producing enzyme, enhances cardia bifida induced by hypo-sphingosine-1-phosphate signaling in zebrafish embryo (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakanaga K, Hama K, Kano K, Sato T, Yukiura H, Inoue A, Saigusa D, Tokuyama H, Tomioka Y, Nishina H, Kawahara A, Aoki J
  • 雑誌名: J. Biochem 巻: 155 号: 4 ページ: 235
  • DOI: 10.1093/jb/mvt114
  • NAID: 40020035029
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Transcription repressor Bach2 is required for pulmonary surfactant homeostasis and alveolar macrophage function (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakamura A, Ebina-Shibuya R, Itoh-Nakadai A, Muto A, Shima H, Saigusa D, Aoki J, Ebina M, Nukiwa T, Igarashi K.
  • 雑誌名: J Exp Med. 巻: 210 号: 11 ページ: 2191
  • DOI: 10.1084/jem.20130028
  • 査読あり
• [雑誌論文] Indoxyl Sulfate Down-Regulates SLCO4C1 Transporter through Up-Regulation of GATA3 (2013)
  • 著者名/発表者名: Akiyama Y, Kikuchi K, Saigusa D, Suzuki T, Takeuchi Y, Mishima E, Yamamoto Y, Ishida A, Sugawara D, Jinno D, Shima H, Toyohara T, Suzuki C, Souma T, Moriguchi T, Tomioka Y, Ito S, Abe T.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8 号: 7 ページ: e66518-e66518
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0066518
  • 査読あり
• [学会発表] LC-MSによる微量組織切片中リゾリン脂質の分析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 三枝大輔、奥平倫世、Wang Jiao、可野邦行、Baassanjav Uranbileg、蔵野信、池田均、 矢富裕、青木淳賢、本橋ほづみ
  • 学会等名: 日本薬学会 第135年会
  • 発表場所: 神戸 神戸学院大学
  • 年月日: 2015-03-25 – 2015-03-28
• [学会発表] Simultaneous quantification of sphingolipids in small quantities of tissue by LC-MS/MS (2015)
  • 著者名/発表者名: Daisuke Saigusa, Michiyo Okudaira, Jiao Wang, Kuniyuki Kano, Makoto Kurano, Baasanjav Uranbileg, Hitoshi Ikeda, Yutaka Yatomi, Hozumi Motohashi, and Junken Aoki
  • 学会等名: PLM2015
  • 発表場所: Tokyo Keio Plaza Hotel
  • 年月日: 2015-02-10 – 2015-02-12
• [学会発表] LC-MS/MSによる生体試料を用いた超高感度標的リピドミクス解析手法の構築 (2014)
  • 著者名/発表者名: 三枝大輔・奥平倫世・井上飛鳥・青木淳賢・五十嵐和彦
  • 学会等名: 第62回質量分析総合討論会
  • 発表場所: 大阪 ホテル阪急エクスポパーク
  • 年月日: 2014-05-14 – 2014-05-16
• [学会発表] LC/MSによる分離技術を基盤とした高感度メタボローム解析手法の開発と臨床応用に関する研究 (2014)
  • 著者名/発表者名: 三枝大輔
  • 学会等名: 第41回BMSコンファレンス
  • 発表場所: 能登ロイヤルホテル（石川県羽咋郡）
  • 招待講演
• [学会発表] LC-MS/MS による生体試料を用いた超高感度標的リピドミクス解析手法の構築 (2014)
  • 著者名/発表者名: 三枝大輔、奥平倫世、井上飛鳥、青木淳賢、五十嵐和彦
  • 学会等名: 第62回質量分析総合討論会
  • 発表場所: ホテル阪急エキスポパーク（大阪府吹田市）
• [学会発表] 抗1-methyladenosine抗体反応性分子の同定を目的としたtRNA分子種の解析法に関する研究 (2014)
  • 著者名/発表者名: 津久井佑梨、陣野大輔、三島英喚、鈴木直人、塚本宏樹、三枝大輔、伊藤邦彦、阿部高明、富岡佳久
  • 学会等名: 日本薬学会第134年会
  • 発表場所: 熊本
• [学会発表] リコカルコンＡのCOX-1活性抑制メカニズムの解明 (2014)
  • 著者名/発表者名: 菅原大貴、田代 匠、三枝大輔、塚本宏樹、奥田亜沙、小原祐太郎、鈴木直人、富岡佳久
  • 学会等名: 日本薬学会第134年会
  • 発表場所: 熊本
• [学会発表] 11種のCYP4A11および3種のCYP4F2遺伝子多型バリアントにおける酵素活性変化 (2014)
  • 著者名/発表者名: 齊藤雄大、三枝大輔、鈴木直人、富岡佳久、平澤典保、平塚真弘
  • 学会等名: 日本薬学会第134年会
  • 発表場所: 熊本
• [学会発表] TOHOKU MEDICAL MEGABANK PROJECT AND TARGETED METABOLOMICS (2013)
  • 著者名/発表者名: Daisuke Saigusa
  • 学会等名: Translating Omics Science into Clinical Applications conference (TOSCA‘13)
  • 発表場所: 香港、中国
  • 招待講演
• [学会発表] LC/MSによる臨床検体のハイスループット解析-非標的及び標的メタボローム解析手法構築- (2013)
  • 著者名/発表者名: 三枝大輔
  • 学会等名: 第8回メタボロームシンポジウム
  • 発表場所: 福岡
  • 招待講演
• [学会発表] LysoPSの検出系の確立と生体内におけるLysoPSの検出 (2013)
  • 著者名/発表者名: 奥平倫世、井上飛鳥、三枝大輔、富岡佳久、巻出久美子、青木淳賢
  • 学会等名: 日本脂質生化学会
  • 発表場所: 仙台
• [学会発表] 新規腎障害マーカーとしての１－メチルアデノシンの検討
  • 著者名/発表者名: 陣野大輔、鈴木直人、津久井佑梨、三枝大輔、三島英換、鈴木千登世、塚本宏樹、阿部高明、富岡佳久
  • 学会等名: 第52回日本薬学会東北支部大会
  • 発表場所: 仙台
• [学会発表] TOHOKU MEDICAL MEGABANK PROJECT AND TARGETED METABOLOMICS
  • 著者名/発表者名: 三枝大輔、青木淳賢、富岡佳久、五十嵐和彦、 阿部高明
  • 学会等名: 第34回グアニジノ化合物研究会
  • 発表場所: 全国町村会館（東京都千代田区）
• [図書] 最新生理活性脂質研究－実験手法、基礎的知識とその応用－ (2013)
  • 著者名/発表者名: 富岡佳久、鈴木直人、三枝大輔
  • 出版者: メディカルドゥ