コムギ無細胞産生抗原を用いたサメナノボディ作成の基盤技術開発

• 研究課題/領域番号: 26640130
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: システムゲノム科学
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 澤崎 達也 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 教授 (50314969)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円); 2015年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: ナノボディ / 無細胞 / サメ / 抗体 / ドチザメ / 免疫 / 蛋白質 / トランスクリプトーム / 鮫 / 無細胞タンパク質合成

研究成果の概要

我々は、松山沖の伊予灘において、ドチザメ科に属する３種類のドチザメ類サメが十分量、実験材料として利用できることがわかった。それらのドチザメ類の飼育・免疫条件を明らかにし、採血法の至適化を行った。また、免疫したドチザメ類を他のドチザメと区別できる様にするために蛍光物質を皮下注射する標識法を見出した。ドチザメ類の全血からRNAを抽出する手法を確立し、得られたトータルRNAを用いたHiSeq1500でのwhole transcriptome解析を行い、3種のドチザメ類のナノボディをコードするIgNAR遺伝子配列を同定することに成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of RyDEN (C19orf66) as an interferon-stimulated cellular inhibitor against dengue virus replication. (2016)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Y, Chin WX, Han Q, Ichiyama K, Lee CH, Eyo ZW, Ebina H, Takahashi H, Takahashi C, Tan BH, Hishiki T, Ohba K, Matsuyama T, Koyanagi Y, Tan YJ, Sawasaki T, Chu1 JJ, Vasudevan SG, Sano K, Yamamoto N.
  • 雑誌名: PLoS Pathogen 巻: 12 号: 1 ページ: 275-275
  • DOI: 10.1186/s12870-015-0660-9
  • NAID: 120005763386
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] 無細胞技術を基盤とした抗GPCRモノクローナル抗体作製技術の開発 (2016)
  • 著者名/発表者名: 竹田浩之、澤崎達也
  • 雑誌名: BioIndustry 巻: 33 ページ: 56-62
• [雑誌論文] Production of monoclonal antibodies against GPCR using cell-free synthesized GPCR antigen and biotinylated liposome-based interaction assay (2015)
  • 著者名/発表者名: Takeda H, Ogasawara T, Ozawa T, Muraguchi A, Jih PJ, Morishita R, Uchigashima M, Watanabe M, Fujimoto T, Iwasaki T, Endo Y, Sawasaki T
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 5 号: 1 ページ: 11333-11333
  • DOI: 10.1038/srep11333
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Members of the Plant CRK-superfamily are Capable of trans-/auto-Phosphorylation of Tyrosine Residues. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nemoto K, Takemori N, Seki M, Shinozaki K, Sawasaki T.
  • 雑誌名: The Journal of Biological Chemistry 巻: 290 号: 27 ページ: 16665-16677
  • DOI: 10.1074/jbc.m114.617274
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] High-throughput synthesis of stable isotope-labeled transmembrane proteins for targeted transmembrane proteomics using a wheat germ cell-free protein synthesis system. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takemori N, Takemori A, Matsuoka K, Morishita R, Matsushita N, Aoshima M, Takeda H, Sawasaki T, Endo Y, Higashiyama S.
  • 雑誌名: Mol Biosyst. 巻: 11 号: 2 ページ: 361-365
  • DOI: 10.1039/c4mb00556b
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] MAPK Phosphatase 5 Expression Induced by Influenza and Other RNA Virus Infection Negatively Regulates IRF3 Activation and Type I Interferon Response. (2015)
  • 著者名/発表者名: James SJ, Jiao H, Teh HY, Takahashi H, Png CW, Phoon MC, Suzuki Y, Sawasaki T, Xiao H, Chow VT, Yamamoto N, Reynolds JM, Flavell RA, Dong C, Zhang Y.
  • 雑誌名: Cell Rep. 巻: 10 号: 10 ページ: 1722-1734
  • DOI: 10.1016/j.celrep.2015.02.030
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] In situ visualization of plasma cells producing antibodies reactive to Porphyromonas gingivalis in periodontitis: The application of the enzyme-labeled antigen method. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mizutani Y, Tsuge S, Takeda H, Hasegawa Y, Shiogama K, Onouchi T, Inada KI, Sawasaki T, Tsutsumi Y.
  • 雑誌名: Molecular Oral Microbiology 巻: In press 号: 4 ページ: 156-173
  • DOI: 10.1111/omi.12052
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Involvement of Hepatitis C Virus NS5A Hyperphosphorylation Mediated by Casein Kinase I-α in Infectious Virus Production. (2014)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Matsunaga S, Takahashi H, Nakashima K, Kimura Y, Ito M, Matsuda M, Murayama A, Kato T, Hirano H, Endo Y, Lemon SM, Wakita T, Sawasaki T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Virol 巻: 88(13) 号: 13 ページ: 7541-55
  • DOI: 10.1128/jvi.03170-13
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Pctaire1/Cdk16 promotes skeletal myogenesis by inducing myoblast migration and fusion. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shimizu K, Uematsu A, Imai Y, Sawasaki T.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 巻: 588 号: 17 ページ: 3030-3037
  • DOI: 10.1016/j.febslet.2014.05.060
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] creenCap3: Improving prediction of caspase-3 cleavage sites using experimentally verified noncleavage sites. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fu SC, Imai K, Sawasaki T, Tomii K.
  • 雑誌名: Proteomics. 巻: 14 号: 17-18 ページ: 2042-2046
  • DOI: 10.1002/pmic.201400002
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of RFPL3 protein as a novel E3 ubiquitin ligase modulating the integration activity of human immunodeficiency virus, type 1 preintegration complex using a microtiter plate-based assay. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tan BH, Suzuki Y, Takahashi H, Ying PH, Takahashi C, Han Q, Chin WX, Chao SH, Sawasaki T, Yamamoto N, Suzuki Y.
  • 雑誌名: J Biol Chem. 巻: 289 号: 38 ページ: 26368-26382
  • DOI: 10.1074/jbc.m114.561662
  • 査読あり
• [雑誌論文] The apoptotic initiator caspase-8: its functional ubiquity and genetic diversity during animal evolution. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sakamaki K, Shimizu K, Iwata H, Imai K, Satou Y, Funayama N, Nozaki M, Yajima M, Nishimura O, Higuchi M, Chiba K, Yoshimoto M, Kimura H, Gracey AY, Shimizu T, Tomii K, Gotoh O, Akasaka K, Sawasaki T, Miller DJ.
  • 雑誌名: Mol Biol Evol. 巻: 31 号: 12 ページ: 3282-3301
  • DOI: 10.1093/molbev/msu260
  • 査読あり
• [雑誌論文] Overexpression of the PAP1 transcription factor reveals a complex regulation of flavonoid and phenylpropanoid metabolism in Nicotiana tabacum plants attacked by Spodoptera litura. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mitsunami T., Nishihara M., Galis I., Alamgir K.M., Hojo Y., Fujita K., Sasaki N., Nemoto K., Sawasaki T., Arimura G.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9 号: 9 ページ: e108849-e108849
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0108849
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The ligand binding ability of dopamine D1 receptors synthesized using a wheat germ cell-free protein synthesis system with liposomes. (2014)
  • 著者名/発表者名: Arimitsu E, Ogasawara T, Takeda H, Sawasaki T, Ikeda Y, Hiasa Y, Maeyama K.
  • 雑誌名: Eur J Pharmacol. 巻: 745 ページ: 117-122
  • DOI: 10.1016/j.ejphar.2014.10.011
  • 査読あり
• [学会発表] 抗膜タンパク質ウサギ高親和性モノクローナル抗体のエピトープ配列を由来とする新規アフィニティタグの開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 矢野 智也, 竹田 浩之, 小澤 龍彦, 村口 篤, 澤崎 達也
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会 合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] 患者血清中の自己抗体を指標とした新規乳がん診断マーカーの開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 松本 彩香, 竹田 浩之, 宮城 洋平, 澤崎 達也
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会 合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] 大規模生化学的解析はバイオインフォマティクス解析を凌駕するか？ (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 産総研・東京大学合同 創薬等支援技術基盤プラットフォーム(PDIS)ワークショップ ～実験とバイオインフォマティクスの協奏による構造生命科学～
  • 発表場所: 産総研臨海副都心センター別館（東京都江東区）
  • 年月日: 2014-12-18
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞技術を基盤とした化合物スクリーニング (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞HTSを用いた創薬基盤技術 (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都国際会議場（京都府京都市）
  • 年月日: 2014-10-15 – 2014-10-18
  • 招待講演
• [学会発表] 無細胞技術を基盤とした自己抗体探索によるアンチエイジング医学のブレークスルーをめざして (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第14回 日本抗加齢医学会総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2014-06-06 – 2014-06-08
  • 招待講演
• [学会発表] GPCR研究のためのコムギ無細胞系プロテオリポソーム技術 (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第１１回GPCR研究会
  • 発表場所: 日本科学未来館 みらいCANホール（東京都江東区）
  • 年月日: 2014-05-09 – 2014-05-10
  • 招待講演
• [備考] CELL-FREE Technology
  • URL: http://www.pros.ehime-u.ac.jp/cell-free/