人工ヌクレアーゼTALENを用いた遺伝子ノックアウトマダニ感染症モデルの作出

• 研究課題/領域番号: 26660229
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 獣医学
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 田仲 哲也 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 准教授 (00322842)
• 連携研究者: 望月 雅美 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 教授 (90157834)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円); 2015年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2014年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円)
• キーワード: マダニ / マダニ細胞 / アクチンプロモータ－ / フェリチンプロモーター / CAGプロモーター / PGKプロモーター / ゲノム / プロモーター領域 / アクチン / チュブリン / ディフェンシン / PGK / フェリチン / 昆虫細胞

研究成果の概要

マダニの遺伝子機能の解析ではRNA干渉法による遺伝子破壊が用いられてきたが、ノックアウトやトランスジェニックの技術は導入されていない。そこで、我々はこれらの技術を確立する基盤として遺伝子導入マダニ細胞の作製を行った。プラスミドのマダニ細胞のトランスフェクション効率では、pmiGLO並びにpCAGGS-Lucefearaseが高いルシフェラーゼ活性を示したが、フタトゲチマダニ由来である、アクチンプロモーター並びにフェリチンプロモーターのマダニ細胞でのルシフェラーゼ活性は低かった。将来的にはこれらの研究手法によって、遺伝子ノックアウトやトランスジェニックマダニ作製の突破口となる。

研究成果

• [雑誌論文] Course of induced infection by Eimeria krijgsmannni in immunocompetent and immunodeficient mice (2016)
  • 著者名/発表者名: Yuina Ono, Makoto Matsubayashi, Hiroaki Kawaguchi, Masashi Tsujio, Masanobu Mizuno, Tetsuya Tanaka, Tatsunori Masatani, Toshihiro Matsui, Tomohide Matsuo
  • 雑誌名: Acta Parasitologica 巻: 115(1) 号: 1 ページ: 211-5
  • DOI: 10.1007/s00436-015-4737-z
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Role of the tumor necrosis factor receptor-associated factor-type zinc finger domain containing protein 1 (TRAFD1) from the hard tick Haemaphysalis longicornis in immunity against bacterial infection. (2016)
  • 著者名/発表者名: Takechi R, Galay RL, Matsuo T, Maeda H, Kusakisako K, Talactac MR, Mochizuki M, Fujisaki K, Tanaka T.
  • 雑誌名: Ticks and Tick-borne diseases 巻: 7 号: 1 ページ: 36-45
  • DOI: 10.1016/j.ttbdis.2015.08.002
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] A novel C-type lectin with triple carbohydrate recognition domains has critical roles for the hard tick Haemaphysalis longicornis against Gram-negative bacteria. (2016)
  • 著者名/発表者名: Maeda H, Miyata T, Kusakisako K, Galay RL, Talactac MR, Umemiya-Shirafuji R, Mochizuki M, Fujisaki K, Tanaka T.
  • 雑誌名: Developmental & Comparative Immunology 巻: 57 ページ: 38-47
  • DOI: 10.1016/j.dci.2015.12.015
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Impaired cellular immune response to injected bacteria after knockdown of ferritin genes in the hard tick Haemaphysalis longicornis. (2016)
  • 著者名/発表者名: Galay RL, Takechi R, Umemiya-Shirafuji R, Talactac MR, Maeda H, Kusakisako K, Mochizuki M, Fujisaki K, Tanaka T.
  • 雑誌名: Parasitology International 巻: 65 号: 3 ページ: 251-257
  • DOI: 10.1016/j.parint.2016.01.007
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Virucidal activity of Haemaphysalis longicornis longicin P4 peptide against tick-borne encephalitis virus surrogate Langat virus. (2016)
  • 著者名/発表者名: Talactac MR, Yoshii K, Maeda H, Kusakisako K, Hernandez EP, Tsuji N, Fujisaki K, Galay RL, Tanaka T, Mochizuki M.
  • 雑誌名: Parasit Vectors 巻: 9 号: 1 ページ: 59-59
  • DOI: 10.1186/s13071-016-1344-5
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Improvement of the cryopreservation method for the Babesia gibsoni parasite by using commercial freezing media (2016)
  • 著者名/発表者名: Kusakisako, K., Masatani, T., Yada Y., Talactac, M. R., Hernandez, E. P., Maeda, H., Mochizuki, M. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Parasitol. Int. 巻: In press 号: 5 ページ: 532-535
  • DOI: 10.1016/j.parint.2016.02.012
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Induction of gene silencing in Haemaphysalis longicornis ticks through immersion in double-stranded RNA (2016)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Hernandez, E. P., Talactac, M. R., Maeda, H., Kusakisako, K., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Ticks Tick Borne Dis. 巻: In press 号: 5 ページ: 813-816
  • DOI: 10.1016/j.ttbdis.2016.03.018
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Functional analysis of recombinant 2-Cys peroxiredoxin from the hard tick Haemaphysalis longicornis (2015)
  • 著者名/発表者名: Kusakisako K, Masatani T, Miyata T, Galay RL, Maeda H, Talactac MR, Tsuji N, Mochizuki M, Fujisaki K, Tanaka T.
  • 雑誌名: Insect Molecular Biology 巻: 25 号: 1 ページ: 16-23
  • DOI: 10.1111/imb.12193
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Identification of the Babesia-responsive leucine-rich repeat domain-containing protein from the hard tick Haemaphysalis longicornis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Maeda H, Kurisu K, Miyata T, Kusakisako K, Galay RL, Rio TM, Mochizuki M, Fujisaki K, Tanaka T.
  • 雑誌名: Parasitol. Res. 巻: 114 号: 5 ページ: 1793-1802
  • DOI: 10.1007/s00436-015-4365-7
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The widely distributed hard tick, <i>Haemaphysalis longicornis</i>, can retain canine parvovirus, but not be infected in laboratory condition (2015)
  • 著者名/発表者名: Mori H., Tanaka, T. and Mochizuki, M.
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 77 号: 4 ページ: 405-411
  • DOI: 10.1292/jvms.14-0199
  • NAID: 130005067022
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり
• [雑誌論文] The vector potential of Haemaphysalis longicornis ticks for Babesia microti parasites under experimental condition (2015)
  • 著者名/発表者名: Kusakisako, K., Maeda, H., Galay, R. L., Matsuo, T., Tsujio, M., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: J. Protozool. Res. 巻: In press
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Evaluation and comparison of the potential of two ferritins as anti-tick vaccines against Haemaphysalis longicornis (2014)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Miyata, T., Umemiya-Shirafuji, R., Maeda, H., Kusakisako, K., Tsuji, N., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Parasit. Vectors 巻: 7（1） ページ: 482-482
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Iron metabolism in hard ticks (Acari: Ixodidae): The antidote to their toxic diet (2014)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Parasitol. Int. 巻: 64（2) 号: 2 ページ: 182-189
  • DOI: 10.1016/j.parint.2014.12.005
  • 査読あり
• [学会発表] 病原微生物感染に関与するマダニ生物活性分子について (2015)
  • 著者名/発表者名: 田仲哲也
  • 学会等名: 日本衛生動物学会・日本ダニ学会共催 公開シンポジウム
  • 発表場所: 法政大学(千代田区、東京都)
  • 年月日: 2015-09-11
  • 招待講演
• [学会発表] Virucidal activity of Haemaphysalis longicornis longicin P4 peptide against tick-borne encephalitis virus surrogate Langat virus (2015)
  • 著者名/発表者名: Melbourne Rio Talactac, 好井健太朗, 辻 尚利, 藤崎幸蔵, 田仲哲也, 望月雅美
  • 学会等名: 第158回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 北里大学(八戸市、青森)
  • 年月日: 2015-09-07
• [学会発表] Knockdown of ferritin genes increases the susceptibility of the hard tick Haemaphysalis longicornis to bacterial infection (2015)
  • 著者名/発表者名: Tetsuya Tanaka, Remil Linggatong Galay, Rie Takechi, Rika Umemiya-Shirafuji, Melbourne Rio Talactac, Hiroki Maeda, Kodai Kusakisako, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki
  • 学会等名: World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology Congress 2015
  • 発表場所: The Arena and Convention Centre(Liverpool, UK)
  • 年月日: 2015-08-16
  • 国際学会
• [学会発表] Decreased resistance of Haemaphysalis longicornis ticks to bacterialchallenge after knockdown of ferritin molecules (2015)
  • 著者名/発表者名: Remil Linggatong Galay, 武智理恵, 白藤(梅宮)梨可, Melbourne Rio Talactac, 前田大輝, 草木迫浩大, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • 学会等名: 第23回SADI
  • 発表場所: 名取市文化会館(名取市、宮城)
  • 年月日: 2015-06-26
• [学会発表] フタトゲチマダニ由来ロイシンリッチリピート保有タンパク質(HlLRR)の発現動態とバベシア原虫に及ぼす影響 (2015)
  • 著者名/発表者名: 田仲哲也, 栗巣孔士, 前田大輝, 宮田 健, 草木迫浩大, Remil Linggatong Galay, Melbourne Rio Talactac, 望月雅美, 藤崎幸蔵
  • 学会等名: 第23回SADI
  • 発表場所: 名取市文化会館(名取市、宮城)
  • 年月日: 2015-06-26
• [学会発表] フタトゲチマダニ由来2-Cys型ペルオキシレドキシン (HlPrx2) の抗酸化部位の検索 (2015)
  • 著者名/発表者名: 草木迫浩大, 正谷達謄, 宮田 健, Remil Linggatong Galay, 前田大輝, 辻 尚利, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • 学会等名: 第84回日本寄生虫学会大会
  • 発表場所: 杏林大学(三鷹市、東京都)
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-22
• [学会発表] The role of ferritin in immunity of the ixodid tick Haemaphysalis longicornis injected with Escherichia coli (2015)
  • 著者名/発表者名: Remil Linggatong Galay, Rie Takechi, Rika Umemiya-Shirafuji,Melbourne Rio Talactac, Hiroki Maeda, Kodai Kusakisako, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki, Tetsuya Tanaka
  • 学会等名: 第84回日本寄生虫学会大会
  • 発表場所: 杏林大学(三鷹市、東京都)
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-22
• [学会発表] Identification of the antioxidant active sites of Haemaphysalis longicornis 2-Cys type peroxiredoxin (HlPrx2) (2015)
  • 著者名/発表者名: Kodai Kusakisako, Tatsunori Masatani, Takeshi Miyata, Remil Linggatong Galay, Hiroki Maeda, Naotoshi Tsuji, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki, Tetsuya Tanaka
  • 学会等名: Joint Symposium of the 6th Veterinary Research and the 3rd Veterinary Education among Universities of Veterinary Medicine in East Asia
  • 発表場所: 台湾大学(台北、台湾)
  • 年月日: 2015-02-02 – 2015-02-03
• [学会発表] ラクトフェリンによる抗マラリア原虫機能の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 小森園 亮, 柿本麻美子, 田仲哲也, 李 長春, 渡部久実, Ibrahim Hisham, 若林裕之,山内恒治, 宮田 健
  • 学会等名: 第19回日本フードファクター学会
  • 発表場所: 鹿児島大学(鹿児島市、鹿児島県)
  • 年月日: 2014-11-08 – 2014-11-09
• [学会発表] Identification and characterization of a C-type lectin like protein from the hard tick Haemaphysalis longicornis (2014)
  • 著者名/発表者名: Hiroki Maeda, Takeshi Miyata, Kodai Kusakisako, Remil Linggatong Galay, Rika Umemiya-Shirafuji, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki, Tetsuya Tanaka
  • 学会等名: The 2nd Sapporo Summer Seminar for One Health
  • 発表場所: 北海道大学(札幌市、北海道)
  • 年月日: 2014-09-24 – 2014-09-25
• [学会発表] The critical functions of ferritins in Haemaphysalis longicornis and their potential as target molecules for tick control (2014)
  • 著者名/発表者名: Galay Remil Linggatong, 白藤(梅宮)梨可, 宮田 健, 草木迫浩大, 前田大輝, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • 学会等名: 第157回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 北海道大学(札幌市、北海道)
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [学会発表] フタトゲチマダニ由来2-Cys型ペルオキシレドキシンの機能解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 草木迫浩大, 正谷達謄, Galay Remil Linggatong, 前田大輝, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • 学会等名: 第157回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 北海道大学(札幌市、北海道)
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [学会発表] フタトゲチマダニ由来TNF Receptor Associated Factor(TRAF)の同定とその役割について (2014)
  • 著者名/発表者名: 武智理恵, Galay Remil Linggatong, 前田大輝, 草木迫浩大, 松尾智英, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • 学会等名: 第157回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 北海道大学(札幌市、北海道)
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [学会発表] フタトゲチマダニ由来Ｃ型レクチン様蛋白質の動態および機能解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 前田大輝, 宮田健, 草木迫浩大, Remil Linggatong Galay, 白藤(梅宮)梨可, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • 学会等名: 第22回分子寄生虫学ワークショップ第12回分子寄生虫・マラリア研究フォーラム合同大会
  • 発表場所: 帯広畜産大学(帯広市、北海道)
  • 年月日: 2014-08-31 – 2014-09-03
• [学会発表] フタトゲチマダニ由来 2-Cys 型ペルオキシレドキシンの動態 (2014)
  • 著者名/発表者名: 草木迫浩大, 正谷達謄, Remil Linggatong Galay, 前田大輝, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • 学会等名: 第22回分子寄生虫学ワークショップ第12回分子寄生虫・マラリア研究フォーラム合同大会
  • 発表場所: 帯広畜産大学(帯広市、北海道)
  • 年月日: 2014-08-31 – 2014-09-03
• [学会発表] The potential of recombinant ferritin 1 and ferritin 2 as anti-tick vaccine against Haemaphysalis longicornis (2014)
  • 著者名/発表者名: Remil Linggatong Galay, Takeshi Miyata, Rika Umemiya-Shirafuji, Hiroki Maeda, Kodai Kusakisako, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki, Tetsuya Tanaka
  • 学会等名: TTP8: Ticks and Tick-Borne Pathogens
  • 発表場所: Cape Sun hotel(Cape Town, South Africa)
  • 年月日: 2014-08-24 – 2014-08-29
• [学会発表] The iron-storage and antioxidant functions of two types of ferritin are critical to successful blood feeding and reproduction of the ixodid tick Haemaphysalis longicornis (2014)
  • 著者名/発表者名: Galay Remil Linggatong, Umemiya-Shirafuji Rika, Maeda Hiroki, Kusakisako Kodai, Mochizuki Masami, Fujisaki Kozo, Tanaka Tetsuya
  • 学会等名: The XIIIth International Congress of Parasitoplogy
  • 発表場所: Camino Real Hotel（Mexico City,Mexico)
  • 年月日: 2014-08-10 – 2014-08-15
• [学会発表] Ticks survive at a threshold between engorgement and starvation (2014)
  • 著者名/発表者名: Kozo Fujisaki, Naotoshi Tsuji, Xuenan Xuan, Rika Shirafuji-Umemiya, Damdinsuren Boldbaatar, Tetsuya Tanaka, Takeshi Hatta, Banzragch Battur, Badgar Battsetseg
  • 学会等名: 14th International Congress of Acarology
  • 発表場所: 京都テルサ(京都市、京都府)
  • 年月日: 2014-07-14 – 2014-07-18
  • 招待講演
• [図書] Vaccine Design: Methods and Protocols (2016)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Miyata, T., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 総ページ数: 848
  • 出版者: Springer New York
• [図書] RNA Interference (2016)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Miyata, T., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 総ページ数: 460
  • 出版者: InTech-Open Access Publisher
• [図書] 第2章 免疫の概念（獣医学教育モデル・コア・カリキュラム準拠 獣医免疫学） (2015)
  • 著者名/発表者名: 田仲哲也、池田輝雄、岡本まり子、松本安喜（編集：池田輝雄、小川健司、松本安喜）
  • 総ページ数: 17
  • 出版者: （株）緑書房
• [図書] 第6章 節足動物各論I（ダニ）（獣医学教育モデル・コア・カリキュラム準拠 寄生虫病学) (2014)
  • 著者名/発表者名: 田仲哲也 （編集：堀井洋一郎、野中成晃、加藤大智、平 恵介、松本 淳、横山直明）
  • 総ページ数: 5
  • 出版者: （株）緑書房
• [備考] 鹿児島大学 共同獣医学部獣医学科 病態予防獣医学講座 感染症学分野
  • URL: http://www.vet.kagoshima-u.ac.jp/kadai/V-infection/sinkoukansen/top.html
• [備考] 鹿児島大学 共同獣医学部獣医学科 病態予防獣医学講座 感染症学分野
  • URL: http://www.vet.kagoshima-u.ac.jp/kadai/V-infection/sinkoukansen/research.html