| 研究課題/領域番号 |
26560111
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| 研究種目 |
挑戦的萌芽研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 研究分野 |
科学教育
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| 研究機関 | 国立研究開発法人農業生物資源研究所 |
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研究代表者 |
渡辺 裕文 国立研究開発法人農業生物資源研究所, 昆虫機能研究開発ユニット, 上級研究員 (10355745)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| 研究課題ステータス |
中途終了 (2015年度)
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| 配分額 *注記 |
3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
2016年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2015年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
2014年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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| キーワード | シロアリ / 唾液腺 / セルラーゼ / 無細胞発現系 / 遺伝子組換え / 組換え生産 / 体験 / ウサギ網状赤血球 / ｃDNA |
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| 研究実績の概要 |
ヤマトシロアリ(Reticulitermes speratus)ワーカーを材料として唾液腺セルラーゼの無細胞発現系を構築した。すなわちヤマトシロアリワーカー（働きアリ）全虫体よりオリゴｄTセルロースによるアフィニティ法によりｍRNAを精製し、これを鋳型として第１アンカー配列を5’端に接続したオリゴｄTプライマーと第２アンカー配列を5’端に接続したスイッチングテンプレートを加えたMMLV由来逆転写酵素系によるfirst strand cDNA合成をおこなう。得られたｍRNAを鋳型としてヤマトシロアリ唾液腺セルラーゼ（GenBank AB008778）の成熟タンパクゴード領域のN末端に特異的塩基配列の5’端にウサギ網状赤血球無細胞発現系での発現に必要な転写開始配列を加えたプライマーおよびC末端特異的塩基配列および終止コドンの相補配列によるプライマー間で唾液腺セルラーゼｃDNAを特異的に増幅し、それを鋳型としてウサギ網状赤血球無細胞系でヤマトシロアリ唾液腺セルラーゼが発現する系を構築した。唾液腺セルラーゼの発現はシロアリ内源性セルラーゼに特異的な抗血清による免疫反応とセルラーゼ活性の両方で確認した。（以上平成２６年度研究成果、２７年度は研究費の申請自粛、２８年度は研究課題の廃止により実施していない）
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