内在性レトロウイルスの制御に関する研究

• 研究課題/領域番号: 26670582
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 外科学一般
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 宮川 周士 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90273648)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円); 2015年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: ブタ内在性レトロウィルス(PERVｓ) / CRISPR/CRシステム / OFF Targetting効果 / Gag-pol / ブタ内在性レトロウィルス(PERVs) / CRISPR/ＣＲシステム / OFF Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ効果 / ブタ内在性レトロウイルス（PERVs） / CRISPR/CS システム / Off targeting 効果

研究成果の概要

CRISPRシステムによるPERVのknockoutを試みた。PERV遺伝子のgagおよびpolの領域においてknockout効率の高いターゲット配列 (gRNA) をそれぞれ1か所ずつ選定し、pX330 = U6-gRNA+Cas9+neomycinを作製した。次に、gag領域をターゲットとしたplasmidを、PK15細胞にtransfectionし、neomycinによるselection後、17個のクローンを得た。Integrateされているクローンは15個に絞られた。さらにこれらクローンのgag-KO領域をダイレクトシークエンスした結果、1個のクローンのgag領域に変異を確認できた。

研究成果

• [雑誌論文] Knockout of cytidine monophospho-N-acetylneuraminic acid (CMP-NeuAc) hydroxylase from porcine endothelial cells by a CRISPR system. (2016)
  • 著者名/発表者名: Rieko Sakai, Yoko Esaki, Hidetoshi Hasuwa, Masahiko Ikawa, Pei-chi Lo, Rei Matsuura, KengoNakahata, Masahiro Zenitani, Mayumi Asada, Akira Maeda, Hiroshi Eguchi, HiroomiOkuyama and Shuji Miyagawa.
  • 雑誌名: Transplant Proc. 2016 巻: ( in press)
  • 査読あり
• [学会発表] CRISPR 法によるブタ内在性レトロウイルス（PERV）の制御の試み (2016)
  • 著者名/発表者名: 宮川周士、坂井理恵子、LO PEI-CHI、蓮輪英毅、松浦 玲、中畠賢吾、山中和明、前田 晃、江口 寛、浅田麻友美、伊川 正人、長嶋比呂志、奥山宏臣
  • 学会等名: 日本外科学会（116）
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2016-04-14