ヒトiPS細胞由来肝臓の成熟過程の解析を目指したライブイメージング系の構築

• 研究課題/領域番号: 26670585
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 外科学一般
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 関根 圭輔 横浜市立大学, 医学部, 助教 (00323569)
• 研究分担者: 武部 貴則 横浜市立大学, 医学部, 准教授 (20612625)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円); 2015年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: 再生医療 / 細胞・組織 / 再生医学 / 幹細胞 / 肝疾患

研究成果の概要

本研究ではノックインiPS細胞を作製するためのiPS細胞培養のフィーダーフリー化、トランスフェクション条件の検討を実施し、最適な条件を決定した。次にヒトiPS細胞で恒常的に蛍光タンパク質を発現するiPS細胞を複数樹立し、分化誘導後も発現が維持されることを確認した。さらに、分化マーカーに対するノックイン細胞を樹立し、当初予定していた肝分化状態を可視化可能なノックインiPS細胞の樹立に成功した。今後作製した細胞を用いてiPSC肝芽のより最適な作製時期の評価などに使用出来ると期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Fluorescent labeling and visualization of human induced pluripotent stem cells with the use of transcription activator-like effector nucleases. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sekine K, Takebe T, Taniguchi H.
  • 雑誌名: Transplant Proc. 巻: 46 号: 4 ページ: 1205-1207
  • DOI: 10.1016/j.transproceed.2014.02.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] Polycomb group protein Ezh2 regulates hepatic progenitor cell proliferation and differentiation in murine embryonic liver. (2014)
  • 著者名/発表者名: Koike H, Ouchi R, Ueno Y, Nakata S, Obana Y, Sekine K, Zheng YW, Takebe T, Isono K, Koseki H, Taniguchi H.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 9 号: 8 ページ: 0-2
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0104776
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Tropism of cancer stem cells to a specific distant organ. (2014)
  • 著者名/発表者名: Okuda R, Sekine K, Hisamatsu D, Ueno Y, Takebe T, Zheng YW, Taniguchi H.
  • 雑誌名: In Vivo. 巻: 28 ページ: 361-365
  • 査読あり
• [雑誌論文] Efficient hepatic differentiation of human induced pluripotent stem cells in a three-dimensional microscale culture. (2014)
  • 著者名/発表者名: Zhang RR, Takebe T, Miyazaki L, Takayama M, Koike H, Kimura M, Enomura M, Zheng YW, Sekine K, Taniguchi H.
  • 雑誌名: Methods Mol Biol. 巻: 1210 ページ: 131-141
  • DOI: 10.1007/978-1-4939-1435-7_10
  • ISBN: 9781493914340, 9781493914357
  • 査読あり
• [雑誌論文] The evidence of sophisticatedly heterogeneous population of human umbilical vein endothelial cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Zheng YW, Nie YZ, Tsuchida T, Zhang RR, Aoki K, Sekine K, Ogawa M, Takebe T, Ueno Y, Sakakibara H, Hirahara F, Taniguchi H
  • 雑誌名: Transplant Proc 巻: 46 号: 4 ページ: 1251-3
  • DOI: 10.1016/j.transproceed.2013.11.077
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of Proliferating Human Hepatic Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Zhang RR, Takebe T, Sekine K, Koike H, Zheng YW, Taniguchi H
  • 雑誌名: Transplant Proc 巻: 46(4) 号: 4 ページ: 1201-4
  • DOI: 10.1016/j.transproceed.2013.12.021
  • 査読あり
• [雑誌論文] The development of humanized liver with Rag1 knockout rats. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida T, Zheng YW, Zhang RR, Takebe T, Ueno Y, Sekine K, Taniguchi H
  • 雑誌名: Transplant Proc 巻: 46 号: 4 ページ: 1191-3
  • DOI: 10.1016/j.transproceed.2013.12.026
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] High-resolution intravital imaging for monitoring the transplanted islets in mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takahashi Y, Takebe T, Enomura M, Koike N, Lee S, Nemeno JG, Sekine K, Lee JI, Taniguchi H.
  • 雑誌名: Transplant Proc. 巻: 46 号: 4 ページ: 1166-1168
  • DOI: 10.1016/j.transproceed.2013.11.089
  • 査読あり
• [雑誌論文] The CD133+CD44+ Precancerous Subpopulation of Oval Cells is a Therapeutic Target for Hepatocellular Carcinoma (2014)
  • 著者名/発表者名: Zheng YW, Tsuchida T, Shimao T, Li B, Takebe T, Zhang RR, Sakurai Y, Ueno Y, Sekine K, Ishibashi N, Imajima M, Tanaka T, and Taniguchi H
  • 雑誌名: Stem Cells Dev 巻: (In press) 号: 18 ページ: 2237-2249
  • DOI: 10.1089/scd.2013.0577
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Ring1B Promotes Hepatic Stem/Progenitor Cell Expansion via Simultaneous Suppression of Cdkn1a and Cdkn2a. (2014)
  • 著者名/発表者名: Koike H, Ueno Y, Naito T, Shiina T, Nakata S, Ouchi R, Obana Y, Sekine K, Zheng YW, Takebe T, Isono K, Koseki H, Taniguchi H
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 印刷中 号: 1 ページ: 323-333
  • DOI: 10.1002/hep.27046
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Generation of a vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takanori Takebe*, Ran-Ran Zhang, Hiroyuki Koike, Masaki Kimura, Emi Yoshizawa, Masahiro Enomura, Keisuke Sekine, Hideki Taniguchi*(*: Correspondence)
  • 雑誌名: Nature Protocols 巻: 9(2) 号: 2 ページ: 396-409
  • DOI: 10.1038/nprot.2014.020
  • 査読あり
• [学会発表] シングルセルRNAシークエンスによるiPS細胞由来肝細胞のポピュレーション解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: 関根圭輔、J. Gray Camp、Barbara Treutlein、武部 貴則、谷口 英樹
  • 学会等名: 第15回日本再生医療学会総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場(大阪府大阪市)
  • 年月日: 2016-03-17
• [学会発表] Generation of functional human liver from pluripotent stem cell (2016)
  • 著者名/発表者名: Keisuke Sekine, Takanori Takebe, Hideki Taniguchi
  • 学会等名: German Association for the Study of the Liver (GASL) workshop
  • 発表場所: Dusseldorf(ドイツ)
  • 年月日: 2016-01-21
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] iPS細胞を用いた代謝性臓器の再生医療 (2015)
  • 著者名/発表者名: 関根圭輔
  • 学会等名: 第30回日本整形外科学会基礎学術総会
  • 発表場所: 富山市民プラザ(富山県富山市)
  • 年月日: 2015-10-22
  • 招待講演
• [学会発表] Pdx1+ cells behave as pancreatic cancer stem cells with high tumorigenicity and metastatic potential (2015)
  • 著者名/発表者名: Ryo Okuda, Keisuke Sekine, Lue Sun , Kaori Hamanaka, Hideki Taniguchi
  • 学会等名: 第74回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場(愛知県名古屋市)
  • 年月日: 2015-10-08
• [学会発表] Metastatic tropism of pancreatic cancer stem cells to a specific distant organ. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ryo Okuda, Keisuke Sekine, Kaori Hamanaka, Hideki Taniguchi.
  • 学会等名: The Biology of Cancer: Microenvironment, Metastasis & Therapeutics
  • 発表場所: New York (米国)
  • 年月日: 2015-05-12
  • 国際学会
• [学会発表] iPS細胞を用いた代謝性臓器の再生医療 (2015)
  • 著者名/発表者名: 武部貴則、関根圭輔、谷口英樹
  • 学会等名: 第14回日本再生医療学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 2015-03-19 – 2015-03-21
  • 招待講演
• [学会発表] A novel system with human liver features for screening anti-hepatitis B virus therapeutics (2015)
  • 著者名/発表者名: Nie YZ,Zheng YW,kZhang RR,Tsuchida T,Ueno Y、Sekine K,Takebe T,Taniguchi H
  • 学会等名: 第14回日本再生医療学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 2015-03-19 – 2015-03-21
• [学会発表] 膵癌転移における微小環境と癌幹細胞の相互作用の解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 濱中香織、奥田諒、関根圭輔、谷口英樹
  • 学会等名: 第14回日本再生医療学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 2015-03-19 – 2015-03-21
• [学会発表] 膵癌幹細胞の転移における特定臓器への指向性 (2015)
  • 著者名/発表者名: 泉陽彦、竹歳卓人、関根圭輔、奥田諒、濱中香織、谷口英樹
  • 学会等名: 第14回日本再生医療学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 2015-03-19 – 2015-03-21
• [学会発表] 遺伝子改変モデル動物を用いた膵癌幹細胞の機能解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 関根圭輔、奥田諒、久松大介、濱中香織、谷口英樹
  • 学会等名: 第41回日本臓器保存生物医学会学術集会
  • 発表場所: 千里ライフサイエンスセンター(大阪府)
  • 年月日: 2014-11-28 – 2014-11-29
  • 招待講演
• [学会発表] Identification and characterization of Pdx1+ pancreatic cancer stem cell during pancreatic tumorigenesis (2014)
  • 著者名/発表者名: 関根圭輔、奥田諒、久松大介、谷口英樹
  • 学会等名: The 73rd Annual Meeting of the Japanese Cancer Association.
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] スフィア形成能を有する膵癌幹細胞の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 久松大介、奥田諒、関根圭輔、濵中香織、上野康晴、谷口英樹
  • 学会等名: The 73rd Annual Meeting of the Japanese Cancer Association.
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] Identification of pancreatic cancer stem cell lineage during pancreatic tumorigenesis (2014)
  • 著者名/発表者名: 奥田諒、関根圭輔、久松大介、孫略、濵中香織、谷口英樹
  • 学会等名: The 73rd Annual Meeting of the Japanese Cancer Association.
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [産業財産権] 癌微小環境を再現できる癌組織の再構築法 (2016)
  • 発明者名: 谷口英樹、関根圭輔、上野康晴、奥田諒、武部貴則
  • 権利者名: 谷口英樹、関根圭輔、上野康晴、奥田諒、武部貴則
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2016-03-16
• [産業財産権] 血液細胞を用いた組織・臓器の作製方法 (2015)
  • 発明者名: 谷口英樹、武部貴則、関根圭輔、鄭允文、聶運中
  • 権利者名: 谷口英樹、武部貴則、関根圭輔、鄭允文、聶運中
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2015-12-24