放線菌由来強発現プロモーターSCMPの機能解析とその応用

• 研究課題/領域番号: 26420805
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物機能・バイオプロセス
• 研究機関: 岡山県農林水産総合センター生物科学研究所
• 研究代表者: 畑中 唯史 岡山県農林水産総合センター生物科学研究所, その他部局等, 専門研究員 (00344408)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2016年度)
• 配分額: 4,940千円 (直接経費: 3,800千円、間接経費: 1,140千円); 2016年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2015年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2014年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
• キーワード: 放線菌 / ストレプトマイセス / プロモーター

研究成果の概要

SCMPプロモーター全長、前半領域、後半領域下流に、放線菌由来分泌型ロイシンアミノペプチダーゼを挿入した発現ベクターを作成し、S. lividans 1326株を宿主に用い、分泌されたアミノペプチダーゼ活性の変動を検討した。その結果、5’側には転写活性はなく、3’側63塩基対を用いた場合、大幅に発現量が増加することを見出した。また、この領域のみを用いると、培地成分の制限も解除されることが判明した。

研究成果

• [雑誌論文] Molecular insights into the thermal stability mechanism of actinomycete mannanase (2016)
  • 著者名/発表者名: Kumagai, Y., Uraji, M., Wan, K., Okuyama, M., Kimura, A., and Hatanaka, T.
  • 雑誌名: FEBS Letters 巻: 590 号: 17 ページ: 2862-2869
  • DOI: 10.1002/1873-3468.12322
  • 査読あり
• [雑誌論文] The loop structure of Actinomycete glycoside hydrolase family 5 mannanases governs the substrate recognition (2015)
  • 著者名/発表者名: Y. Kumagai, K. Yamashita, T. Tagami, M. Uraji, K. Wan, M. Okuyama,
  • 雑誌名: FEBS J 巻: 282 ページ: 4001-4014
  • 査読あり
• [雑誌論文] Anti-oxidation Activities of Rice-Derived Peptides and Their Inhibitory Effects on Dipeptidylpeptidase-IV (2015)
  • 著者名/発表者名: T. Hatanaka, M. Uraji, A. Fujita and K. Kawakami
  • 雑誌名: Int. J. Pep. Res. Ther. 巻: 21 ページ: 479-485
  • 査読あり
• [雑誌論文] Application of two newly identified and characterized feruloyl esterases from Streptomyces sp. in the enzymatic production of ferulic acid from agricultural biomass (2014)
  • 著者名/発表者名: M. Uraji, J. Arima, Y. Inoue, K. Harazono and T. Hatanaka
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 9(8)
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 放線菌メタロプロテアーゼSCMPプロモーターの5’領域の欠失はタンパク質生産性の向上をもたらす (2017)
  • 著者名/発表者名: 裏地美杉、万クン、畑中唯史
  • 学会等名: 日本農芸化学会２０１７年度大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2017-03-17
• [学会発表] Relationship between enzyme activity and structure of Streptomyces feruloyl esterase (2016)
  • 著者名/発表者名: M. Uraji, I. H. Tamura, E. Mizohata, K. Wan, K. Ogawa, T. Inoue, T. Hatanaka
  • 学会等名: International Biotechnology Symposium (IBS) 2016
  • 発表場所: メルボルン、オーストラリア
  • 年月日: 2016-10-24
  • 国際学会
• [学会発表] 放線菌Streptomyces cinnamoneus TH-2株由来新規メタロアミノペプチダーゼの性状解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: ○万クン、裏地美杉、畑中唯史
  • 学会等名: 日本農芸化学会２０１６年度大会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2016-03-27
• [学会発表] 放線菌由来フェルラ酸エステラーゼの活性と構造の関わり (2016)
  • 著者名/発表者名: ○裏地美杉、田村はるか、溝端栄一、万クン、小川健一、井上豪、畑中唯史
  • 学会等名: 日本農芸化学会２０１６年度大会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2016-03-27
• [学会発表] Sequence-based screening and characterization of secreted exopeptidases from Streptomyces cinnamoneus TH-2 (2015)
  • 著者名/発表者名: K. Wan, M. Uraji, ○T. Hatanaka
  • 学会等名: Asian Congress on Biotechnology (ACB-2015)
  • 発表場所: クアラルンプール
  • 年月日: 2015-11-15
• [学会発表] Characterization of feruloyl esterase activity attached to methyl esterase3 protein in Arabiodpsis (2015)
  • 著者名/発表者名: ○M. Uraji, I. Mori, N. Tamura, K. Wan, T. Hatanaka
  • 学会等名: Asian Congress on Biotechnology (ACB-2015)
  • 発表場所: クアラルンプール
  • 年月日: 2015-11-15
• [学会発表] 網羅的発現解析手法（HiCEP）法と次世代シーケンサーの組み合わせによる遺伝子発現データベースの構築 (2015)
  • 著者名/発表者名: 裏地美杉、湯野川春信、万クン、○畑中唯史
  • 学会等名: 第67回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2015-10-26
• [学会発表] 放線菌メタロプロテアーゼプロモーターの解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: ○裏地美杉、万クン、畑中唯史
  • 学会等名: 第67回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2015-10-26
• [学会発表] 放線菌Streptomyces cinnamoneus TH-2株由来新規メタロカルボキシペプチダーゼの性状解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: ○万クン、裏地美杉、畑中唯史
  • 学会等名: 第67回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2015-10-26
• [学会発表] 次世代シーケンサーと網羅的発現解析手法（HiCEP）法の組み合わせによる遺伝子発現データベースの構築 (2015)
  • 著者名/発表者名: 裏地美杉、湯野川春信、万クン、○畑中唯史
  • 学会等名: 日本放線菌学会2015年度（第30回）大会
  • 発表場所: 富山
  • 年月日: 2015-09-07
• [学会発表] 網羅的発現解析手法（HiCEP法）の原核生物への応用 (2015)
  • 著者名/発表者名: 裏地美杉、湯野川春信、砂山美里、荒木良子、万クン、○畑中唯史
  • 学会等名: 日本農芸化学会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2015-03-26 – 2015-03-29
• [学会発表] HiCEP法と次世代シーケンサーによる遺伝子発現データベースの構築 (2015)
  • 著者名/発表者名: ○湯野川春信、砂山美里、荒木良子、裏地美杉、畑中唯史
  • 学会等名: 日本農芸化学会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2015-03-26 – 2015-03-29
• [備考] 岡山県農林水産総合センター生物科学研究所
  • URL: http://www.pref.okayama.jp/soshiki/203/
• [産業財産権] 新規カルボキシペプチダーゼ (2015)
  • 発明者名: 原園 幸一、畑中 唯史、万 クン
  • 権利者名: ナガセケムテックス
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 2015-119480
  • 出願年月日: 2015-06-12
• [産業財産権] 新規アミノペプチダーゼ (2015)
  • 発明者名: 原園 幸一、畑中 唯史、万 クン
  • 権利者名: ナガセケムテックス
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 2015-119481
  • 出願年月日: 2015-06-12