α-Cre相補とフレームオーバーラップ発現法の開発

• 研究課題/領域番号: 26670221
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 斎藤 泉 東京大学, 医科学研究所, 教授 (70158913)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円); 2015年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2014年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
• キーワード: B型肝炎ウイルス / split Cre / α相補 / 蛍光スクリーニング / HBV創薬 / Ｂ型肝炎ウイルス / preS / ウイルスゲノム複製

研究成果の概要

B型肝炎ウイルス（HBV）ゲノムを可視化する目的で、PreS蛋白領域をCre遺伝子の前半部分（α-Cre）または後半部分（β-Cre）に置き換えたHBVゲノムを作製した。分断Creのサイズは本来のCreの半分であり、両者を同時発現するとCre活性を生ずる。この分断Creを、HBVのPol遺伝子のフレームを温存しながらゲノムサイズをあまり大きくせずに置換した。作製されたHBVゲノムは分断Creを発現し、他方の分断Creをゲノムの外から供給するとCre活性を示し、GFPの発現をオンにした。ここで開発されたHBVゲノムは抗HBV薬剤の蛍光スクリーニングに道を開くと考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] Establishment of a tamoxifen-inducible Cre-driver mouse strain for widespread and temporal genetic modification in adult mice (2016)
  • 著者名/発表者名: Hirotake Ichise, Akiko Hori, Seiji Shiozawa, Saki Kondo, Yumi Kanegae, Izumu Saito, Taeko Ichise, and Nobuaki Yoshida
  • 雑誌名: Experimental Animals 巻: 65 号: 3 ページ: 231-244
  • DOI: 10.1538/expanim.15-0126
  • NAID: 130006882370
  • ISSN: 0007-5124, 1341-1357, 1881-7122
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Single-domain Intrabodies against HCV Core Inhibit Viral Propagation and Core-induced NF-κB Activation (2016)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Saito K, Matsuda M, Sato M, Kanegae Y, Shi G, Watashi K, Aizaki H, Chiba J, Saito I, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Gen Virol 巻: 印刷中 号: 4 ページ: 887-892
  • DOI: 10.1099/jgv.0.000423
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Preferable sites and orientations of transgene inserted in the adenovirus vector genome : The E3 site may be unfavorable for transgene position (2015)
  • 著者名/発表者名: M Suzuki, S Kondo, Z Pei, A Maekawa, I Saito and Y Kanegae
  • 雑誌名: Gene Therapy 巻: 1 号: 5 ページ: 1-9
  • DOI: 10.1038/gt.2014.124
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Structural determinants in GABARAP required for the selective binding and recruitment of ALFY to LC3B-positive structures. (2014)
  • 著者名/発表者名: Lystad, AH., Ichimura, Y., Takagi, K., Yang, Y., Pankiv, S., Kanegae, Y., Kageyama, S., Suzuki, M., Saito, I., Mizushima,T., *Komatsu, M., *Simonsen, A.
  • 雑誌名: EMBO Rep. 巻: 15 号: 5 ページ: 557-565
  • DOI: 10.1002/embr.201338003
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Adenovirus-encoding virus-associated RNAs suppress HDGF gene expression to support efficient viral replication. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kondo S, Yoshida K, Suzuki M, Saito I, Kanegae Y
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9 号: 10 ページ: e108627-e108627
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0108627
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Amphipathic α-Helices in Apolipoproteins Are Crucial to the Formation of Infectious Hepatitis C Virus Particles (2014)
  • 著者名/発表者名: Fukuhara T, Wada M, Nakamura S, Ono C, Shiokawa M, Yamamoto S, Motomura T, Okamoto T, Okuzaki D, Yamamoto M, Saito I, Wakita T, Koike K, Matsuura Y
  • 雑誌名: PLoS Pathog 巻: 10(12) 号: 12 ページ: e1004534-e1004534
  • DOI: 10.1371/journal.ppat.1004534
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] Efficient production of the replicating HBV genome using "HBV-AdV System" (2015)
  • 著者名/発表者名: Suzuki M., Kondo S., Yamasaki M., Saito I., Shibasaki M. and Kanegae Y.
  • 学会等名: 2015 International Meeting Molecular Biology of Hepatitis B Viruses
  • 発表場所: Bad Nauheim Germany
  • 年月日: 2015-10-04
  • 国際学会
• [学会発表] Multiplex guide RNAs targeting HBV genome expressed using adenovirus vector improve the efficiency of CRISPR/Cas9 system (2015)
  • 著者名/発表者名: Maekawa A., Kondo S., Suzuki M., Saito I. and Kanegae Y.
  • 学会等名: 2015 International Meeting Molecular Biology of Hepatitis B Viruses
  • 発表場所: Bad Nauheim Germany
  • 年月日: 2015-10-04
  • 国際学会
• [学会発表] アデノウイルスベクターを用いた定量的HBV複製ccc及びrcゲノム検出法の開発 (2014)
  • 著者名/発表者名: 近藤小貴、鈴木まりこ、山崎学、鐘ヶ江裕美、野本明男、斎藤泉
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
• [学会発表] アデノウイルス感染初期におけるvirus-associated RNAの役割 (2014)
  • 著者名/発表者名: 近藤小貴、鈴木まりこ、前川文、斎藤泉、鐘ヶ江裕美
  • 学会等名: 第62回日本ウイルス学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-11-10 – 2014-11-12
• [学会発表] アデノウイルスベクターを用いた効率的なHBVゲノム複製解析システムの開発：cocalently closed circular DNA (CCC)の検出 (2014)
  • 著者名/発表者名: 鈴木まりこ、近藤小貴、山崎学、鐘ヶ江裕美、野本明男、斎藤泉
  • 学会等名: 第62回日本ウイルス学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-11-10 – 2014-11-12
• [学会発表] Development of new methods to detect the replication HBV genome in the cells infected with adenovirus vector expressing pregenome RNA. (2014)
  • 著者名/発表者名: Suzuki M, Kondo S, Yamasaki M, Kanegae Y, Nomoto A, and Saito I.
  • 学会等名: 2014 International Meetin on Molecular Biology of Hepatitis B Virus
  • 発表場所: UCLA , Los Angeles, California, USA
  • 年月日: 2014-09-03 – 2014-09-06
• [学会発表] Development of a novel adenovirus vector for cancer-specific and stable expression: mini-adenovirus vector (mini-AdV). (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoshioka T, Maekawa A, Suzuki M, Kondo S, Kanegae Y, and Saito I.
  • 学会等名: The 20th Annual Meeting of Japan Society of Gene Therapy
  • 発表場所: 東京慈恵会医科大学
  • 年月日: 2014-08-06 – 2014-08-08
• [学会発表] Dually safer adenovirus vector lacking virus-associated RNA genes with significantly low immune responses. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kondo S, Maekawa A, Suzuki M, Saito I, and Kanegae Y.
  • 学会等名: he 20th Annual Meeting of Japan Society of Gene Therapy
  • 発表場所: 東京慈恵会医科大学
  • 年月日: 2014-08-06 – 2014-08-08
• [備考] 東京大学医科学研究所遺伝子解析施設
  • URL: http://www.ims.u-tokyo.ac.jp/idenshi/pg154.html
• [産業財産権] 複数のユニットが多重に連結したDNAカセットおよび該カセットをを含むベクターの製造方法 (2014)
  • 発明者名: 斎藤 泉
  • 権利者名: 国立大学法人東京大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 2014-242914
  • 出願年月日: 2014-12-01