単鎖抗体の精密配向固定による反射干渉分光センサの超高感度化

• 研究課題/領域番号: 26420795
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物機能・バイオプロセス
• 研究機関: 京都工芸繊維大学
• 研究代表者: 熊田 陽一 京都工芸繊維大学, 分子化学系, 准教授 (70452373)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2016年度)
• 配分額: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円); 2016年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2015年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2014年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
• キーワード: SiN / SiN-tag / antibody / GST / immobilization / orientation control / 窒化ケイ素 / 単鎖抗体 / 材料親和性ペプチド / 配向制御 / リフォールディング / 固定化 / バイオセンサ

研究成果の概要

本研究では、反射干渉分光センサの高感度化のために、SiN基板上に高密度かつ高活性に固定化可能なタグ付き単鎖抗体の開発を行った。大腸菌由来Elongation Factor Tuから生成するペプチド断片の中に、SiNに対して強く吸着する複数のペプチド断片を獲得し、これらをSiN親和性ペプチドタグ（SiN-tag)とした。SiN-tagを導入したグルタチオンSトランスフェラーゼはSiN基板上において高密度に固定化可能であった。さらに、SiN-tag融合単鎖抗体の安価な生産技術を確立するとともに、RIfSセンサ上で抗原分子を高感度に検出ことに成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Identification and characterization of polydimethylsiloxane-binding peptides (PDMS-tag) for oriented immobilization of functional protein on a PDMS surface. (2016)
  • 著者名/発表者名: Y. Kumada, R. Otsuki, Y. Sakoda, R. Akai, K. Matoba, J. Katayama, M. Kishimoto, J. Horiuchi,
  • 雑誌名: J. Biotechnol. 巻: 236 ページ: 193-198
  • DOI: 10.1016/j.jbiotec.2016.08.005
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] 1.Efficient preparation and site-directed immobilization of VHH antibodies by genetic fusion of poly(methylmethacrylate)-binding peptide (PMMA-tag). (2015)
  • 著者名/発表者名: Kumada Y, Kang B, Yamakawa K, Kishimoto M, Horiuchi JI
  • 雑誌名: Biotechnology Progress 巻: 31 号: 6 ページ: 1563-1570
  • DOI: 10.1002/btpr.2169
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] 組換え大腸菌を用いた活性型一本鎖抗体の高効率分泌生産 (2015)
  • 著者名/発表者名: 李歓・岸本通雅・堀内淳一・熊田陽一
  • 学会等名: 化学工学会 秋季大会
  • 発表場所: 北海道・札幌市
  • 年月日: 2015-09-09