体系的・多遺伝子同時改変マウス作製法開発によるアドレノメデュリンRAMP機能解明

• 研究課題/領域番号: 26670153
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 病態医化学
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 桜井 敬之 信州大学, 学術研究院医学系, 准教授 (80317825)
• 研究分担者: 新藤 隆行 信州大学, 学術研究院医学系, 教授 (90345215)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円); 2015年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2014年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
• キーワード: 疾患モデル動物 / 遺伝子改変マウス / CRISPR / Cas9 / ゲノム編集 / 発生工学 / アドレノメデュリン / RAMP / 受容体修飾因子 / 血管作動性ペプチド / CRISPR/Cas9 / 血管作動性ペプチト

研究成果の概要

本研究で、我々はCRISPR/Cas9 システムによる多遺伝子同時改変マウス作製法の確立を目指して、単一胚盤胞遺伝子アッセイ系など周辺技術を構築し、全身にCas9を過剰発現するTgマウスの樹立(sCAT)と、その受精卵内の非遺伝性の母性Cas9の活用を試みた。その結果、受精卵内へ異なる９種のgRNAの同時注入だけでこれら全標的遺伝子座を同時編集できることを示した。併せてsCATマウスは細胞から器官・個体レベルまでCRISPR/Cas9によるゲノム編集研究のための有用なリソースとなることを示した。

研究成果

• [雑誌論文] A non-inheritable maternal Cas9-based multiple-gene editing system in mice (2016)
  • 著者名/発表者名: Sakurai T, Kamiyoshi A, Kawate H, Mori C, Watanabe S, Tanaka M, Uetake R, Sato M, Shindo T.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 6 号: 1 ページ: 20011-20011
  • DOI: 10.1038/srep20011
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rac1-Mediated Activation of Mineralocorticoid Receptor in Pressure Overload-Induced Cardiac Injury (2016)
  • 著者名/発表者名: Nobuhiro Ayuzawa, Miki Nagase, Kohei Ueda, Mitsuhiro Nishimoto, Wakako Kawarazaki, Takeshi Marumo, Atsu Aiba, Takayuki Sakurai, Takayuki Shindo, Toshiro Fujita
  • 雑誌名: Hypertension 巻: 67 号: 1 ページ: 99-106
  • DOI: 10.1161/hypertensionaha.115.06054
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] アドレノメデュリン-RAMP2シグナル (2016)
  • 著者名/発表者名: 新藤隆行、桜井敬之、神吉昭子、新藤優佳、田中愛、劉甜、小山晃英
  • 雑誌名: 細胞工学 巻: 35 ページ: 33-38
• [雑誌論文] Generation of α-1,3-galactosyltransferase-deficient porcine embryonic fibroblasts by CRISPR/Cas9-mediated knock-in of a small mutated sequence and a targeted toxin-based selection system. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Kagoshima A, Saitoh I, Inada E, Miyoshi K, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Domestic Animal Reproduction 巻: 50 号: 5 ページ: 872-880
  • DOI: 10.1111/rda.12565
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Direct injection of CRISPR/Cas9-related mRNA into cytoplasm of parthenogenetically activated porcine oocytes causes frequent mosaicism for indel mutations. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Koriyama M, Watanabe S, Ohtsuka M, Sakurai T, Inada E, Saitoh I, Nakamura S, Miyoshi K
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences, 巻: 16 号: 8 ページ: 17838-17856
  • DOI: 10.3390/ijms160817838
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] A combination of targeted toxin technology and the piggyBac-mediated gene transfer system enables efficient isolation of stable transfectants in nonhuman mammalian cells (2015)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Inada E, Saitoh I, Matsumoto Y, Ohtsuka M, Miura H, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Biotechnolgy Journal 巻: 10 号: 1 ページ: 143-153
  • DOI: 10.1002/biot.201400283
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Adrenomedullin-RAMP2 System in Vascular Endothelial Cells (2015)
  • 著者名/発表者名: Koyama T, Sakurai T, Kamiyoshi A, Ichikawa-Shindo Y, Kawate H, Shindo T.
  • 雑誌名: Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ 巻: 22 号: 7 ページ: 647-653
  • DOI: 10.5551/jat.29967
  • NAID: 130005089126
  • ISSN: 1340-3478, 1880-3873
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] アドレノメデュリン-RAMP2系の病態生理学的意義 (2015)
  • 著者名/発表者名: 新藤優佳、桜井敬之、神吉昭子、河手久香、小山晃英、吉沢隆浩、新藤隆行
  • 雑誌名: お茶の水医学雑誌 巻: 63 ページ: 331-338
• [雑誌論文] A single blastocyst assay optimized for detecting CRISPR/Cas9 system-induced indel mutations in mice (2014)
  • 著者名/発表者名: Sakurai T, Watanabe S, Kamiyoshi A, Sato M, Shindo T
  • 雑誌名: BMC Biotechnology 巻: 14 号: 1 ページ: 69-69
  • DOI: 10.1186/1472-6750-14-69
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The combinational use of CRISPR/Cas9-based gene editing and targeted toxin technology enables efficient biallelic knockout of theα-1,3-galactosyltransferase gene in porcine embryonic fibroblasts (2014)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Miyoshi K, Nagao Y, Nishi Y, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Xenotransplantation 巻: 21 FEB( Article first published online) 号: 3 ページ: 291-300
  • DOI: 10.1111/xen.12089
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] アドレノメデュリン-RAMP2システムは、褐色脂肪細胞の細胞分化とエネルギー代謝を制御する (2016)
  • 著者名/発表者名: 神吉昭子、桜井敬之、新藤優佳、河手久香、田中愛、劉甜、羨鮮、今井章、テキ留玉、平林一貴、大和慎治、戴昆、 崔南奇、劉騰、五十嵐恭子、山内啓弘、新藤隆行
  • 学会等名: 第45回日本心脈管作動物質学会
  • 発表場所: 阿波観光ホテル (徳島県徳島市)
  • 年月日: 2016-02-05
• [学会発表] アドレノメデュリン-RAMP2システムは、白色および褐色脂肪の脂質代謝と分化を制御する (2015)
  • 著者名/発表者名: 神吉昭子、桜井敬之、田中愛、劉甜、羨鮮、今井章、テキ留玉、平林一貴、大和慎治、新藤隆行
  • 学会等名: 第19回日本心血管内分泌代謝学会
  • 発表場所: 神戸国際会議場 (兵庫県神戸市)
  • 年月日: 2015-12-10
• [学会発表] zygote injectionに依らない生殖細胞、胚を標的とした遺伝子導入によるCRISPR/Cas9 genome editingの可能性 (2015)
  • 著者名/発表者名: 佐藤 正宏、大塚正人、中村 伸吾、桜井 敬之、稲田 絵美、齋藤 一誠、渡部 聡
  • 学会等名: 第38回日本分子生物学会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド (兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] アドレノメデュリン-RAMP2システムによる白色脂肪と褐色脂肪の脂質代謝と分化制御 (2015)
  • 著者名/発表者名: 神吉昭子、桜井敬之、河手久香、新藤優佳、山内啓弘、五十嵐恭子、田中愛、劉甜、羨鮮、今井章、Liuyu Zhai、平林一貴、大和慎治、新藤隆行
  • 学会等名: 第３６回日本肥満学会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場 (愛知県名古屋市)
  • 年月日: 2015-10-02
• [学会発表] Adrenomedullin reduces VEGF-induced retinal vascular hyperpermeability (2015)
  • 著者名/発表者名: Akira Imai, Yuichi Toriyama, Yasuhiro Isesato, Takayuki Sakurai, Akiko Kamiyoshi, Yuka Ichikawa-Shindo, Hisaka Kawate, Takayuki Shindo, Toshinori Murata
  • 学会等名: ARVO 2015 Annual Meeting
  • 発表場所: Colorado Convention Center (Colorado , USA)
  • 年月日: 2015-05-03
• [学会発表] Pathophysiological Function of Endogenous Calcitonin Gene-related Peptide in Ocular Vascular Diseases (2015)
  • 著者名/発表者名: Yuichi Toriyama, Yasuhiro Isesato, Akira Imai, Takayuki Sakurai, Akiko Kamiyoshi, Yuka Ichikawa-Shindo, Hisaka Kawate, Akihiro Yamauchi, Kyoko Igarashi, Megumu Tanaka, Tian Liu, Xian Xian, Liuyu Zhai, Shinji Owa, Toshinori Murata, Takayuki Shindo
  • 学会等名: 第79回日本循環器学会
  • 発表場所: 大阪国際会議場 (大阪府大阪市)
  • 年月日: 2015-04-24
• [学会発表] アドレノメデュリン-RAMP2システムによる白色脂肪と褐色脂肪の脂質、エネルギー代謝制御 (2015)
  • 著者名/発表者名: 神吉昭子、桜井敬之、新藤優佳、河手久香、山内啓弘、五十嵐恭子、鳥山佑一、田中愛、劉甜、羨鮮、今井章、Liuyu Zhai、大和慎治、新藤隆行
  • 学会等名: 第88回日本内分泌学会
  • 発表場所: ホテルニューオオタニ東京 (東京都千代田区)
  • 年月日: 2015-04-23
• [学会発表] 網膜血管透過性亢進に対するアドレノメデュリンの抑制作用 (2015)
  • 著者名/発表者名: 今井章、鳥山佑一、家里康弘、桜井敬之、神吉昭子、新藤優佳、河手久香、新藤隆行、村田敏規
  • 学会等名: 第119回日本眼科学会総会
  • 発表場所: ロイトン札幌 (北海道札幌市)
  • 年月日: 2015-04-16
• [学会発表] アドレノメデュリン-RAMP2システムは、白色脂肪―褐色脂肪間の脂質、エネルギー代謝を制御する (2015)
  • 著者名/発表者名: 神吉昭子、桜井敬之、新藤優佳、河手久香、山内啓弘、五十嵐恭子、鳥山佑一、田中愛、劉甜、羨鮮、今井章、テキ留玉、大和慎治、新藤隆行
  • 学会等名: 第44回日本心脈管作動物質学会
  • 発表場所: 高松センタービル (香川)
  • 年月日: 2015-02-06 – 2015-02-07
• [学会発表] アドレノメデュリン-RAMP2システムは、白色脂肪―褐色脂肪間の脂質、エネルギー代謝バランスを制御する (2014)
  • 著者名/発表者名: 神吉昭子、桜井敬之、新藤優佳、河手久香、劉甜、羨鮮、今井章、テキ留玉、大和慎治、新藤隆行
  • 学会等名: 第18回日本心血管内分泌代謝学会
  • 発表場所: 横浜パシフィコ横浜 (横浜)
  • 年月日: 2014-11-21 – 2014-11-22
• [学会発表] アドレノメデュリン-RAMP2システムによる白色脂肪と褐色脂肪組織における脂質代謝制御 (2014)
  • 著者名/発表者名: 神吉昭子、桜井敬之、新藤優佳、河手久香、山内啓弘、五十嵐恭子、鳥山佑一、田中愛、劉甜、羨鮮、今井章、テキ留玉、大和慎治、新藤隆行
  • 学会等名: 第35回日本肥満学会
  • 発表場所: シーガイアコンベンションセンター (宮崎)
  • 年月日: 2014-10-24 – 2014-10-25
• [学会発表] アドレノメデュリン-RAMP2システムによる脂質、エネルギー代謝調節 (2014)
  • 著者名/発表者名: 神吉昭子、桜井敬之、河手久香、新藤優佳、植竹龍一、山内啓弘、五十嵐恭子、鳥山佑一、田中愛、劉甜、羨鮮、今井章、新藤隆行
  • 学会等名: 第87回日本内分泌学会
  • 発表場所: 福岡国際会議場 (福岡)
  • 年月日: 2014-04-24 – 2014-04-26
• [学会発表] Adrenomedullin-RAMP2 system regulates lipid and energy metabolism in white and brown adipocytes (2014)
  • 著者名/発表者名: Kamiyoshi A, Sakurai T, Ichikawa-Shindo Y, Kawate H, Uetake R, Yamauchi A, Igarashi K, Toriyama Y, Tanaka M, Imai A, Liu T, Xian X, Shindo T.
  • 学会等名: The 18th International Vascular Biology Meeting
  • 発表場所: 京都国際会館 (京都)
  • 年月日: 2014-04-14 – 2014-04-17
• [備考] 信州大学大学院医学系研究科循環病態学教室
  • URL: http://www7a.biglobe.ne.jp/~shindo/
• [備考] 信州大学大学院医学系博士課程 疾患予防医科学系専攻 循環病態学
  • URL: http://www.shinshu-u.ac.jp/graduate/medicine/doctoral/m-science/saisei.html
• [備考] 信州大学大学院医学系博士課程 疾患予防医科学系専攻 循環病態学
  • URL: http://www.shinshu-u.ac.jp/graduate/medicine/doctoral/m-science/saisei.html