γ-セクレターゼ非依存的なβAPP膜内切断機構の解析

• 研究課題/領域番号: 26461745
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 精神神経科学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 柳田 寛太 大阪大学, 医学系研究科, 特任研究員(常勤) (70467596)
• 研究分担者: 田上 真次 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (40362735) ; 大河内 正康 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (90335357)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円); 2016年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2015年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: アルツハイマー病 / γ-セクレターゼ / CRISPR/CAS9 / アミロイド / γ‐セクレターゼ

研究成果の概要

γ-セクレターゼ非依存的なアミロイドβ前駆タンパク（βAPP）の膜内切断機構を調べるため、CRISPR/Cas9法でプレセニリン1と2をダブルノックアウトした細胞を作製した。この細胞に様々なプロテアーゼ阻害剤を作用させ、βAPPが膜内で分解されたときに生成すると考えられるオリゴペプチドを質量分析装置で定量した。その結果、リソソーム酵素阻害剤のクロロキンで8種類の3アミノ酸のペプチドが減少していた。これらのペプチドはリソソームの主要なプロテアーゼであるカテプシンの阻害剤では減少しない事から、タンパクを3アミノ酸ずつ切断するトリペプチジルペプチダーゼ1によって生成していることが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Semagacestat Is a Pseudo-Inhibitor of γ-Secretase (2017)
  • 著者名/発表者名: Tagami S, Yanagida K, Kodama TS, Takami M, Mizuta N, Oyama H, Nishitomi K, Chiu YW, Okamoto T, Ikeuchi T, Sakaguchi G, Kudo T, Matsuura Y, Fukumori A, Takeda M, Ihara Y, Okochi M.
  • 雑誌名: Cell Rep 巻: 21 号: 1 ページ: 259-273
  • DOI: 10.1016/j.celrep.2017.09.032
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] CRISPR/CAS9法によるPresenilin1/Presenilin2ダブルノックアウト細胞の作製 (2015)
  • 著者名/発表者名: 柳田寛太
  • 学会等名: 第34回日本認知症学会学術集会
  • 発表場所: リンクステーションホール青森
  • 年月日: 2015-10-03
• [学会発表] γセクレターゼの阻害と促進 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大河内正康
  • 学会等名: 第33回日本認知症学会学術集会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-11-30