データベース化を目指したヒトメラノーマMitf-M特異的分子標的療法の開発

• 研究課題/領域番号: 26461698
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 皮膚科学
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 中井 章淳 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (80453108)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 中途終了 (2015年度)
• 配分額: 4,940千円 (直接経費: 3,800千円、間接経費: 1,140千円); 2016年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2015年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円); 2014年度: 2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
• キーワード: メラノーマ / 分子治療

研究実績の概要

平成26年度では、CRISPR/Cas9システムを用いてMitfをノックアウトしたところ、ヒトメラノーマの細胞株によっては抗腫瘍効果の得られる可能性が示唆された。平成27年度では、CRISPR/Cas9-Mitfの導入効率と遺伝子発現抑制効果をさらに高めるため、レンチウイルスによりCas9およびguideRNAを発現させるCRISPR/Cas9システムを用いて、ヒトMitfのvariant4を標的としたplasmid(p)Lenti CRISPR/Cas9-Mitfを合成した。In vitroにおいて、pLenti CRISPR/Cas9-Mitfを電気穿孔法でヒトメラノーマ細胞株HMV-IIに導入したところ、コントロール群の8.2%までmRNAレベルでのMitfの発現が抑制された。pLenti CRISPR/Cas9-Mitfを導入したHMV-II群とコントロールHMV-II群において、細胞数と細胞ヴァイアビリティを観察したところ、96時間後では共に有意差(P<0.05）が得られ、pLenti CRISPR/Cas9-Mitfによる細胞増殖抑制効果が確認された。次に、pLenti CRISPR/Cas9-Mitfを導入したHMV-II群とコントロールHMV-II群からRNAを調整し、mRNAレベルでの遺伝子発現を比較検討したところ、Mitf、RIGI、IFN-beta、SOX2、SOX9、STAT1、STAT2、CXCR、c-Myc、CCR1、Hsp70、MDA5、GATA4、Rac1、TFAP2A、TP53、MTUS1、ID2、RUNX1において有意差が得られた。次いで、pLenti CRISPR/Cas9-Mitfを導入したHMV-IIとコントロールHMV-IIを免疫不全マウスに皮下移植して腫瘍の増殖程度を比較したが、両群に有意差はみられなかった。これらの結果から、ヒトメラノーマHMV-IIにおいてMitf遺伝子をノックアウトすると、in vitroでは癌関連遺伝子や種々の遺伝子の発現が抑制され、その結果として細胞増殖抑制効果が得られたと推察された。しかしin vivoでは腫瘍増殖抑制効果はみられなかった。その原因としては、腫瘍を取り巻く環境（血管、神経、膠原線維や弾性線維など）が、腫瘍の増殖を促進させる何らかの影響を与えている可能性があると推察された。

研究成果

• [雑誌論文] Reticulate acropigmentation of Kitamura with a novel ADAM10 mutation: a case report. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tsutsumi M, Kono M, Akiyama M, Katoh N, Nakai N.
  • 雑誌名: J Dermatol 巻: - 号: 8 ページ: 1-2
  • DOI: 10.1111/1346-8138.13308
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Histology Resembling Cutaneous T-Cell Lymphoma in Nodular Scabies: A Case Report. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kataoka Y, Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: 61 号: 1 ページ: 125-5
  • DOI: 10.4103/0019-5154.174188
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] MAGIC Syndrome (Mouth and Genital Ulcers with Inflamed Cartilage): Case Report and Review of the Published Work. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kaneko Y, Nakai N, Kida T, Kawahito Y, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: in press ページ: 1-3
  • 査読あり
• [雑誌論文] Multiple Fixed Drug Eruption Caused by Promethazine Methylenedisalicylate as One of the Components of PL Combination Granules (2016)
  • 著者名/発表者名: Hotta E, Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: in press ページ: 1-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] Acute generalized exanthematous pustulosis caused by dihydrocodeine phosphate in a psoriasis vulgaris patient with a heterozygous IL36RN mutation (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Sugiura K, Akiyama M, Katoh N
  • 雑誌名: JAMA Dermatol 巻: 151 号: 3 ページ: 311-315
  • DOI: 10.1001/jamadermatol.2014.3002
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Clinical usefulness of Mohs' chemosurgery for palliative purposes in patients with cutaneous squamous cell carcinoma with risk factors or without indication for surgery: three case reports. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Okuzawa Y, Katoh N.
  • 雑誌名: J Dermatol. 巻: 42 号: 4 ページ: 405-7
  • DOI: 10.1111/1346-8138.12767
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Melanoma arising from the epidermis overlying an acquired intradermal nevus on the forehead. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol Venereol Leprol. 巻: 81 号: 5 ページ: 533-5
  • DOI: 10.4103/0378-6323.158653
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A Case of Inflammatory Linear Verrucous Epidermal Nevus on the Upper Eyelid. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Ohshita A, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: 60 号: 3 ページ: 323-3
  • DOI: 10.4103/0019-5154.156462
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A Case of Gloves and Socks Syndrome and Related Eruptions Caused by Coxsackievirus A4 Infection Mimicking Adult-onset Still's Disease. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohshita A, Nakai N, Katoh N, Konishi K.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: 60 号: 3 ページ: 324-4
  • DOI: 10.4103/0019-5154.156472
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Persistent pruritic eruptions in adult-onset Still's disease: additional histopathological findings. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hotta E, Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Acta Dermatovenerol Croat. 巻: 23 ページ: 146-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A case of fixed drug eruption caused by loxoprofen sodium hydrate (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Allergology International 巻: 64 号: 4 ページ: 377-378
  • DOI: 10.1016/j.alit.2015.04.007
  • NAID: 130005290279
  • ISSN: 1323-8930, 1440-1592
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Severe adult atopic dermatitis successfully treated with concurrent Unseiin and standard treatment (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Traditional & Kampo Medicine 巻: 2 号: 1 ページ: 23-6
  • DOI: 10.1002/tkm2.1011
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Anti-tumor effect of Japanese herbal medicine Ninjinto in mouse melanoma: Efficacy of preventive treatment (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Kishida T, Katoh N
  • 雑誌名: Traditional & Kampo Medicine 巻: 2 号: 1 ページ: 14-22
  • DOI: 10.1002/tkm2.1010
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Adult T-cell Lymphoma Complicated with Epidermodysplasia Verruciformis-like Eruptions. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Ohshita A, Kuroda J, Katoh N.
  • 雑誌名: Acta Dermatovenerol Croat. 巻: 23 ページ: 304-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Atypical case of juvenile spring eruption with photosensitivity to a single dose of ultraviolet A irradiation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohshita A, Nakai N, Katoh N, Konishi K.
  • 雑誌名: J Dermatol. 巻: 41 号: 4 ページ: 356-7
  • DOI: 10.1111/1346-8138.12421
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A case of cutaneous squamous cell carcinoma arising in an actinic keratosis on the face in a centenarian woman successfully treated with surgery. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamazato S, Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: 59 号: 3 ページ: 304-6
  • DOI: 10.4103/0019-5154.131425
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Nodular primary localized cutaneous amyloidosis in a patient with pulmonary sarcoidosis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Ozawa A, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: 59 号: 3 ページ: 307-8
  • DOI: 10.4103/0019-5154.131430
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Maculopapular-Type Drug Eruption Caused by Sitagliptin Phosphate Hydrate: A Case Report and Mini-Review of the Published Work (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Allergology International 巻: 63 号: 3 ページ: 489-491
  • DOI: 10.2332/allergolint.13-LE-0669
  • NAID: 130004687701
  • ISSN: 1323-8930, 1440-1592
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Paraneoplastic dermatomyositis associated with gallbladder carcinoma: a case report and mini-review of the published work. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sawada T, Nakai N, Masuda K, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: 59 号: 6 ページ: 615-6
  • DOI: 10.4103/0019-5154.143543
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Multiple fungal infection in a patient on chronic low dose corticotherapy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamazato S, Nakai N, Katoh N.
  • 雑誌名: Indian J Dermatol. 巻: 59 号: 6 ページ: 636-636
  • DOI: 10.4103/0019-5154.143605
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] フルニエ壊疽の2例 (2015)
  • 著者名/発表者名: 中川弘己、戸瀬彩加、横瀬千美、若林祐輔、金久史尚、浅井 純、中井章淳、竹中秀也、加藤則人
  • 学会等名: 日本皮膚科学会第442回京滋地方会
  • 発表場所: 大津市
  • 年月日: 2015-09-19
• [学会発表] ブロモワレリル尿素によるアナフィラキシーの１例 (2015)
  • 著者名/発表者名: 田浦麻衣子、山里志穂、金久史尚、田嶋佐妃、中井章淳、浅井 純、益田浩司、加藤則人
  • 学会等名: 日本皮膚科学会第442回京滋地方会
  • 発表場所: 大津市
  • 年月日: 2015-09-19
• [学会発表] 網状肢端色素沈着症の１例 (2015)
  • 著者名/発表者名: 堤 美穂、中井章淳、加藤則人、河野通浩
  • 学会等名: 日本皮膚科学会第440回京滋地方会
  • 発表場所: 京都市
  • 年月日: 2015-06-06
• [学会発表] 両手に多発したReticulohistiocytic Granulomaの1例. (2015)
  • 著者名/発表者名: 上田有希子、中井章淳、加藤則人.
  • 学会等名: 第78回日本皮膚科学会東京支部学術大会.
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-02-21 – 2015-02-22
• [学会発表] ワンピースに使用された染料による接触皮膚炎の1例. (2014)
  • 著者名/発表者名: 田恵理、峠岡理沙、中井章淳、益田浩司、佐々木和実、加藤則人.
  • 学会等名: 第44回日本皮膚アレルギー・接触皮膚炎学会総会学術大会.
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2014-11-21 – 2014-11-23
• [図書] エキスパートが答える！アトピー性皮膚炎Q&A 55．加藤則人（編） (2014)
  • 著者名/発表者名: 中井章淳(分担執筆）
  • 総ページ数: 2
  • 出版者: 診断と治療社